Polimeráz Láncreakció:PCR, DNS ujjlenyomat

Az előadások a következő témára: "Polimeráz Láncreakció:PCR, DNS ujjlenyomat"— Előadás másolata:

1 Polimeráz Láncreakció:PCR, DNS ujjlenyomat

2 A molekuláris biológia centrális dogmája
transzkripció transzláció DNS RNS Fehérje Reverz transzkriptáz DNS által tárolt információ: - fehérjék szerkezete - fehérjeszintézis időbeli és mennyiségi meghatározása Nukleinsavak: nukleotid egységekből felépülő polimerek. RNS: adenin, guanin, citozin, uracil bázist tartalmazó ribonukleotidok DNS: adenin, guanin, citozin, timin bázist tartalmazó dezoxi-ribonuleotidok

3

4

5 A DNS bázissorrendje egyedi: jellemző DNS részletek alapján tulajdonosa meghatározható
ATTCGGTAATCGATCGAAGGCATTCGTAGCTTAGGCATG TAAGCCATTAGCTAGCTTCCGTAAGCATCGAATCCGTAC Ha ezt a DNS részletet ki tudjuk mutatni azzal meghatároztuk az adott élőlényt (vírust, baktériumot gombát, embert). Hogyan tudjuk ezt a gyakorlatban megvalósítani?

6 DNS izolálás

7

8 Primerpár: 15-25 bp hosszú kezdő DNS részlet, meghatározza a szintetizálandó DNS lánc hosszát

9 2. ciklus

10 Gélelektroforézis: A DNS láncok méret szerinti elválasztása
600 bp - UV Etidium-bromidos festés 100 V + 100 bp DNS Létra Pl.: 100 bp-os

11 - + + - A hosszúsága utal az ismétlődések számára
Egyetlen PCR terméket kapunk A termékek között kis méretbeli különbség kapilláris elfo - + + -

12 STR lókuszok, DNS ujjlenyomat
STR: short tandem repeat. Nem kóros ismétlődő szekvenciák Átlagosan 2-7 bp hosszúak Nem kódoló részen találhatók Egyedi ismétlődési mintázat Személyazonosításra felhasználható DNS ujjlenyomat A vizsgálat az STR lókuszok hosszúságpolimorfizmusán alapszik A PCR termékeket kapilláris elektroforézissel választják el.

13 Anya Gyerek Férfi 1 Férfi 2 bp

14 ?