Fehérjeszekvenálás Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás.

Az előadások a következő témára: "Fehérjeszekvenálás Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás."— Előadás másolata:

1

2 Fehérjeszekvenálás Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

3 1.Miért van szükség az aminosav-sorrend meghatározására 2.A fenilizotiocianátos lebontás: az Edman reakció 3.A PTH-aminosavak azonosítása RP-HPLC-vel 4.A “pulsed-liquid phase” automata szekvenátor felépítése és mûködése 5.Mennyiségi és minõségi követelmények 6.Minták elõkészítése szekvenáláshoz 7.Blokkolt N-terminálisú minták szekvenálása 8.Peptidek és proteinek kémiai és enzimatikus fragmentálása 9.Blottolt minták vizsgálata 10.A szekvenálás eredményessége peptidek és proteinek esetén 11.Néhány sikeresen megoldott polipeptid aminosav-sorrend meghatározása Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

4 Miért van szükség az aminosavsorrend meghatározására? Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

5 A fenilizotiocianátos lebontás: az Edman reakció Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

6 Minták elõkészítése szekvenáláshoz Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

7 Peptidek és proteinek kémiai és enzimatikus fragmentálása Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

8 Enzimatikus hasítási módszerek Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

9 Kémiai hasítási módszerek Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

10 A szekvenálás eredményessége fehérjék esetén Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

11 A szekvenálás eredményessége peptidek esetén Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

12 Teljes szekvencia meghatározása HPLC-n TISZTÍTOTT  -AMILÁZ INHIBITOR BrCN, HANGYASAV AMINOSAV ANALÍZIS: AMINOSAV ÖSSZETÉTEL VINILPIRIDIN/  -MERKAPTOETANOL VINILPIRIDIN AMINOSAV ANALÍZIS: NINCS SZABAD Cys SZEKVENÁLÁS CIPKWNRCGPKMDGVPCCEPYTCTSDYYGNCS CIPKWNRCGPKM DGVPCCEPYTCTSDYYGNCS Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás

13 Diszulfid hidak lokalizációja TRIPSZINES/KIMOTRIPSZINES EMÉSZTÉS pH 5.2 SZEKVENÁLÁS RP-HPLC WNR CGPKMDGVPCCEPY Y CIPKGNCSTCTSDY CGPKTCTSDY MDGVPCCEPYCIPKGNCS ? Mikronalalitikai kurzus fehérjeszekvenálás