A gélelektroforézis Alkalmazása: különböző molekulák (nukleinsavak, fehérjék) -méret szerinti elválasztását, -detektálását -mennyiségének meghatározását.

Az előadások a következő témára: "A gélelektroforézis Alkalmazása: különböző molekulák (nukleinsavak, fehérjék) -méret szerinti elválasztását, -detektálását -mennyiségének meghatározását."— Előadás másolata:

1 A gélelektroforézis Alkalmazása: különböző molekulák (nukleinsavak, fehérjék) -méret szerinti elválasztását, -detektálását -mennyiségének meghatározását (kvantifikálását) szolgálja A nukleinsav- elektroforézis alapelve: a nukleinsavak (megfelelő pufferoldatban) negatív töltésűek Egyenáram hatására a pozitív pólus felé vándorolnak

2 Az agaróz gél Agaróz: -térhálós szerkezetű poliszacharidláncokat tartalmaz -akadályozza nukleinsavak vándorlását -a kisebb méretűek gyorsabban vándorolnak („futnak”)

3 Az agaróz gél készítése
Agaróz+puffer (TBE, v. TAE) Melegítés: az agaróz oldódik a pufferben Kiöntés: dermed Zsebek kialakítása: fésű behelyezése Gélfestés: a nukleinsavak láthatóvá tételét szolgálja Etídium-bromid: kovalensen kötődik a nukleinsavakhoz Bekötődve fluoreszkál UV hatására UV alatt a nukleinsavak láthatóak

4 A minta felvitele és futtatása
A mintát pipettával a zsebbe mérjük Egyenáramot vezetünk át a gélen A nukleinsavak a pozitív pólus felé vándorolnak A nagyobb méretűek lassabban futnak Futás közben Et-Bromid kötődik be

5

6 Az eredmény

7 Fehérjék elektroforézise

8 Polimeráz láncreakció (Polimerase chain reaction, PCR)

9 Polimeráz láncreakció Polimerase chain reaction, PCR)

10 A PCR Bizonyos DNS-szakaszok kimutatása
Bizonyos DNS-szakaszok amplifikálása („felszaporítása”) Egyéb…

11