Új laboratóriumi paraméterek a meddőség megítélésében

Az előadások a következő témára: "Új laboratóriumi paraméterek a meddőség megítélésében"— Előadás másolata:

1 Új laboratóriumi paraméterek a meddőség megítélésében
Dr. Kanyó Katalin PhD Kriston Rita, Blahó Krisztina, Dr. Konc János PhD Szent János Kórház Budai Meddőségi Centrum Diagnosticum

2 AMH Új mérési lehetőség a petefészek kapacitásának és stimulálhatóságának megítélésére Diagnosticum

3 Tények az AMH-ról A granulósa sejtek termelik
Az AMH-t a 2-6 mm-s tüszők produkálják / a > 8 mm-s tüsző kevés AMH-t termel Az AMH szint a korral csökken / inhibin B ↓, bazális FSH ↑, AFC↓/ Obes nőknél 65%-al kisebb az AMH szint Az AMH szint nem függ a menstruációs ciklustól, szemben az FSH-val

4 Tények az AMH-ról Az AMH szint előre jelzi az ovarialis választ
AMH > 3.5 ng/ml ,megnövekedett ovarium válasz, OHSS veszélye / AFC > 16 tüsző / Az AMH szint nem függ: fogamzásgátló tabletta szedésétől terhességtől GnRH agonistától Chemotherápia, irradiáció után csökken az AMH / ovárium károsodás /

5 Tények Az AMH, mint prognosztikus indikátora az IVF-nek (4072 ciklus, 2010 ápr jan): + Ciklus cancelláció bekövetkezte + Hány petesejt nyerhető (stimuláció) OHSS előrejelzése - IVF kimenetele-a terhességet illetően Reichman, Goldschlag, Rosenwaks Fertility and Sterility Apr Diagnosticum

6 Tények Cancellációs arány
Ha az AMH < 0,1ng/ml –akkor 13x nagyobb a cancellációs arány, mint ahol az AMH>2ng/ml Reichman, Goldschlag, Rosenwaks Fertility and Sterility Apr Diagnosticum

7 AMH GenII kit – Ledger F.S. 2014.febr. 339.
Korábbi gyártó: Immunotech - és Diagnostics Systems Laboratory Új gyártó: Beckman Coulter : Gen II. AMH assay – 2 módszer lépéseit egyesíti Diagnosticum

8 AMH GenII kit – Ledger F.S. 2014.febr. 339.
Beckman Coulter: Először csökkenő AMH érték Instabilitás – complement cascade miatt, gyors változtatás: premixing step-fagyasztás utáni felengedést követően pufferbe viszi Növekvő AMH érték– inaktiválja a complement cascadot –interferencia csökken Szegényes korreláció: AMH-alacsony AFC közt Diagnosticum

9 Nelson - Glasgow F.S. 2014. febr. 523-529.
AMH magasabb érték a vártnál ( páciens) Összehasonlítva aDiagnostics Systems Laboratory kitt korábbi eredményeit –a Beckman Coulter Generation II assay +40% növekedés Diagnosticum

10 Pankhurst –New Zeland F.S 2014. march 846-850.
A Beckman-Coulter AMH Gen II assay egybeméri a biológiailag inaktív pro-AMH-t és a biológiailag aktív AMH N,C-t Ezzel magyarázhatók a jelenleg mért átlagosan magasabb AMH értékek a gyakorlatban, amelyek nem mindig korrelálnak az AFC-vel Ajánlás: külön kellene megmérni a pro AMH-t és az AMH N,C-t és az arányukat meghatározni, mert ez nem biztosan konstans Diagnosticum

11 Reichman, Goldschlag, Rosenwaks F.S. 2014. apr. 1012-1018.
GenII AMH assay eredménye, mint prognosztikus indikátor (4072 ciklus, 2010 apr jan): + Ciklus cancelláció + Hány petesejt nyerhető (stimuláció) - IVF kimenetele-a terhességet illetően Diagnosticum

12 Okok Szérum tárolási körülményei különbözőek
Mikor kerül lefagyasztásra? Mikor történik a pufferbe vitel? Hány fokon történik a tárolás és meddig ? (szobahőmérséklet, -20 C, - 80C) X. Han, M McShane, R Sahertian, C White, W Ledger Human Reproduction, Vol.29,No5pp

13 Új irányzat ANS Labs /Webster, Tx, USA/ ultraszenzitív AMH
picoAMH (eddig mérhetetlen AMH-ra (< 0,1) fokozott érzékenység Diagnosticum

14 Régi módszer A 3. napi bazális FSH értékelése önmagában veszélyes a termékenység megítélésére (Pl. alacsony bazális FSH-magasabb bazális E2 = perzisztáló petefészek ciszta és nem javuló termékenység, vagy stimulálhatóság) Diagnosticum

15 Inzulin rezisztencia A sejtek inzulinfüggő glükózfelvételének csökkenése (norm. mennyíségű inzulin nem elegendő a hatáshoz) Főleg PCOS-s pácienseknél Merckformin kezelés – súly csökkentés Inofolic ??? Mio-inozit 2000 mg + folsav 200 mg Ovarialis aktivitás fokozása Szerep az ivarsejtek kialakulásában Inzulin érzékenység fokozása Diagnosticum

16 TSH /pajzsmirigy alulműködés/
Anti TPO (pajzsmirigy szövete lassan pusztul) Anti-thyreoglobulin Hashimoto-thyreodistis /idült gyulladás/ Nők: 4/1000 Férfiak: 1/1000 Diagnosticum

17 Immunológiai paraméterek
ANA vizsgálata /auto-antitest/ - a sejtmag ellen termelődnek- kettős szálú DNS elleni AT Autóimmun betegségekben pl. SLE-ben emelkedett Diagnosticum

18 Trombofilia szűrés Anamnézisben nem szerepel trombo-embóliás megbetegedés de Infertilitás Sikertelen IVF-ek Koraszülés Magzati halálozás Diagnosticum

19 A terhesség kimenetele
LMWH adás nélkül LMWH kezeléssel Trombofiliás nők 17,4% 96,8% APS-s nők terhessége 9,1% 83,3% Diagnosticum

20 Véralvadási faktorok Leyden mutáció – V. véralvadási faktor
Átl. népesség: 10% (heterozygóta)(8x kockázat), trombózisos beteg: 20-30%, A trombózis hajlam már heterozygóta formában is megnyilvánul, homozygóta: néhány ezrelék (80x kockázat) APC rezisztencia (Leyden mutáció okozta aktivált protein C rezisztencia) - megszünteti a placenta anticoaguláns tulajdonságát Diagnosticum

21 Véralvadási faktorok Protrombin – II. véralvadási faktor (több véralvadást elősegítő fehérje képződik)(hajlamos családokban 18%) (a trombózisos betegek közt 6%) Homozygóta formában – habituális vetélés hátterében van szerepe Diagnosticum

22 Homociszteinszint Mérsékelt emelkedés 5-10%
Oka: MTHFR v. CBS gén pontmutációja Homozygóta formában 5-15%/átl. népesség (gyakori) Folsav ellátottság fontos (hiányában a homocisztein magasabb) (sóska, spenót, saláta) Diagnosticum

23 Protein C, Protein S Véralvadással egyensúlyt tartó fibrinolízist irányító fehérje Alacsony szintje v. hiánya trombózis hajlamot okoz Diagnosticum

24 Coeliakia Meddőség, vetélés 26 éves kor után halmozódik
Glutén mentes diéta Diagnosticum

25 Magyarországon a felnőtt lakosság körében normál szint alatti
D-vitamin Hiánya – petefészek daganatok előfordulása Szabályozó hatás az immunrendszerre Anovulációval meglétével is kapcsolatban áll Pajzsmirigy megnövekedés és túlműködés Magyarországon a felnőtt lakosság körében normál szint alatti Yale tanulmánya alapján az infertilis nők 93%-ban komoly hiány van, főleg a PCOS-nál Diagnosticum

26 D-vitamin pótlása Október-április : 1.000 - 2.000 NE
65 éven felülieknek egész évben Könnyű túladagolni – a Ca szint emelkedését okozhatja Fokozhatja: vesekő, epekő, képződését és hasnyálmirigy gondokat okozhat Diagnosticum

27 <5 millió/ml spermiumszám esetén
Y kromoszóma mikrodeléciók X és Y kromoszóma aneuploidiák Cisztás fibrózis AZF faktor Diagnosticum

28 Cisztás fibrózis CF-ben szenvedő férfiak 98%-a meddő
Fiú: veleszületett ondóvezeték hiány: CBAVD Obstructive-Azoospermia (csak ürülési zavar) Nők: sűrű méhnyakváladék – nehezített teherbeesés Diagnosticum

29 AZF faktor Y kromoszóma hosszú karján lévő gének deléciója
Hímivarsejt érés v. képzés részleges v. teljes zavara Infertilis férfiak: 7-15 %-ban deléció Azoospermiás férfiak: %-ban deléció AZF régió deléciója esetén: 75% Sertoly cell only 25% érési gátlás A nem mozaikos Y kr. Mikrodeléciót hordozó férfiak fiai a mutációt 100%-ban öröklik

30 Oxisperm ROS felhalmozódás Anti-oxidáns terápia Diagnosticum

31 VitalScreen Eozin festés Mozdulatlan spermiumok vizsgálata
Ha felveszi a festék vörös színét, akkor nem él a spermium Diagnosticum

32 EpiScreen Mellékhere szekréció - Alfa-glükozidáz
Elzáródás – norm. tesztoszteron érték mellett Mellékhere krónikus gyulladása/Epididymitis -- Hypoandrogenizmus Diagnosticum

33 Kariotipus meghatározás
Kromoszóma aberráció Transzlokáció hordozás Nemhez kötötten öröklődő betegségek Diagnosticum

34 Diagnosticum

35 Izomdistrophia hordozó +,+ AB, BK OE t(6,9) MM 46,XX,t(6,10) HA
Páciens Genetikai ok ET Grav Szülés CHJ X kromoszóma 5x + +(fiú) TT Haemofilia A hordozó 1x +(lány) FK t(11,22) - BE 45,XY,t(13,14)(q10,q10) 3x SzGK KE 46XX,t(2,7)(q23,q11,2) 2x PLK Izomdistrophia hordozó +,+ AB, BK OE t(6,9) MM 46,XX,t(6,10) HA 46,XY,der(13,14)(q10,q10) OBB 45,XYt(13,15) +(iker) HI Haemophilia A hordozó +, FER: + PJ 46XXt(10,16) GyCsM 46,XY,t(10,11)(q21,p15) Diagnosticum

36 X linked izom dysrophia JT In.dup(15)(q11,1) SBB
Páciens Genetikai ok ET Grav Szülés MM 46,XY,t(2,5)(q21,p13) 3x - SKA 46,XX,t(4,20)(q21,Q13) 2x + BK SJ 45XY,t(13,14)(q10,q10) ++ +, + BT 46,XX,t(3,5)(p14,p15) 1x TA 45,XY,t(13,14)(q10,q10) SzK 46,XX,t(10,13)(q24,q34) FER + RFA 47,XYY SzA 46,XX,t(1,19)(pter,qter) 45XX,t(13,14)(q10,q10) RM 46,XX,t(2,18)(q23,q23) AI 46,XX,t(10,17)(p12,q22) DE 45,XX,t(21,22)(q10,q10) GyLA X linked izom dysrophia JT In.dup(15)(q11,1) SBB 45,XX,t(13,14)(q10,q10) LG Haemophilia A hordozó Foly. Diagnosticum

37 Diagnosticum

38 Diagnosticum

39 WHO új sperma paraméterei I.
Karencia: 2-7 nap pH > 7,2 Spermium koncentráció:≥ 15 M/ml Spermium szám/ejakulátum: ≥ 39 M/ml Mennyiség: > 1,5 ml Peroxidáz teszt: < 1 M/ml Diagnosticum

40 WHO új sperma paraméterei II.
Motilitás: ≥ 32 % Progresszíven mozgó: ≥ 32% Teljes motilitás: ≥ 40% Morfológia, strick krit. ≥ 4% Immunológiai vizsg. /MAR teszt/: IgA, IgG Spemaanalizátorral végzett vizsgálat Diagnosticum

41 WHO kritériumok ø 1 2 Normál érték Normál érték Karencia ideje (nap)
1 2 Normál érték Normál érték Karencia ideje (nap) 2-7 nap Mennyiség (ml): >1,5 ml pH: >7,2 Viszkozitás: (cm) Spermium koncentráció (M/ml): ≥15 M/ml Agglutináció ø Spermiumszám/ ejakulátum ≥39 M Peroxidáz teszt ( fvs kimutatása) < 1 M/ml Motilitás 1 2 Normál érték Immunológiai vizsgálat (MAR teszt) Progressziv mozgó (%) ≥32,00% Nem progresszív mozgó (%): IgA: Teljes motilitás (Progresszív és nem pr.%): ≥40,00% Nem mozgó (%): IgG: Morfológia WHO szerint, Strick kr (%) ≥4,00% Diagnosticum

42 MAR teszt IgA IgG Spermiumok mosása

43 Grádiens centrifugálás
Diagnosticum

44 HBA teszt Sperma Hyaluronan Binding Assay
Spermium érettségét vizsgálja – friss mintában Érett spermiumok képesek kapcsolódni Legfontosabb mucopolysaccharideja a: - cumulus oophorusnak - human folliculus folyadéknak Diagnosticum

45 HBA teszt Sperma Hyaluronan Binding Assay
Stimulálja a spermiumok mozgási képességét Meghosszabbítja életképességét Diagnosticum

46 Módszer Az ejakulációt követően 3 órán belül végzendő a vizsgálat
7-10 µl ondó kicseppentése a speciális tárgylemez közepén lévő körre Fedőlemezzel letakarjuk 10 és 20 perc közötti időszakban leszámoljuk a kötődött mozgó spermiumokat Diagnosticum

47 Eredmény % kötődés = kötődött mozgó /
kötődött mozgó + nem kötődött mozgó spermiumok Diagnosticum

48 Eredmény értékelése HBA score (% kötődés) ≥ 80% kötődés
Normál érettség és fiziológiás funkció < 80% kötődés Csökkent érettség és fiziológiás funkció Diagnosticum

49 PICSI Diagnosticum

50 HALO sperm Spermium DNS fragmentációjának gyors mérése
Genetikai anyag minősége Ismeretlen okú meddőség Habituális vetélés Normozoospermia – Varicocele esetén is lehet pozitív Antioxidáns kezelés Diagnosticum

51 HALO sperm Spermium konc. hígítás 5-10 M/ml-re Agarose pufferbe vitel
Szilárdítás Lízis Mosás Dehidratáció Fixálás Festés Szárítás Diagnosticum

52 Diagnosticum

53 DNS fragmentáció mértéke
Javasolt beavatkozás 15 % IUI 15-30 % IVF 30-40 % ICSI Diagnosticum

54 IMSI Bartoov Magyarországon elsőként alkalmaztuk és alkalmazzuk
Spermium szelekció ICSI előtt 400x nagyítás x nagyítás Akroszóma / vacuolumok Előzményben alacsony fertilizációs arány Több, mint 100 sikeres eset Diagnosticum

55 Diagnosticum

56 IMSI CytoScreen Diagnosticum