Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI. MUTAGÉN Az emberi szervezetre, annak természetes és mesterséges környezetéből nagyszámú toxikus tényező fejtheti ki hatását,

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI. MUTAGÉN Az emberi szervezetre, annak természetes és mesterséges környezetéből nagyszámú toxikus tényező fejtheti ki hatását,"— Előadás másolata:

1 MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI

2 MUTAGÉN Az emberi szervezetre, annak természetes és mesterséges környezetéből nagyszámú toxikus tényező fejtheti ki hatását, melyek egy része a sejtek genetikai állományát is károsítja! Egyik lehetséges mód: MUTÁCIÓ Watson és Crick 1953: DNS kettős spirálszerkezetének és önreprodukciós képességének kimutatása

3 DNS kettős spirál szerkezete

4 Szemikonzervatív replicatio: DNS sejtosztódás előtti megkettőződése Szemikonzervatív, mert az egyik lánc az eredeti DNS molekulából származik a másik újonnan szintetizálódik DNS replicatio során létrejöhetnek „hibák” mutációk következő megkettőződéssel továbbadódik, ha nem keletkezik ellentétes mutáció (reserv) Mutáció a genom megváltozása Gyakorlati szempontból: pontmutáció, kromoszóma aberratio A legtöbb mutáció spontán és váratlan

5 DNS-molekula szemikonzervatív replicatioja

6 Benignus polimorfizmus A kimutatott mutációnak ‘nincs’ klinikai relevanciája Genetikai értelemben akkor használjuk, amikor olyan mutációt takar, amelyek genetikailag még nem mutathatók ki azon egyéneknél akiknél a klinikai relevanciák megtalálhatók Kockázati mutáció A betegség kialakulását nem okozza, de a betegség kialakulásához hozzájárul a jelenléte

7 Mutáció szűrési módszerek A mutáció szűrési eljárások során keressük a betegséget / szindrómát okozó mutációt, vagyis a mutáció elváltozás / betegség kapcsolatot derítjük fel! Linkage analízis: Eltérő DNS polimorfizmusokat keresünk a beteg és a kontroll DNS-ében Ismert mutáció kimutatása: annak eldöntésére végezzük, hogy az illető a kérdéses megbetegedésben szenved-e, vagy annak kockázatát hordja-e a génszerkezetében Ez a leggyakrabban használt eljárás A betegségért felelős mutáció keresése:Keressük az adott betegségben szenvedők adott génjében azokat a mutációkat, amelyek csak a betegeknél mutathatók ki

8 A betegségért felelős mutáció(k) keresési stratégiája A gén adott szakaszait PCR reakcióval amplifikáljuk Az így nyert DNS-ben mutáció szűrési eljárásokkal mutációt keresünk A mutációt nukleotid szekvencia analízissel azonosítjuk Vizsgáljuk, hogy a talált mutáció benignus polimorfizmus, vagy betegségért felelős mutáció Vizsgáljuk a mutáció hatását a DNS szekvenciára, aminosav összetételre, fehérje szerkezetre

9 Mutáció szűrési eljárások DGGE: Denaturáló grádiens gél elektroforézise TGGE: Hőmérséklet grádiens gél elektroforézise SSCP: Egyszálú DNS konformációs változatai Heteroduplex analízis CFLP:Heteroduplexek vágása 1.Kémiai módszerrel történő vágás 2.Enzimatikus módszerrel történő vágás 3.Speciális enzimmel történő vágás Mismatch binding proteinek kötődésén alapuló eljárás PTT

10 TGGE: Hőmérséklet grádiens gél elktroforézise

11 SSCP: Egyszálú DNS konformációs változatai

12 A mutáció azonosítása nukleotid szekvencia analízissel 1.A kérdéses gén szakaszról PCR segítségével másolatot készítünk 2.A PCR azonosságát és tisztaságát ellenőrizzük 3.Nukleotid szekvencia meghatározás 4.A szekvenálást mindkét irányból el kell végezni 5. A mutáns és kontroll szekvenciájának összehasonlítása

13 PCR: polimeráz láncreakció

14 Heterozigóta mutáció kimutatás PCR-SSC, nukleotid szekvencia analízissel Pedigre PCR-SSCP analízis Heterozigóta mutáns szekvencia Vad nukleotid szekvenciája

15 PCR-SSCP

16 Felhasznált irodalom: Dr. Papp Zoltán: Klinikai genetika DE-OEC: Alapvető Molekuláris Biológiai Módszerek (Debrecen 2003.) Kép: Internet Készítette: Kolocsán Tünde Biológia-környezetvédelem II. évfolyam Nyíregyháza, November 13.

17 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!


Letölteni ppt "MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI. MUTAGÉN Az emberi szervezetre, annak természetes és mesterséges környezetéből nagyszámú toxikus tényező fejtheti ki hatását,"

Hasonló előadás


Google Hirdetések