Vér és immunsejtek Vérkenet készítés (gyakorlat) Fejszák Nóra fejszak.nora@med.semmelweis-univ.hu Semmelweis Egyetem Humánmorfológiai és Fejlődésbiológiai Intézet Egészségügyi Informatikus szak 2012. 12. 10.

Ismétlés Lymphocyták Thrombocyták Monocyták Vörösvértestek Kerek sejtmag Kevés citoplazma Immunfunkció Thrombocyták Monocyták Vese alakú sejtmag Makrophaggá alakul Fagocitózis Vörösvértestek Nincs sejtmagjuk Bikonkáv alak O2 és CO2 szállítás Eosinophil granulocyta Kétlebenyű sejtmag Eozinophilen festődő granulumok Paraziták ellen Basophil granulocyta U alakú sejtmag Basophilen festődő granulumok Allergiás reakciókban Neutrophil granulocyta 3-5 lebenyű sejtmag Jellegtelen festődésű granulumok Fagocitózis

Vérkenet a diagnosztikában Rutineljárás! Kvalitatív vérkép: a fehérvérsejtek sejttípus szerinti összetétele/ százalékos megoszlásának elemzése (patológiás elváltozások azonosítása) Kvantitatív vérkép: vörös,- és fehérvérsejtek számának meghatározása

Kvalitatív elemzés Hemolitikus anaemia Az erythropoesis nagymérvű fokozódása egy határig kompenzálja a vörösvértestek fokozott pusztulását. A granulopoiesis és az erythropoiesis aránya a csontvelőben 1 alattira csökken (normálisan 2-3:1 a granulopoiesis javára), aminek az erythropoiesis fokozódása az oka. Csontvelő-kenet. Krónikus lymphoid leukaemia (CLL) a: monomorf közepes nagyságú lymphocyták keskeny citoplazmaszegéllyel, b: Grumprecht rögök láthatók, ez utóbbiak a szétesett lymphocyták maradványai, CLL-re jellemzőnek tekinthetők. Perifériás vérkenet. SE. I Belgyógyászati Klinika: Haematólógiai diasor http://www.bel1.sote.hu/info.aspx?sp=32&web_id=

Kvantitatív elemzés Bürker-kamra segítségével adott térfogategységben lévő sejtek számát határozzuk meg A vörösvértestek számolására a kis négyzetek (oldalaik 1/20 mm-esek) szolgálnak → területük 1/400 mm2 → fölöttük lévő térfogat 1/4000 mm3 A fehérvérsejtek számolására a nagyobb négyzetek szolgálnak (oldalaik 1/5 mm-esek)→területe 1/25 mm2→fölötte lévő hasáb térfogata 1/250 mm3 A kamra aljzata és a fedőlemez közötti rés 0,1 mm 1/20 mm 1/5 mm

Gyakorlatunk célja Vérkenet készítése Megfestése May-Grünwald-Giemsa oldattal Mikroszkópos megtekintése, egyes sejttípusok megkülönböztetése

Vérkenet készítés lépései Vérvétel ujjbegyből A középső ujj végét alkohollal alaposan fertőtlenítjük. Hüvelykujjunk segítségével a középső ujjpercnél elszorítjuk a vérkeringést; ettől az ujjvég kipirosodik (ha ujjbegyünk nem pirosodik ki, segíthet, ha a fertőtlenítés előtt kezünket lefelé lógatva rázogatjuk, vagy kezünket meleg vízbe áztatjuk). Az egyszer használatos tűről tekeréssel eltávolítjuk a tűt védő sapkát, majd az ujjunkat alulról megtámasztva határozott mozdulattal megszúrjuk. A tűt célszerű nem az ujjbegy közepére, hanem kissé az oldalára illeszteni, így a pici sebből valamivel bővebb vérzést kapunk. A használt tűt azonnal bedobjuk a megfelelő tárolóba. A kiserkenő vér első cseppjét letöröljük (ez nagy mennyiségű egyéb szövetnedvet is tartalmaz), majd megkezdjük a vér levételét. A vérzés lankadása esetén masszírozással serkenthetjük azt.

Vérkenet készítés 1 2 Egy másik tárgylemezt szögben tartva a csepp felé húzzuk A tárgylemezre kis mennyiségű vért cseppentünk ki 3 4 A második tárgylemezt előre mozgatva, maga mögött vékony rétegben teríti szét a vért. A két tárgylemez határán a vércsepp szétfutva egy vékony réteget képez 5 Kész is  !

May-Grünwald-Giemsa festés Vérkenet festésére alkalmas módszer A festés a festékmolekulák és a festendő molekulák közötti elektrosztatikus kölcsönhatáson alapul May-Grünwald: metilénkék, eozin Giemsa: azúr Savanyú festék (anionokban gazdag): eozin→citoplazma, kollagén, izomrostok Bázikus festék (kationokban gazdag): metilénkék, azúr→DNS és RNS negatív foszfátcsoportjait (sejtmag; DER) Festés eredménye: Kék színű: fehérvérsejtek sejtmagvai, citoplazmájuk halványkék a kis mennyiségű RNS miatt; illetve a bazofil granulocyták granulumai Piros színű: vörösvértestek, eozinofil granulocyták granulumai

Festés menete Frissen készített vérkenetet szobahőmérsékleten hagyjuk megszáradni (kb 5 perc) May-Grünwald oldatból, pasteur pipetta segítségével kb 1 ml-t viszünk fel a lemezekre, és 3 percig állni hagyjuk A felvitt May Grünwald oldatot desztvízzel (1:1 arányban) hígítjuk és 3 percig állni hagyjuk Desztvizes mosás Kihígított Giemsa-t (2 ml desztvízbe 3 csepp Giemsa oldat) viszünk fel a lemezekre és 20 percig rajta hagyjuk Szobahőmérsékleten szárítás Lefedés (kanadabalzsammal) Kiértékelés

Baleset és egészségvédelem Lehetőleg mindenki csak a saját vérével dolgozzon Ha a társunknak segítség kell, a segítőnek gumikesztyű használata kötelező A vérvételhez steril és egyszer használatos eszközöket szabad alkalmazni Az ujjbegyet előtte le kell fertőtleníteni A használt tűket erre a célra szolgáló merev falú hulladékgyűjtőbe kell dobni A véres papírvattákat a kommunális hulladéktól szintén elkülönítve kell gyűjteni

Köszönöm a figyelmet