Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

IMMUNKOMPLEXEK KIALAKULÁSA, SZEROLÓGIAI REAKCIÓK (PRECIPITÁCIÓ)

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "IMMUNKOMPLEXEK KIALAKULÁSA, SZEROLÓGIAI REAKCIÓK (PRECIPITÁCIÓ)"— Előadás másolata:

1 IMMUNKOMPLEXEK KIALAKULÁSA, SZEROLÓGIAI REAKCIÓK (PRECIPITÁCIÓ)

2 IMMUNKOMPLEX Az antigénnek az ellenanyaggal alkotott szolubilis komplexei. A komplexképződés pillanatszerűen is lejátszódhat, egyensúlyra vezető folyamat. Nem azonos a precipitátummal! A precipitátum az immunkomplexekből fizikai-kémiai folyamatok során keletkező oldhatatlan csapadékot jelenti. Időigényes folyamat.

3 Precipitációs görbe antigéntúlsúly EKVIVALENCIA ellenanyagtúlsúly sok csapadék kevés csapadék növekvő ellenanyag mennyiség

4 Ekvivalenciát befolyásoló tényezők: -valencia -pH -hőmérséklet (pl., hideg agglutininek /IgM antitestek/ 4 °C,és meleg agglutininek /IgG antitestek/ 37 °C által mediált autoimmun hemolítikus anémiák) - sókoncentráció - idő (antigén-antitest kötődés pillanat alatt, míg a precipitátumhoz több óra kell) - egyéb (pl. PEG) – az oldékonyságot csökkenti IgM-pentamerIgA-dimer

5 MÓDSZEREK Immundiffúzió: - radiális egyszerű (Mancini) - radiális kettős (Ouchterlony) Elektroforézis: - immunoelektroforézis - rakéta elektroforézis - két-dimenziós elektroforézis - izoelektromos fókuszálás és immunofixálás Nefelometria (fény csökkenés mérése) Turbidimetria (fényszórás mérése)

6 Antigén koncentráció meghatározása radiális immundiffúzióval Antigént tartalmazó lyuktól való távolság Az optimális arányt adó antigén koncentráció. IgG koncentráció mérése stérumból radiális immundiffúzióval. A standardok átmérője lehetővé teszi a kalibrációs görbe megrajzolását. A vizsgált szérum minta IgG koncentrációja a görbéről leolvasható: - T1 – IgG mielómás beteg szérumából; 15 mg/ml - T2 – hipogammaglobulinémiás beteg széruma; 2,6 mg/ml - T3 – normál szérum; 9,6 mg/ml A gyűrű átmérője IgG koncentráció (mg/ml) Radiális immundiffúzió: az antigén koncentráció és a precipitációs gyűrű méretének kapcsolata. A nagyobb koncentrációjú antigén (Ag1) a lyuktól messzebbre vándorolva éri el azt az egyensúlyi állapotot, ahol a megfelelő ellenanyag-mennyiséggel precipitátumot képez. Precipitációs gyűrű Antigén koncentráció

7 Ag koncentráció A precipitációs gyűrű átmérője Bakteriális extra-intracelluláris enzimek, anyagcseretermékek Pl., koaguláz termelés (S. aureus)

8 Radiális kettős immundiffúzió

9

10 „Rakéta elektroforézis” Elektroimmunodiffúzió (Laurell) koagulációs faktorok kimutatása (pl., vWF, trombin aktivitás) A rakéta alakú precipitációs csúcsok magassága arányos az antigén koncentrációjával

11 Immunelektroforézis Immunprecipitáció Az antigén-ellenanyag kapcsolódást követően képződő oldott immunkomplexeket szilárd fázishoz kötött anti- immunglobulin vagy protein A/G bakteriális fehérjék segítségével oldhatatlan formában izolálják. A szilárd fázishoz kötött immunkomplexek további elúciós lépések eredményeként, oldott állapotban visszanyerhetők.

12 Gammopátiák diagnosztikája: M komponens kimutatása zónaelektroforézis és immunoelektroforézis segítségével

13 Szerológiai módszerek alkalmazása Immundiffúzió: pl: bakteriális, virális és gomba antigének jellemzésére - radiális egyszerű (Mancini-módszer): antigének mennyiségének összehasonlító vizsgálata, szérum fehérjék ( immunoglobulin izotípusok [IgM, IgG, IgA], akut fázis fehérjék, transzferrin, komplement komponensek) mennyiségi meghatározása különböző testfolyadékokban, ellenanyagok mennyiségi meghatározása - radiális kettős (Ouchterlony módszer): precipitációs ekvivalencia zóna becslése, precipitáló ellenanyagok relatív szintjének (titerének) meghatározása, állandó ellenanyag koncentráció mellett az antigén mennyisége is megbecsülhető Elektroforézis: - immunoelektroforézis: szérum fehérjék frakciókra való elválasztása, plazmasejt diszkráziák (mielóma multiplex, Waldenström makroglobulinémia, elsődleges amiloidózis) során képződő, monoklonális eredetű immunoglobulinok kimutatása - rakéta elektroforézis: antigén/ellenanyag koncentráció meghatározása - két-dimenziós elektroforézis: elektroforetikus mobilitás alapján szétválasztott frakciók (pl: szérum fehérjék) koncentrációjának meghatározása, szérum, vizelet, cerebrospinális folyadék fehérjeösszetételének kvantitatív és kvalitatív vizsgálata Turbidimetria: ( érzékenység: 50 µg/ml) szérumban, liquorban nagy mennyiségben jelen lévő fehérjék vizsgálata Nefelometria: (érzékenység: 1 µg/ml) kis koncentrációjú szérum és liquor fehérjék, gyógyszer szintek mérése

14 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y precipitálás oldás blokkolás C1q C1r, C1s (aktív enzim) C4, C2 C3a C5,6,7,8,9 lízis gyulladás memória B-sejtek C3 C3b Y Y FcR fagocitózis citotoxicitás oldható komlexek kimutatása fizikai méret ppt (PEG, stb.) Anti-Ig Anti-C3 C1q kötés sejthez kötődés C3 receptor Fc receptor Az in vivo képződő immunkomplexek eltávolításának mechanizmusai Az in vivo képződő immunkomplexek eltávolításának mechanizmusai VVT CR1 CR3 Makrofág

15 Agglutináció típusai, gyakorlati alkalmazás A vörös- és fehérvérsejtek valamint baktériumok sejtfelszíni antigénjeivel (legalább mikroszkópikus méretű antigének) reagáló ellenanyagok a sejtek összeállását, agglutinációját idézhetik elő. Fajtái: direkt: Ellenanyagok kötődését az antigénhez a sejtek összecsapódása kíséri (pl. AB0 vércsoport antigének) - főleg IgM indirekt : Az antigén determinánsok elrendeződése nem teszi lehetővé az direkt összecsapódást. DE! A sejtek összecsapódása a kötött ellenanyagok Fc részéhez kötődő második ellenanyaggal kiváltható (pl. D vércsoport antigén(Rh)) (IgG) passzív: Megfelelően kezelt vörösvértestekhez vagy latex részecskékhez haptének vagy antigének kapcsolhatók, és ezekre specifikus ellenanyaggal agglutinálhatók (rheumatiod arthritis). A szérumban a saját IgG-vel reagáló IgM és IgG autoellenanyagok (RF) jelennek meg.

16

17 - reakció gyors ülepedés - reakció gyors ülepedés + reakció lassú ülepedés

18 vörös- vértest Direkt agglutináció pl. AB0 vércsoport meghatározás IgM antitest

19 Az ABO vércsoportantigének szerkezete A fenotípusok kialakulását kodominánsan öröklődő specifikus enzimek irányítják. O ANTIGÉNA ANTIGÉNB ANTIGÉN SZÉNHIDRÁT TÍPUSÚ ANTIGÉNEK

20 Donorválasztás az ABO-vércsoport antigének alapján Ma már csak elvi lehetőség, rutinban kizárólag csoportazonos (AB0 és Rh) vér transzfundálható!

21 Vércsoport meghatározás Ágy melletti gyorsteszt Hagyományos csempés meghatározás Microplate-s meghatározás Gélkártyás technika

22 Indirekt agglutináció pl. Rh vércsoport meghatározás vörös- vértest IgG szekunder ellenanyag (antitest)

23 A Rhesus (Rh) vércsoportantigén (D) IgG típusú ellenanyag direkt agglutinációt nem vált ki (inkomplett ellenanyag), de emberi immunglobulinokkal reagáló 2. ellenanyaggal az agglutináció kiváltható indirekt agglutináció FEHÉRJE ANTIGÉN A VÖRÖSVÉRTESTEKEN citoplazmamembrán extracelluláris tér intracelluláris tér D antigén D antigén Anti-D antitest

24

25 Az agglutináció in vivo következményei ABO inkompatibilitásintravascularis haemolysis ( komplement mediálta hemolízis) Rh inkompatibilitáserythroblastosis fetalis ( vvt-ek opszonizálása, majd MF –ok, granulociták általi fagocitózis) Rh profilaxis Ha az első Rh+ magzat születését követően 72 órán belül az anyai szervezetbe anti-D Ea-t juttatnak, megelőzhető az anyai ellenanyagok képződése.

26 Passzív agglutináció (diagnosztikai/indikátor módszer) Rheumatoid arthiritis: a szérumban a saját IgG-vel reagáló IgM autoellenanyagok (RF = reuma faktor) jelennek meg. Humán immunglobulin antigéneket fixálva latex gyöngyök / vvt-k felszínére és ezeket az RA-s beteg szérumával reagáltatva agglutináció következik be, ha a szérumban RF van jelen.

27 Hemagglutináció ellenanyagok jelenléte nélkül? Igen, virális fehérjékkel pl.: influenza, mumpsz pl. vírus ellenes ellenanyagok kimutatása Az agglutinációt gátló ellenanyagok a receptor kötést (sziálsav) is gátolják, tehát vírusneutralizáló sajátságúak (Nem immunológiai reakció!!!)

28 Gyakorlati alkalmazás direkt agglutináció:ABO vércsoport meghatározás Widal-teszt: tiphoid láz, febris undulans indirekt agglutináció:anti-D Ea jelenlétének kimutatása direkt Coombs-teszt: vércsop. inkompatibilitás, autoimmun hemolitikus anémia indirekt Coombs-teszt: transzfúzió előtt, terhesség alatt passzív agglutináció:rheuma faktor kimutatása terhességi monoteszt

29


Letölteni ppt "IMMUNKOMPLEXEK KIALAKULÁSA, SZEROLÓGIAI REAKCIÓK (PRECIPITÁCIÓ)"

Hasonló előadás


Google Hirdetések