Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

A B ÉS T SEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA. A humorális immunválasz szakaszai Felismerés Aktiváció: B sejt proliferáció és differenciáció Nyugvó IgM+, IgD+

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "A B ÉS T SEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA. A humorális immunválasz szakaszai Felismerés Aktiváció: B sejt proliferáció és differenciáció Nyugvó IgM+, IgD+"— Előadás másolata:

1 A B ÉS T SEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA

2 A humorális immunválasz szakaszai Felismerés Aktiváció: B sejt proliferáció és differenciáció Nyugvó IgM+, IgD+ érett B sejtek Aktivált B sejtek Helper T sejtek, egyéb stimulusok Klonális expanzió Antitest szekréció Izotípus váltás Affinitás érés Memória B sejtek

3 A T sejt válasz szakaszai Klonális expanzió Antigén felismerés Differenciáció Aktiváció Effektor funkciók Macrophagok, B sejtek, aktiválódása Fertőzött target sejtek ölése; macrophag aktiváció Perifériás szövet Lymphoid szövet

4 B sejt receptor szignál Antigén keresztköti a membrán IgG-t Tirozin foszforilációs események Aktívenzimek Biokémiai intermedierek Transzkripciós faktorok PLCγ aktiváció Ras-GTPRac-GTP Emelkedett Ca++ a citoszolban GTP/GDP csere a Ras, Rac-on Ca++ függő enzimek IP3 Ser/thr kináz

5 T sejt receptor komplex általi szignalizáció A TCR-mediált szignaling kezdete Biokémiai intermedierek Disztális szignál enzimek Transzkripciós faktorok Emelkedett Ca++ a citoszolban PLCγ aktiváció (Protein Páz)- IL2 válasz)

6 szinte mindegyik lépés gátolható A B-sejtek T-sejt függő aktivációja és a T sejtek APC általi aktivációja A gátlás következményeiből következtethetünk az aktivációs folyamatok mikéntjére A gátlás következményeiből következtethetünk az aktivációs folyamatok mikéntjére.

7 A sejtfunkciók gátlása a klinikai gyakorlatban - immunszuppresszió - gyulladások (bőrgyógyászat, tüdőgyógyászat, stb.) - transzplantáció - allergiás kórképek - autoimmun betegségek Használt hatóanyagcsoportok/technikák Kortikoszteroidok - Kortikoszteroidok - citosztatikus anyagok (alkilálószerek (CP,klorambucil), folsavantagonisták (MTX), purin- /pirimidin-szintézis gátlói-AZA) - Nem citosztatikus hatású immunszuppresszív szerek (cyclosporin A, tacrolimus/sirolimus, leflunomide) - citokin-receptor elleni antitestek, blokkoló citokin-elleni antitestek - Leukaferezis - Nagy dózisú iv. immunglobulin (IVIg)

8 Kortikoszteroidok Glükokortikoid R GRE (glukokortikoid recognition element) (NF-κB, AP-1) PLA2 gátlása – arachidon(sav) anyagcsere gátlás csökken az IL-1, TNF-α, IL-4, és más citokinek szintézise

9 célsejtekhatás T sejtek lympholysis, citokintermelés gátlása B sejtek minimális hatása van az Ig termelésre Makrofágok Az MHCII expresszió gátlása, citokin termelés gátlás, prosztaglandin termelés és felszabadulás gátlása Neutrofil granulociták Adhézió gátlás Eozinofil, bazofil, és hízósejtek Eosinopenia, a degranuláció gátlása Endothelium Adhéziós molekulák expressziójának gátlása, PGE termelésének és felszabadulásának gátlása Fibroblasztok PGE termelés és felszabadulás gátlás Glukokortikoszteroidok hatásai az immunrendszer elemeire

10 Kortikoszteroidok megbízható hatás, megbízható mellékhatások Szisztémásan adott szteroidok mellékhatásai, a teljesség igénye nélkül: -Elhízás (centrális típusú) -Növekedési visszamaradás gyermekkorban -Fogékonyság fertőzésekre -Thrombosishajlam, coronariabetegség kockázata nő -Elhúzódó sebgyógyulás, fekélyek kialakulás -Gyomorfekély -Osteoporosis, asepticus csontnecrosis, szteroidmyopathia -Hypertonia -Hirsutismus, bőr atrophia, szteroid acne -Glaucoma, cataracta -Psychés zavarok Rendszabályok: szigorú dózishatárok, alternáló adagolás, fokozatos leépítés Lokális alkalmazás: kevesebb (elhanyagolható) mellékhatás!

11

12 Az immunsejtek proliferációjának gátlásával is immunszuppresszió érhető el: citosztatikumok Tumorterápiás szerek, amik a limfociták osztódásának a gátlásához is felhasználhatóak, de némelyik igen súlyos mellékhatások árán. - alkiláló szerek (cyclophosphamid, chlorambucil) purinbázisokhoz kötödő, DNS-replikáció gátlók; hatékonyak, de súlyos mellékhatások árán, pl. szinte biztos leuko- és lymphopaenia - folsavantagonisták (methotrexát) nukleinsav szintézis gátló, szükség esetén folsav támogatást igényel; hepatotoxikus (májenzimek időszakosan ellenőrzendők!) - purin antagonisták (6-merkaptopurin, azathioprin, mikofenolát mofetil) purin szintézis gátlás – a T- és B-sejtek nem rendelkeznek megkerülő, „salvage” purinhasznosító útvonallal, csak de novo szintézisre képesek - pirimidin antagonisták Immunfunkció gátlás

13 Cyclosporin A – 11 aminosavas ciklopeptid (Tolypocladium inflatum talajlakó gomba termeli) ciklofilinekhez kötődik, amelyek így nem tudják aktiválni a calcineurint, nincs NF-AT aktiváció  gátolt az interleukin szintézis (főleg T-sejt eredetű IL-2) Immunofilin gátlószerek („kalcineurin inhibitorok”) – ciklosporin hatású, nagyméretű gyűrűs vegyület, makrolid antibiotikum (Streptomyces tsukubaensis – baktérium termeli, 'Tsukuba macrolide immunosuppressant‘) Tacrolimus (FK506) – ciklosporin hatású, nagyméretű gyűrűs vegyület, makrolid antibiotikum (Streptomyces tsukubaensis – baktérium termeli, 'Tsukuba macrolide immunosuppressant‘) A tacrolimus előnye, hogy a bőrön át is felszívódik, így atópiás dermatitisben lokálisan használják. Sirolimus (rapamycin) Streptomyces hygroscopicus – (Rapa Nui avagy Easter Island - Húsvét szigetekről származó mikroba termeli)

14

15

16 Citotoxikus és blokkoló antitestek: CD3(OKT-3), CD4, CD2, CD7, CD25, HLA-DR Otelixizumab/visilizumab, alefacept (aCD2), Rövid távú tapasztalatok vannak ezzel a technikával, a korai xenogén (ált. egér) antitesteket felváltották a kiméra, majd a humanizált antitestek. Utóbbiak <5% egér eredetű komponenst tartalmaznak, így a hatásukat semlegesítő antitestválasz ritkább. További lehetőség: toxinokkal/izotóppal konjugált antitestek célzott sejtpusztításra (pl. Zevalin - ) További lehetőség: toxinokkal/izotóppal konjugált antitestek célzott sejtpusztításra (pl. Zevalin - ittrium-90) FTY720 (fingolimod) Isaria sinclairii gomba termeli, a limfocita adhéziót befolyásolja az α4/β7 integrinen keresztül. Hatására a limfociták száma lecsökken a keringésben és a nyirokcsomókban akkumulálódnak. (phase III clinical trials) Anti-citokin antitestek: Anti-TNFα-antitestek  RA infliximab, adalimumab szolubilis TNFα-rec. (etanercept - Enbrel)  RA, JCA (2006 óta törzsk.) anti-IL2  transzplantáció Leflunomid Hatása a rapamycinhez hasonló, DMARD („disease modifying antirheumatic drug”)-ként 2005 óta törzskönyvezett RA-ban és arthritis psoriaticaban dihydroorotate dehydrogenase gátlás

17 Az antigén-specifikus T és B sejtek gyakorisága kicsi. A poliklonális T/B-sejt aktivációt kiváltó anyagok, és módszerek hasznosak lehetnek a sejtek funkcionális vizsgálatában.

18 Poliklonális T-/B-sejt aktivációt kiváltó anyagokkal, és módszerekkel végezhető el a sejtek funkcionális vizsgálata. Az immundeficienciák nagy része különböző funkcionális vizsgálatokkal mutathatók ki. Az antigénnel való aktiválás technikailag nehezen lenne kivitelezhető, mert az antigén-specifikus T- és B-sejtek gyakorisága kicsi.

19 A T- ÉS B-LIMFOCITÁK FUNKCIONÁLIS AKTIVITÁSÁNAK MÉRÉSE 1)A T- és B-sejtek poliklonális aktivációja a TCR vagy a BCR nem antigén- specifikus aktivációjával  lektinek (PHA, ConA) által indukált aktiváció  anti-IgM, anti-CD3 vagy anti-TCR ellenanyaggal, allogén T-sejt aktiváció 2)Az aktivációt követő T- és B-sejt válasz jellemzése  aktivációs markerek  intracelluláris események vizsgálata  proliferatív válasz  ellenanyag és/vagy citokin termelés (ELISA, CBA) 3)Az aktivált T- és B-sejtek számának meghatározása az antigén hatás után  ELISPOT  intracelluláris citokin jelölés  pentamer (vagy tetramer) technika

20 A LIMFOCITÁK POLIKLONÁLIS AKTIVÁCIÓJA LPS, LEKTINEK, PMA+IONOMYCIN JELENLÉTÉBEN B-sejt (egér) T-sejt BCR vagy TCR-specifikus ellenanyagok is a megfelelő sejtek poliklonális aktivációját okozzák LPS a TLR4-en keresztül aktiválja a sejteket A lektinek (pl. Con A, PHA) szénhidrát kötő fehérjék. A sejtfelszíni glikozilált receptorok keresztkötésével aktiválják a sejteket. Az Ionomycin a külső Ca 2+ ionok beengedésével aktiválja a sejteket, szinergizálva a protein kináz C-hez kötődő PMA-val TLR4

21 Poliklonális B sejt aktivátorok hatásai AktivátorT-sejt függésIg szekréció Humán B sejt PWM (pokeweed mitogen) nincsvan SpA (szuperantigén, staphylococcus protein A) nincsvan EBV (transzformáló hatású is) vanvan Anti-Igvan citokinek jelenlétében Egér B sejt LPSnincsvan PWMvanvan PPD (purified protein derivate, mikobakteriumból) nincsvan Anti-Ignincs citokinek jelenlétében Poliklonális T sejt aktivátorok Phytohaemagglutinin (PHA) lektin Canavalia ensiformis Concanavalin A (ConA) lektin Phaseolus vulgaris anti-CD3 Monoklonális ellenanyag

22 Pokeweed (PWM) (Phytolacca americana) – formerly used for coloring red wine (toxic: triterpene saponin) Chenopodiales Phytolaccaceae

23 Phytohaemagglutinin (PHA)  Canavalia ensiformis – Jackbean, Sword bean

24 Concanavalin A (ConA)  Phaseolus vulgaris – bean


Letölteni ppt "A B ÉS T SEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA. A humorális immunválasz szakaszai Felismerés Aktiváció: B sejt proliferáció és differenciáció Nyugvó IgM+, IgD+"

Hasonló előadás


Google Hirdetések