Vérkenet készítés P-Fejszák Nóra 2016. 12. 07. Kulcsszavak: vér, vérkenet, vörösvértestek, fehérvérsejtek, thrombocyták, vérképző őssejt P-Fejszák Nóra 2016. 12. 07. Egészségügyi Közszolgálati Kar SE, Anatómia, Szövet- és Fejlődéstani Intézet

Vérkenet a diagnosztikában Rutineljárás! Kvalitatív vérkép: a fehérvérsejtek sejttípus szerinti összetétele/ százalékos megoszlásának elemzése (patológiás elváltozások azonosítása) Kvantitatív vérkép: vörös,- és fehérvérsejtek számának meghatározása

Kvalitatív elemzés Hemolitikus anaemia Az erythropoesis nagymérvű fokozódása egy határig kompenzálja a vörösvértestek fokozott pusztulását. A granulopoiesis és az erythropoiesis aránya a csontvelőben 1 alattira csökken (normálisan 2-3:1 a granulopoiesis javára), aminek az erythropoiesis fokozódása az oka. Csontvelő-kenet. Krónikus lymphoid leukaemia (CLL) a: monomorf közepes nagyságú lymphocyták keskeny citoplazmaszegéllyel, b: Grumprecht rögök láthatók, ez utóbbiak a szétesett lymphocyták maradványai, CLL-re jellemzőnek tekinthetők. Perifériás vérkenet. SE. I Belgyógyászati Klinika: Haematólógiai diasor http://www.bel1.sote.hu/info.aspx?sp=32&web_id=

Kvantitatív elemzés Bürker-kamra segítségével adott térfogategységben lévő sejtek számát határozzuk meg A vörösvértestek számolására a kis négyzetek (oldalaik 1/20 mm-esek) szolgálnak → területük 1/400 mm2 → fölöttük lévő térfogat 1/4000 mm3 A fehérvérsejtek számolására a nagyobb négyzetek szolgálnak (oldalaik 1/5 mm-esek)→területe 1/25 mm2→fölötte lévő hasáb térfogata 1/250 mm3 A kamra aljzata és a fedőlemez közötti rés 0,1 mm 1/20 mm 1/5 mm

Gyakorlatunk célja Vérkenet készítése Megfestése May-Grünwald-Giemsa oldattal Mikroszkópos megtekintése, egyes sejttípusok megkülönböztetése

Vérkenet készítés lépései Vérvétel ujjbegyből A középső ujj végét alkohollal alaposan fertőtlenítjük. Hüvelykujjunk segítségével a középső ujjpercnél elszorítjuk a vérkeringést; ettől az ujjvég kipirosodik (ha ujjbegyünk nem pirosodik ki, segíthet, ha a fertőtlenítés előtt kezünket lefelé lógatva rázogatjuk, vagy kezünket meleg vízbe áztatjuk). Az egyszer használatos tűről tekeréssel eltávolítjuk a tűt védő sapkát, majd az ujjunkat alulról megtámasztva határozott mozdulattal megszúrjuk. A tűt célszerű nem az ujjbegy közepére, hanem kissé az oldalára illeszteni, így a pici sebből valamivel bővebb vérzést kapunk. A használt tűt azonnal bedobjuk a megfelelő tárolóba. A kiserkenő vér első cseppjét letöröljük (ez nagy mennyiségű egyéb szövetnedvet is tartalmaz), majd megkezdjük a vér levételét. A vérzés lankadása esetén masszírozással serkenthetjük azt.

Vérkenet készítés 1 2 Egy másik tárgylemezt szögben tartva a csepp felé húzzuk A tárgylemezre kis mennyiségű vért cseppentünk ki 3 4 A második tárgylemezt előre mozgatva, maga mögött vékony rétegben teríti szét a vért. A két tárgylemez határán a vércsepp szétfutva egy vékony réteget képez 5 Kész is  !

May-Grünwald-Giemsa festés Vérkenet festésére alkalmas módszer A festés a festékmolekulák és a festendő molekulák közötti elektrosztatikus kölcsönhatáson alapul May-Grünwald: metilénkék, eozin Giemsa: azúr Savanyú festék (anionokban gazdag): eozin→citoplazma, kollagén, izomrostok Bázikus festék (kationokban gazdag): metilénkék, azúr→DNS és RNS negatív foszfátcsoportjait (sejtmag; DER) Festés eredménye: Kék színű: fehérvérsejtek sejtmagvai, citoplazmájuk halványkék a kis mennyiségű RNS miatt; illetve a bazofil granulocyták granulumai Piros színű: vörösvértestek, eozinofil granulocyták granulumai

Festés menete Frissen készített vérkenetet szobahőmérsékleten hagyjuk megszáradni (kb 5 perc) May-Grünwald oldatból, pasteur pipetta segítségével kb 1 ml-t viszünk fel a lemezekre, és 3 percig állni hagyjuk A felvitt May Grünwald oldatot desztvízzel (1:1 arányban) hígítjuk és 3 percig állni hagyjuk Desztvizes mosás Kihígított Giemsa-t (2 ml desztvízbe 3 csepp Giemsa oldat) viszünk fel a lemezekre és 20 percig rajta hagyjuk Szobahőmérsékleten szárítás Lefedés (kanadabalzsammal) Kiértékelés

Baleset és egészségvédelem Lehetőleg mindenki csak a saját vérével dolgozzon Ha a társunknak segítség kell, a segítőnek gumikesztyű használata kötelező A vérvételhez steril és egyszer használatos eszközöket szabad alkalmazni Az ujjbegyet előtte le kell fertőtleníteni A használt tűket erre a célra szolgáló merev falú hulladékgyűjtőbe kell dobni A véres papírvattákat a kommunális hulladéktól szintén elkülönítve kell gyűjteni

Források: H.-Minkó Krisztina: Vér és Immunsejtek, nyirokszervek című előadása Kocsis Katalin: Vérfejlődés, Hemopoesis című előadása Röhlich Pál szerkeszette Szövettan (SE) Gergely János és Erdei Anna által szerkesztett Immunbiológia (ELTE) Zboray Géza: A keringési szervek (ELTE jegyzet) Molecular cell biology, Lodish et al. Molecular biology of the cell, 5. kiadás Alberts et al. http://www.emedinfo.com/blood-cells.html Dr. Magyar Attila és Dr. Nagy Nándor előadásai Képek: internet