Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elemek mobilitásának szabályozása.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elemek mobilitásának szabályozása."— Előadás másolata:

1 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elemek mobilitásának szabályozása

2 Két szabályozási állapot létezik: az M és a P citotípusnak megfelelő. - kromoszómális és extra-kromoszómális faktorok P citotípusú állatokban a P elemek transzkripciósan szupresszált állapotban vannak: - transzkripciós szabályozás? - poszt-transzkripciós szabályozás? A szabályozási mechanizmus anyai hatást és anyai öröklődést mutat. A P elemek mobilitásának szabályozásában szerepe van az inszerciók genomikus pozícióinak is. A P elemek mobilitása szövetspecifikus. A szabályozási mechanizmus részletei nem ismertek. A P elemek mobilitásának szabályozása

3 P elem függő hibrid diszgenezis Nőstény szülő Hím szülő M P M M P normális diszgenikus Csak M és P törzsek közötti keresztezés okoz hibrid diszgenezist, de csak akkor, ha a hím származik a P törzsből P citotípusú M citotípusú

4 sn w X X Tesztelő törzs : sn w sn e sn + + A sn w genetikai esszé a transzpozáz aktivitás kimutatására

5 A P citotípus meghatározásában kromoszómális és extra-kromoszómális faktorok is szerepet játszanak DS: diszgenikus sterilitás X X X X DS: 2.2 % DS: 99.8 % DS: 3.9 % DS: 99.5 % DS: 4.2 % DS: 2.2 % DS: 40.4 % DS: 2.4 % G0G0 G1G1 G2G2 P citotípusú anyai öröklődés M citotípusú anyai öröklődés Pre-P

6 ORF 0 ORF 1 ORF 2 ORF 3 IR ATG TGA TAA AUG UAA AAAA AUG UGA AAAA AUG UAA AAAA belső deléció ivarsejt mRNS 87 kD transzpozáz szomatikus mRNS 66 kD represszor deléciós mRNS 24 kD represszor A P elem mobilitás szövetspecifitását alternatív RNS splicing biztosítja

7 Két szabályozási állapot létezik: az M és a P citotípusnak megfelelő. - kromoszómális és extra-kromoszómális faktorok P citotípusú állatokban a P elemek transzkripciósan szupresszált állapotban vannak: - transzkripciós szabályozás? - poszt-transzkripciós szabályozás? A szabályozási mechanizmus anyai hatást és anyai öröklődést mutat. A P elemek mobilitásának szabályozásában szerepe van az inszerciók genomikus pozícióinak is. A P elemek mobilitása szövetspecifikus. A szabályozási mechanizmus részletei nem ismertek. A P elemek mobilitásának szabályozása

8 P elem transzpozíció gátlásának molekuláris mechanizmusai 66kD 66kD 66kD Tnp TranszkripciósPoszt-transzkripciós aktív Tnp inaktív Tnp

9 Két szabályozási állapot létezik: az M és a P citotípusnak megfelelő. - kromoszómális és extra-kromoszómális faktorok P citotípusú állatokban a P elemek transzkripciósan szupresszált állapotban vannak: - transzkripciós szabályozás? - poszt-transzkripciós szabályozás? A szabályozási mechanizmus anyai hatást és anyai öröklődést mutat. A P elemek mobilitásának szabályozásában szerepe van az inszerciók genomikus pozícióinak is. A P elemek mobilitása szövetspecifikus. A szabályozási mechanizmus részletei nem ismertek. A P elemek mobilitásának szabályozása

10 A 66kDa represszor szerepe a P citotípus kialakításában dajkasejtek petesejt follikuláris sejtek P elemek olyan genomikus régióba inszertálódnak, amelyek expresszálódnak az oogenezis folyamán. A 66 kDa represszor fehérje termelődik a dajka és follikuláris sejtekben az oogenezis folyamán. A petesejt felhalmozza a 66 kDa represszor fehérjét, ami gátolja a transzpozáz képződését és aktivitását. A 66 kDa represszor fehérje jelenléte biztosítja a P citotípus anyai hatását és anyai öröklődését.

11 Két szabályozási állapot létezik: az M és a P citotípusnak megfelelő. A szabályozási mechanizmus anyai hatást és anyai öröklődést mutat. - kromoszómális és extra-kromoszómális faktorok P citotípusú állatokban a P elemek transzkripciósan szupresszált állapotban vannak: - transzkripciós szabályozás? - poszt-transzkripciós szabályozás? A szabályozási mechanizmus anyai hatást és anyai öröklődést mutat. A P elemek mobilitásának szabályozásában szerepe van az inszerciók genomikus pozícióinak is. A P elemek mobilitása szövetspecifikus. A szabályozási mechanizmus részletei nem ismertek. A P elemek mobilitásának szabályozása

12 X P elem inszerció TAS szekvencákban Riporter P elem inszerció Csökkent riporter expresszió P elem transzpozíció gátlásának „trans-silencing” modellje

13 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: mutagenezis I.

14 A P elem mutagenezis 1.Először P citotípusú P törzsekkel és vad típusú P elemekkel  Mutációk nem stabilak  A mutánsok több inszerciót is hordoznak  Körülményes a mutációk térképezése, és az érintett gének klónozása 2.Mutagenezis egyetlen P elem felhasználásával A mutagenezis egy-egy speciális P elemet hordozó nőstény és hím keresztezése során játszódik le.  Mutátor elemek (nem autonóm)  Jumpstarter elemek (nem autonóm) Mutáns vonalak egyetlen random mutátor inszerciót hordoznak. Az érintett gének könnyen azonosíthatók és klónozhatók.

15 A P-lacW mutátor elem felépítése lacZmini-white ori amp E B Génexpresszió követését teszi lehetővé Marker gén lehetővé teszi a P elem követését Bakteriális szekvencia a DNS klónozást teszi lehetővé

16 EcoRI P elemmel jelölt gének klónozása plazmid menekítési kísérletben ori amp EcoRI A gén B gén C gén EcoRIEcoRI A gén baktérium transzformáció és antibiotikum szelekció plazmid DNS izolálása és befogott gének azonosítása P elem inszerciósmutáns izolálása Genomikus DNS EcoRI emésztése majd ligálása menekítő plazmid

17 Domináns P elem inszerciós mutánsok izolálása P(w + ) P(Δ2-3), Sb TM6, Tb X P(w + ) P(Δ2-3), Sb Y Y Y W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- Y W-W-W-W- P(w + ) vagy X „jump-starter” hímek mutátor törzs transzpozáz forrás w - hímek szűrése domináns fenotípusra

18 Y W-W-W-W- P(w + ) W-W-W-W- W-W-W-W- SM5 Sco X Y W-W-W-W- W-W-W-W- W-W-W-W- SM5 F 2 az előző keresztezésből X Szűrés recesszív látható, vagy letális mutációra Recesszív P elem inszerciós mutánsok izolálása SM5


Letölteni ppt "Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elemek mobilitásának szabályozása."

Hasonló előadás


Google Hirdetések