Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA Fekete Jenő: Folyadékkromatográfia, BME jegyzet, Budapest, 2003. Shimadzu:Introduction to HPLC.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA Fekete Jenő: Folyadékkromatográfia, BME jegyzet, Budapest, 2003. Shimadzu:Introduction to HPLC."— Előadás másolata:

1 FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA Fekete Jenő: Folyadékkromatográfia, BME jegyzet, Budapest, Shimadzu:Introduction to HPLC

2 Kromatográfiás módok összehasonlítása A HPLC a kis illékonyságú poláris anyagok analízisére legalkalmasabb.

3 Elválasztás függése a szelektivitástól és a hatékonyságtól HPLC hatékonysága mérsékelt (< N), de szelektív).

4 A zónaszélesedés okai HPLC-nél A HPLC-ben a diffúziós folyamatok és az áramlási sebesség sokkal kisebb mint GC-nél.

5 Van Deemter görbe a HPLC-ben A lassú diffúzió miatt nincs felszálló ág a lassú áramlási sebességeknél.

6 Nagyhatékonyságú kromatográf (HPLC) vázlata A gázmentesítés (degasser) fontos, hogy a pumpa folyadékot tudjon felszívni, és csökkenjen az alapvonal zaj (noise).

7 HPLC készülék A pumpák 250 att-ig dolgoznak általában Fontos az oldószer gázmentesítése

8 Pumpa Motor & Cam Plunger Plunger seal Check valves Pump head

9 Oldószerkeverék előállítása HPLC pumpával Kisnyomású ágon a pumpa beállított arányban beszívja az eluenseket, amik nagynyomású ágon összekeveredve jutnak az oszlopra.

10 Folyadékkromatográf pumpája A folyadékáram pulzálását általában két pumpa ellentétes járásával csillapítják

11 Elúciós gradiens előnye HPLCben A gradiens gyorsabb analíziseket és érzékenyebb detektálást biztosít.

12 Oldószerek polaritási sora

13 Forgócsapos (rotary valve) injektálás HPLCben A hurok (loop) pontos mennyiségű, áramlás megzavarása nélküli beinjektálást biztosít.

14 On-line SPE-HPLC analízis elrendezés Az előoszlopon gyűjtés alatt gyenge a mozgófázis. Lemosás erősebb mozgófázissal történik, de úgy hogy a minta szűk tartományban maradjon a fő oszlop elején.

15 Poláris növényvédő szerek HPLC analízise

16 Integrált előoszlop HPLCben Az előoszlop megvédi a fő oszlopot az elkoszolódástól, és a kioldódástól.

17 HPLCs előoszlop Az előoszlop megvédi a fő oszlopot az elkoszolódástól, és a kioldódástól.

18 Dead volume Az oszlop csatlakozásnál vigyázni kell a holttér elkerülésére. Tube Male nut Dead volume Excellent connection Poor connection

19 Szemcseméret és porozitás befolyása a hatékonyságra A hatékonyság annál jobb minél kisebbek a szemcsék, de a nyomásesés határt (3-5 µm) szab a méretcsökkenésnek. A porozitásra a terhelhetőség miatt van szükség. A mély üregek rosszul mosottak. Gömb alakú szemcsék a legelőnyösebbelk.

20 A kisebb méretű szemcsék alkalmazása a fejlődés iránya

21

22 Javasolt pórusátmérő különböző molekulasúlyú mintákhoz Nagyobb molekula súlyú anyag nagyobb pórusátmérőt igényel, hogy a lukba beleférjen.

23 Különböző HPLC töltetek összehasonlítása Előnyök: monolit > gömbalakú > szabálytalan

24 Új fejlesztésű szemcse

25 Normál/Fordított fázis ÁllófázisMozgó fázis Normál Magas polsarítású (hidrofil) Alacsony polaritású (hidrofób) Fordított Alacsony polaritású (hidrofób) Alacsony polaritású (hidrofób) A fordított fázist használják leggyakrabban.

26 Oszloppolarítás - retenciós idő C 18 (ODS) CH 3 strong weak OH

27 Borított szilika szemcse szerkezete

28 A leggyakrabban használt C 18 HPLCs állófázis szerkezete Apoláris anyagoknak nagyobb a retenciója. Mozgófázis poláris oldószer (víz, metanol, acetonitril).

29 Oldószer erőség – retenciós idő fordított fázison 60 / 40 Mobile phase: Methanol /Water 80 / / 30 Methanol / Water

30 C 18 fázis kondicionálása Metanolos mosás kell, hogy a víztartalmú mozgófázis nedvesítse a C 18 állófázist.

31 Oldószererősség hatása fordított (C 18 ) HPLCs állófázison Az oldószererősség csökkenésével nő a retenció és a felbontás.

32 Poláris növény védőszerek HPLCs vizsgálata Aminok speciális passziválású állófázist igényelnek

33 Karbamát és triazin növényvédő szerek HPLC-UV vizsgálata

34 Normál fázisú, adsorptiós kromatográfia Az állófázisnak csak a felszíne lép kölcsönhatásba

35 Normál fázisú analízis

36 Ioncserés kromatográfia elve Az állófázis ionjai visszatartják az ellentétes töltésű ionokat. Az erősebb ionoknak ( Cl - > CO 3 2- ) nagyobb a retenciója.

37 Anionok ionkromatogramja Az állófázis anioncserélő gyanta

38 Anionok analízise ppb szinten ionkromatográffal szúpresszor segítségével

39 Gélkromatográfia (gel chromatography, size exclusion chromatography) eleve A nagy molekulák mivel nem férnek be a kis csatornákba kisebb kölcsönhatással bírnak, ezért hamarabb elúálódnak.

40 Gélkromatográfia (méretkizárásos, size exclusion), alapja A nagy molekulák mivel nem férnek be a kis csatornákba kisebb kölcsönhatással bírnak, ezért hamarabb elúálódnak.

41 Molecular imprinted phase (MIP) Nagy szelektivitás, gyenge hatékonyság

42 Karbamát növényvédő szerek HPLC-UV analízise A HPLC-s analízisek előtt a karbamát peszticid tartalmat egy adatként mérték.

43 Karbamát rovarölő szerek HPLC-UV analízise speciálisan kifejlesztett állófázison Az anyagok hőbomlásuk miatt nem alkalmasak GCs elemzésekre

44 Különböző detektorokkal elérhető kimutatási határ, és szelektivitásuk jellemzése Electrokémiai Sz Tömeg spektrométer U Fluoreszcens Sz Ultraibolya Sz Törésmutató U Fényszórás U Sz, szelektív; U, univerzális

45 UV/VIS detektor A  ·C·l  = –log (E out / E in ) ( A : Absorbance) l C : Concentration Cell E in E out A C D 2 / W Lamps

46 Diodasoros (DAD) UV-VIS detektor vázlata

47 Különböző funkciós csoportokhoz ajánlott detektálási hullámhossz HPLC-UV analíziseknél

48 Fényszórásos HPLC detektor Universális érzékeny detektor

49 On line HPLC/MS kapcsolat


Letölteni ppt "FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA Fekete Jenő: Folyadékkromatográfia, BME jegyzet, Budapest, 2003. Shimadzu:Introduction to HPLC."

Hasonló előadás


Google Hirdetések