Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Laboratóriumi diagnosztikai módszerek. A nagyüzemi szarvasmarha állományok anyagforgalmi ellenőrzése anyagcsere-profilvizsgálatok, nutritív-profil vizsgálatok,

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Laboratóriumi diagnosztikai módszerek. A nagyüzemi szarvasmarha állományok anyagforgalmi ellenőrzése anyagcsere-profilvizsgálatok, nutritív-profil vizsgálatok,"— Előadás másolata:

1 Laboratóriumi diagnosztikai módszerek

2 A nagyüzemi szarvasmarha állományok anyagforgalmi ellenőrzése anyagcsere-profilvizsgálatok, nutritív-profil vizsgálatok, szűrővizsgálatok.

3 Anyagcsere profilvizsgálatok Anyagforgalmi zavarok felderítése, rendellenességek korai felismerése. Csoportosan tartott, hasonlóan takarmányozott és hasonló teljesítményű állatokban alkalmazható. Eredmények  állományszintű következtetések (állatcsoporton belüli kiegyenlítettség értékelése). Compton Metabolic Profile Test (Payne, 1970) 13 vérparaméter 7 nagy tejhozamú (csúcstermelésű), 7 közepesen termelő (frissen ellett), 7 szárazonálló tehén.

4 Nutritív profilvizsgálatok Táplálóanyagokkal (energia és fehérje) való ellátottság megítélése a takarmányok tápanyagtartalma és vérparaméterek alapján. Blowley: 4 hetenként, 6 egyed, 3 vérparaméter (glükóz, karbamid, albumin).

5 A szarvasmarha-állományok komplex takarmányozási és anyagforgalmi értékelése Anyagforgalmi zavarok korai felderítése (vér-, tej-, vizelet-, bendőtartalom, bélsár- és szőrvizsgálat), optimális takarmányozás megvalósítása (táplálóanyag-, makroelem-, mikroelem-ellátás).

6 Beviteli táplálóanyag-egyenleg vérben levő, vizelettel és bélsárral ürülő elemek aránya, fedőszőrök mikroelem tartalma. Eredmények értékelése

7 energia- és fehérjeforgalom, szárazanyag- és nyersrost-ellátás, Ca- és P-egyensúly, Na- és K-, mikroelem-, vitamin ellátottság, jelentősebb anyagcsere betegségek vizsgálata (zsírmobilizációs betegség, ketózis, sav-bázis egyensúly állapota).

8 Az anyagforgalmi profilvizsgálatok leggyakrabban vizsgált vérparaméterei A vizsgált mutatóA változás iránya és oka Anorganikus foszfát  P-ellátási zavar AST  máj- és izomkárosodás Glutation-peroxidáz  Se-hiány, de nem nő fokozott Se ellátáskor Glükóz  energiahiány Hemoglobin  szubsztráthiány (Fe, folsav, AA) Kalcium  ellés után és a Ca-ellátás súlyos zavara Karbamid  fehérjetúletetés,  májkárosodás, fehérjehiány Ketonanyagokenergiahiány Koleszterin  májkárosodás Magnézium  ellátási zavar, stressz Összfehérje  fehérjetúletetés, gyulladás,  fehérjehiány Szabad zsírsav  energiahiány

9 Szűrővizsgálatok Adott betegség felderítése, védekezés eredményesebbé tétele, pl. tőgygyulladás felmérése.

10 Masztiteszt próba Tőgynegyedenként 2-3 ml tej ml reagens. Elbírálás: az elegy konzisztenciájának és színének változása alapján. Magvas sejtek (hámsejtek, leukocyták) mennyisége  (DNS).

11 Masztiteszt próba - változatlan szín és állomány = egészséges tőgynegyed, + néhány pehely, változatlan szín = kétes tőgynegyed, szubklinikai tőgygyulladás valószínűsíthető, ++ nyálkás csomók, pelyhek, lila szín = szubklinikai tőgygyulladás, +++ gyors sűrűsödés, nyálkásodás, bíborlila szín = kezdődő klinikai tőgygyulladás, ++++ kocsonyás, összeálló elegy, bíborszín = klinikai tőgygyulladás. Kémhatás jelzése (<6,5-6,7<).

12 Immundiagnosztikai módszerek

13 Immunológiai alapok Immunológiai folyamatok tényezői Antigén fogalma Ellenanyagok (immunglobulinok) jellemzői Humorális immunválasz Celluláris immunválasz Immunológiai vizsgálómódszerek

14 Elsődleges védelmi vonal Külvilágból károsító hatások folyamatosan érik a köztakarót és a nyálkahártyákat. Szekrétumok (lizozim) könny, orrnyálka, nyál Ép bőrfelszín (+baktériumok) „só~, sav~, faggyúköpeny” Légúti nyálka, csillóshám Gyomor savi pH Bélnyálka és a természetes baktériumflóra

15 Immunológiai folyamatok tényezői Antigének Ellenanyagok Az immunrendszer sejtjei Az immunrendszer szervei

16 Antigének immunválaszt kiváltó anyagok Jellemzői: A szervezetet specifikus ellenanyagok képzésére késztetik. A képződött ellenanyagokkal in vivo és in vitro reagálnak.

17 Antigének Fajtái: komplett antigének (Mr >4-5 kD) egyszerű, vagy összetett fehérjék, poliszacharidok, haptének = reaktív, de nem immunogén anyagok, heterológ antigének = a gazdaszervezettel nem azonos fajból származnak (vírusok, baktériumok, paraziták vagy más állatok szervei, sejtjei, illetve makromolekulái), izoantigének = azonos fajból származnak (szerkezetük az egyedre, csoportra jellemző, pl.: ún. vércsoport-, ill. lymphocyta- (MHC) antigének), autoantigének = szervezet saját anyagai (makromolekulái), keringéstől (immunrendszertől) elzártan, pl. szemlencse fehérjéje, agyszövet, ondósejtek. Immunkompetens sejtekkel találkozás  autoimmunbetegség.

18 Ellenanyagok (antitest / antibody) mmunglobulinok Az immunkompetens sejtek által termelt ellenanyagok a szérum gammaglobulin frakciójába sorolható fehérjék (immunglobulinok).

19 Ellenanyagok (antitest / antibody) mmunglobulinok Az immunkompetens sejtek által termelt ellenanyagok a szérum gammaglobulin frakciójába sorolható fehérjék (immunglobulinok). nehézkönnyű fehérjelánc Molekulaszerkezetükre jellemző egy Y alakú, két nehéz és két könnyű fehérjeláncból álló alegység.

20 Ellenanyagok (antitest / antibody) mmunglobulinok Az immunkompetens sejtek által termelt ellenanyagok a szérum gammaglobulin frakciójába sorolható fehérjék (immunglobulinok). nehéz könnyűfehérjelánc Molekulaszerkezetükre jellemző egy Y alakú, két nehéz és két könnyű fehérjeláncból álló alegység. öt típusa A nehézláncok öt típusa ( , , , , µ) alapján emlősökben öt immunglobulin (Ig) osztályt különböztetünk meg (IgA, IgD, IgE, IgG, és IgM).

21 Ellenanyagok (antitest / antibody) mmunglobulinok Az immunkompetens sejtek által termelt ellenanyagok a szérum gammaglobulin frakciójába sorolható fehérjék (immunglobulinok). nehéz könnyűfehérjelánc Molekulaszerkezetükre jellemző egy Y alakú, két nehéz és két könnyű fehérjeláncból álló alegység. öt típusa A nehézláncok öt típusa ( , , , , µ) alapján emlősökben öt immunglobulin (Ig) osztályt különböztetünk meg (IgA, IgD, IgE, IgG, és IgM). IgY. A madarakban az IgG analóg neve IgY.

22 Az immunrendszer sejtjei Limfocita (T-, B-sejt) Monocita (makrofág) APC antigén prezentáló sejt APC Granulocita (mikrofág) Neutrofil (bekebelezés, H 2 O 2, proteolízis) Eozinofil (Ag-IgE –komplex, allergia) Bazofil (szöveti hízósejt, IgE-köt)

23 Az immunrendszer szervei Funkcionálisan Elsődleges (központi) Thymus, Csontvelő, (bursa Fabricii). Másodlagos (perifériális) Lép, nyirokcsomók, Bél- (GALT), Egyéb- (MALT) nyálkahártya.

24 Immunrendszer Természetes, vagy veleszületett, de nem specifikus (filogenetikailag ősibb). Szerzett, vagy adaptív, specifikus (filogenetikailag fiatalabb).

25 Az immunrendszer működése Celluláris (sejtek általi) reakciók, Humorális (sejtek jól jellemezhető fehérje típusú szekrétuma által végrehajtott) reakciók.

26 Immunitási formák TermészetesMesterséges Aktív (antigén) Egyedi életben Ag (1), immunválasz. Ag (2) (T M +B M ), hatékonyabb és gyorsabb válasz. Passzív (ellenanyag)

27 Immunitási formák TermészetesMesterséges Aktív (antigén) Egyedi életben Ag (1), immunválasz. Ag (2) (T M +B M ), hatékonyabb és gyorsabb válasz. Passzív (ellenanyag)

28 Immunitási formák TermészetesMesterséges Aktív (antigén) Egyedi életben Ag (1), immunválasz. Ag (2) (T M +B M ), hatékonyabb és gyorsabb válasz. Passzív (ellenanyag) Maternális Diaplacentáris Kolosztrális Szik (tojás) IgY

29 Immunitási formák TermészetesMesterséges Aktív (antigén) Egyedi életben Ag (1), immunválasz. Ag (2) (T M +B M ), hatékonyabb és gyorsabb válasz. Passzív (ellenanyag) Maternális Diaplacentáris Kolosztrális Szik (tojás) IgY Hiperimmun savóval oltás (adott antigénre specifikus ellenanyagot (IgG) tartalmazó fajazonos szérum): preventív céllal, terápiás céllal.

30 Immunológiai vizsgálómódszerek

31 Az immundiagnosztikai próbák csoportosítása A vizsgálat célja szerint fertőző betegségek diagnosztikája, mikroorganizmusok, vagy azok antigénjeinek identifikálása, immunrendszer működése, vagy működési rendellenességeinek meghatározása, autoimmun kórképek diagnosztikája.

32 ún. klasszikus szerológiai próbák (vérsavóban lévő ellenanyag kimutatására), celluláris próbák (sejtes reakciók meghatározása), ún. jelzéses módszerek, immunhisztokémiai eljárások. In vitro módszerek

33 In vivo módszerek allergiás diagnosztikai próbák

34 Szerológiai próbák vérsavóból, tejből, folyadékokból (pl. liquor, hüvelynyálka, sperma)  ismert kórokozókkal, vagy azok antigénjeivel szembeni ellenanyagok kimutatása, szervezet fertőzöttségének megállapítása.

35 Szerológiai próbák antigén és ellenanyag kapcsolódása I. fázis kémiai kötődés, néhány mp, nincs látható jele, II. fázis kolloidkémiai folyamatok, percek, vagy órák elteltével látható reakció.

36 Szerológiai próbák agglutinációs próbák (baktériumsejtek összecsapódása), precipitációs próbák (oldott antigének kicsapódása), komplementkötési próbák, vírusneutralizációs próba.

37 Szerológia próbák érzékenysége PróbaKimutatható protein mennyisége (  g/ml) Vírusneutralizáció0,00005 ELISA0,0005 Agglutináció0,05 Hemagglutináció0,01 Komplementkötés0,05 Precipitáció (folyadék)18,00 Precipitáció (gél)30,00

38 ún. titer-érték Adott vérsavó ellenanyag tartalmának kifejezése. A vérsavónak az a legmagasabb hígítási értéke, amelyben homológ antigénnel még látható szerológiai reakciót ad.

39 Agglutinációs próbák Baktériumok, sejtek (pl. vvs.), vagy antigénekkel kapcsolt korpuszkuláris anyagok (pl. latex) ellenanyagok hatására létrejövő összecsapódása. Brucellózis, malleus, baromfitífusz, paratífusz és leptospirózis diagnosztikája.

40 Agglutinációs próbák Tárgylemez-agglutinációs próbák, Csőagglutinációs próbák, ABR (Abortus Bang Ring) próba, Coombs-próba, Hemagglutinációs próbák.

41 Tárgylemez-agglutinációs próbák Vérsavó + antigén

42 Agglutinációs próbák Tárgylemez-agglutinációs próbák, Csőagglutinációs próbák, ABR (Abortus Bang Ring) próba, Coombs-próba, Hemagglutinációs próbák.

43 Csőagglutinációs próbák higított vérsavó + baktérium szuszpenzió

44 Agglutinációs próbák Tárgylemez-agglutinációs próbák, Csőagglutinációs próbák, ABR (Abortus Bang Ring) próba, Coombs-próba, Hemagglutinációs próbák.

45 ABR (Abortus Bang Ring) próba tejből brucellák ellen ható ellenanyagok kimutatása

46 Agglutinációs próbák Tárgylemez-agglutinációs próbák, Csőagglutinációs próbák, ABR (Abortus Bang Ring) próba, Coombs- (antiglobulin-) próba, Hemagglutinációs próbák.

47 Coombs-próba vvs ellenanyag íantiglobulin) inkomplett (blokkoló) ellenanyagok kimutatására ellen- anyag

48 Agglutinációs próbák Tárgylemez-agglutinációs próbák, Csőagglutinációs próbák, ABR (Abortus Bang Ring) próba, Coombs-próba, Hemagglutinációs próbák (baromfipestis elleni antitestek kimutatása, vakcinázás hatékonyságának ellenőrzése).

49 Precipitációs próbák Az ellenanyag az oldatban lévő antigénnel reagál, és az ezt követő kolloidkémiai folyamatok hatására az antigén-ellenanyag komplex az oldatból csapadék alakjában válik ki.

50 Precipitációs próbák

51 Csőprecipitációs próbák, Agargél precipitációs próbák, Mancini próba (radiális immundiffúzió), Immundiffúziós próbák.

52 Precipitációs próbák Csőprecipitációs próbák vérsavó precipitációs gyűrű

53 Precipitációs próbák Csőprecipitációs próbák ASCOLI -féle termoprecipitációs próba - lépfene fertőzöttség kimutatása, UHLENHUT-féle próba - különféle állatfajok fehérje antigénjeinek azonosítása, vagy a közöttük levő rokonság megállapítása (húsok faji származásának meghatározása).

54 Precipitációs próbák Csőprecipitációs próbák, Agargél precipitációs próbák, Mancini próba (radiális immundiffúzió), Immundiffúziós próbák.

55 Precipitációs próbák Agargél precipitációs próba – Brucella ovis fertőzés, lovak fertőző kevésvérűsége, szarvasmarha leukózis, egyes vírus okozta baromfibetegségek kórjelzése, lineáris géldiffúzió (OUDIN-módszer), lineáris kettős géldiffúzió, kétdimenziós kettős géldiffúzió (OUCHTERLONY- módszer).

56 Agargél precipitációs próba

57 Precipitációs próbák Csőprecipitációs próbák, Agargél precipitációs próbák, Mancini próba (radiális immundiffúzió), Immundiffúziós próbák.

58 Mancini próba ellenanyag antigén

59 Precipitációs próbák Csőprecipitációs próbák, Agargél precipitációs próbák, Mancini próba (radiális immundiffúzió), Immundiffúziós próbák Immunelektroforézis (elektroforézis + immunprecipitáció).

60 Immunelektroforézis

61 Rocket-elektroforézis

62 Komplementkötési próbák Érzékeny szerológiai eljárás, amely az ellenanyagok, vagy antigének kis mennyiségének kimutatására is alkalmas. Brucellozis, malleus, tenyészbénaság, vírusos betegségek diagnosztikája.

63 Komplementkötési próbák Antigén + ellenanyag (adszorbeáló felület) + komplement + ún. hemolitikus jelzőrendszer. antigén + vérsavó komplement juh vvs + hemolysin

64 Komplementkötési próbák

65 Vírusneutralizációs próba Ismert vírusszuszpenziót az ellenanyag- tartalmú vérsavóval megfelelő arányban elegyítünk, majd a vérsavó vírus semlegesítő hatását szövet-tenyészetben, fiasított tyúktojásban, vagy kísérleti állatokban ellenőrizzük.

66 Szerológiai próbák értékelése ellenanyagok kimutatása? korai - késői ellenanyagok (önmagukban, együttesen)  agglutináló, precipitáló, komplementkötő, vírusneutralizáló.  fertőzés lefolyása: precipitációs és agglutinációs próbák: friss fertőzések, komplementkötő próba: betegség előrehaladott szakasza, Coombs próba: akár betegség lefolyását követően.

67 Celluláris próbák Immunrendszer sejtjeinek válaszkészségét vizsgáljuk. Élő lymphoid sejtekkel (perifériás fehérvérsejt) in vitro végzett vizsgáló eljárások, amelyek alkalmasak a szervezet immunstátusának meghatározására.

68 Celluláris próbák RCFRosetta cell forming, LST Lymphocyta stimulációs próba, Macrophagmigráció gátlás, Cytotoxikus reakció.

69 Immunrozetta-képzés fvs vvs

70 Celluláris próbák RCFRosetta cell forming, LST Lymphocyta stimulációs próba, Macrophagmigráció gátlás hosszú életű memóriasejtek (szekunder immunválasz) válaszképességét mérik. Cytotoxikus reakció effektor (killer) sejtek aktivitását méri.

71 Jelzéses módszerek Radioimmunológiai eljárások (izotóp): RIA RadioImmune Assay (antigén), IRMA ImmunoRadioMetric Assay (ellenanyag), ELISA Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, Immunfluoreszcencia, Avidin-biotin módszer, Immunoblot.

72 Jelzéses módszerek Radioimmunológiai eljárások jelölt és jelöletlen reagensek versenyeznek a korlátozott számú fajlagos kötődési helyért, jelöletlen anyag koncentrációjának növelése  jelölt anyag kötődését gátolja, mintában, standardokban mért gátlások értékeinek összehasonlítása.

73 Jelzéses módszerek Radioimmunológiai eljárások (izotóp): RIA RadioImmune Assay (antigén), IRMA ImmunoRadioMetric Assay (ellenanyag), ELISA Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, Immunfluoreszcencia, Avidin-biotin módszer, Immunoblot.

74 ELISA antigénellenanyag antigén-ellenanyag-antiglobulin +szubsztrát enzimmel konjugált antiglobulin

75

76 Jelzéses módszerek Radioimmunológiai eljárások (izotóp): RIA RadioImmune Assay (antigén), IRMA ImmunoRadioMetric Assay (ellenanyag), ELISA Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, Immunfluoreszcencia, Avidin-biotin módszer, Immunoblot, Immunhisztokémiai eljárások.

77 In vivo módszerek Allergiás diagnosztikai próbák meghatározott kórokozókkal való fertőzöttség, vannak-e a vizsgált szervezetben az alkalmazott allergénnel szemben áthangolódott sejtek.

78 In vivo módszerek Allergiás diagnosztikai próbák: Általános, vagy termikus próba, Helyi, vagy lokális allergiás próbák: Szempróba, Bőrpróbák.

79 In vivo módszerek Általános, vagy termikus próba Az allergént bőr alá, vagy a véráramba fecskendezzük. Az egész szervezetre kiterjedő általános reakciót vált ki (hőmérséklet emelkedése). + szervi, organikus reakció (izomremegés, szőrborzoltság, bágyadtság, étvágytalanság, az érverés és a légvételek számának emelkedése). + ún. gócreakció jelentkezése.

80 In vivo módszerek Helyi, vagy lokális allergiás próbák: Szempróba: lovak malleolus fertőzöttségének kimutatása, kötőhártya: mallein cseppentése  savós-gennyes gyulladás, Bőrpróbák: intradermális próba (bőr irharétege), gümőkór, malleus, brucellózis kórjelzése, elbírálás: bőr megvastagodása, fájdalmassága + bőrduzzanat  3 mm, 2-3 mm és fájdalmas.

81 Tuberkulin (Mantoux) próba

82 Praeallergia: áthangolódási időszak (fertőzés  szenzibilis állapot; nap). Anergia: csökkent reaktivitású sejtek (szeptikémiás állapot, reakciókészség  ). Parallergia: a szervezet tuberkulinnal szembeni érzékenysége más fajú Mycobacterium fertőződés következménye (közös antigén komponensek). Heteroallergia: egyes fertőző, vagy parazitás betegségek esetén: szövetkárosodás  atípusos mycobaktériumok hatolnak a szervezetbe.

83 Felhasznált irodalom Bárdos L., Husvéth F., Kovács M.: Gazdasági állatok anatómiájának és élettanának alapjai. Mezőgazda Kiadó, Budapest Brydl E. (szerk): A szarvasmarha anyagforgalmi betegségei és megelőzésük. Mezőgazdasági Kiadó, Budapest Gaál T. (szerk): Állatorvosi klinikai laboratóriumi diagnosztika. Sík Kiadó, Budapest, Tuboly Sándor: Állatorvosi járványtan. I. (állatorvosi mikrobiológia). Mezőgazda Kiadó, Budapest, Vrzgula L. et al.: A gazdasági állatok anyagforgalmi betegségei és megelőzésük. Mezőgazdasági Kiadó, Budapest


Letölteni ppt "Laboratóriumi diagnosztikai módszerek. A nagyüzemi szarvasmarha állományok anyagforgalmi ellenőrzése anyagcsere-profilvizsgálatok, nutritív-profil vizsgálatok,"

Hasonló előadás


Google Hirdetések