Gélelektroforézis Molina Csaba
Gélelektroforézis Elektroforézises eljárások: Méret szerinti elválasztására alkalmazott gyakori módszer A molekulák a töltésüknek megfelelő irányba kezdenek el vándorolni Felhasználható az izoelektromos pont meghatározására Tiselius-elektroforézis (vándorló határfelületek módszere) Zóna-elektroforézis A mintát keskeny sáv formájában visszük be, az elektroforézis előrehaladtával külön sávra különülnek el Tiszta folyadékban a sávok elmosódhatnak, ezért célszerű valamilyen hordozó anyagon végezni az elválasztást.
Gélelektroforézis Gélelektroforézis: állófázisai hálózatos szerkezetű gélszerű anyagok, melyek labirintust képezve a molekulamérettel arányos sebességű áramlást biztosítanak Alkalmazható gélek: keményítő agar-agar poliakrilamid cellulóz-acetát
Gélelektroforézis Fehérjék meghatározása: SDS-PAGE Izoelektromos fókuszálás: agaróz gélben pH gradiens hozunk létre
Gélelektroforézis Nukleinsavak elválasztása: A negatív töltésű nukleinsav molekulák az elektroforézises cella pozitív pólusa felé vándorolnak Az elválasztáshoz szükséges ellentétes irányú visszatartó erőt a gélmátrix térhálós szerkezete adja. A vándorlási sebességet befolyásoló tényezők: fragmens mérete fragmens konformációja gél koncentrációja áramerősség
Gélelektroforézis Fragmentek láthatóvá tétele, kiértékelése: Etídium-bromid: hozzákötődik a DNS-hez és UV fényben fluoreszkál Gyors festés: sample loading dye + fast blast
Gélelektroforézis
Gélelektroforézis
Gélelektroforézis
Köszönöm a figyelmet