Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és gének csapdázása.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és gének csapdázása."— Előadás másolata:

1 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és gének csapdázása

2 A mutátor elem felépítése meghatározza a P elem mutagenezis jellegét  enhanszer csapdázás  enhanszer csapdázás – génexpresszió, mutagenezis, klónozás  Géncsapdázás  Géncsapdázás – génexpresszió, mutagenezis, klónozás  irányított génexpresszió  irányított génexpresszió – génfunkció vizsgálata, kölcsönhatások  epitóp jelölés  epitóp jelölés – géntermékek követése és tisztítása, in vivo analízis  irányított génszupresszió  irányított génszupresszió – génfunkció vizsgálata, null fenotípus  helyspecifikus rekombináció  helyspecifikus rekombináció- génfunkció vizsgálata, többfunkciós gének  irányított géncsere  irányított géncsere – mutagenezis, gén és protein funkció vizsgálata

3 A P-lacW enhanszer csapdázó elem felépítése Génexpresszió követését teszi lehetővé Marker gén lehetővé teszi a P elem követését Bakteriális szekvencia a DNS klónozást teszi lehetővé P{PZ} enhanszer csapdázó elemben a rosy marker gén található a mini-white helyett P promóter Hsp70 terminátor szekvencia lacZ mini-white ori amp E B enhanszer gén

4 A patched gén közelébe inszertálódott P-lacZ elem expressziós mintázata imágókorongokban lábszárnyszem

5 A P-Gal4 alapú enhanszer csapdázás mechanizmusa P promóter Hsp70 terminátor szekvencia Gal4 mini-white ori amp E B enhanszer 5xUAS lacZ/gfp gén detektálás Gal4

6 GFP riporter expressziója P-Gal4 enhanszer csapdázó vonalakban

7 Enhanszer csapdázó inszerciók létrehozása P-lacZ P(w + ) P(Δ2-3), Sb TM6, Tb XP-lacZ P(Δ2-3), Sb Y Y Y W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- Y W-W-W-W-P-lacZP-lacZvagy X „jump-starter” hímek mutátor törzs transzpozáz forrás lacZ expressziójának detektálása

8 A enhanszer csapdázás előnyei  A riporter gén expressziója speciális sejtmarkerként használható  Követhetők a sejtek az egyedfejlődés során  Egyedi identitást adhat a sejteknek olyan stádiumban, amikor morfológiailag még nem különülnek el  Gyakran nem érinti a gén funkcióját, vagy hipomorf allélt eredményez  Egyszerű mutációs analízist, és gyors klónozást tesz lehetővé

9 Az enhanszer csapdázás korlátai  Sok enhanszer csapdázó inszerció nem okoz mutációt  Nem mindig egyértelmű, hogy egy enhanszer szekvencia melyik gén expresszióját befolyásolja  Gyakran az érintett gén távol helyezkedik el az enhanszertől  Egy riporter gén aktivitását egyszerre több enhanszer szekvencia is befolyásolhatja

10 A kettősen jelölő pGT1 géncsapdázó elem felépítése Gal4 mini-whitehs-neoSASD promóter exon1 exon2 exon3 poli-A poli-Aexon1Gal4 mini-white exon2 exon3 5xUAS lacZ/gfp detektálás Gal4 w + szemszín

11 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: irányított génexpresszió

12 Irányított génexpresszió a Gal4 moduláris rendszerben - 1 P promóter Hsp70 terminátor szekvencia Gal4 mini-white ori amp E B enhanszer 5xUAS vizsgált gén gén Gal4

13 Irányított génexpresszió mechanizmusa -2 génmini-white ori amp UAS promóter Gal4 mini-white

14 Enhanszer csapdázás különleges esete: sejtek eliminációja P promóter Hsp70 terminátor szekvencia Gal4 mini-white ori amp E B enhanszer 5xUAS gyilkos gén gén Gal4 ricin, diftéria toxin reaper, grim, hid tetanusz toxin

15 poli-Amini-white SASD GFP FRTFRT FLP rekombináz GFPpromóter exon1 exon2 exon3 poli-A SASD GFP Az epitóp jelölés mechanizmusa

16 GFP epitóppal jelölt proteinek kifejeződése


Letölteni ppt "Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és gének csapdázása."

Hasonló előadás


Google Hirdetések