Mit csináltunk eddig ?. Jelenség Chemotaxis,LigandEndogén szignálmolekula szignálmolekula Módszer.

Az előadások a következő témára: "Mit csináltunk eddig ?. Jelenség Chemotaxis,LigandEndogén szignálmolekula szignálmolekula Módszer."— Előadás másolata:

1 Mit csináltunk eddig ?

2 Jelenség Chemotaxis,LigandEndogén szignálmolekula szignálmolekula Módszer

3 Jelenség  Con-A sapka  ‘0”-ás sejtek  Insulin receptor down-regulációja Tetrahymenában Tetrahymenában  Hormonális imprinting -időfüggése  Chemotaktikus szelekció  Chemotactic-Range-Fitting  Chemotaxis – SEA összefüggése

4 „Con-A sapka” ConA Kõhidai, L., Kovács, P. and Csaba G. Cyclic changes of concanavalin-A binding sites in Tetrahymena cell membrane. Acta Morphol. Hung. 33, 117-121 /1985 /

5 Sejtciklus -függés Kõhidai, L., Kovács, P. and Csaba G. Cyclic changes of concanavalin-A binding sites in Tetrahymena cell membrane. Acta Morphol. Hung. 33, 117-121 /1985 /

6 ‘0”-ás sejtek Kõhidai, L., Lovas, B. and Csaba, G. Effect of adrenocorticotropic hormone (ACTH) and insulin on the phagocytic capacity of Tetrahymena. Zool. Sci. 12, 277-281 /1995/

7 Insulin receptor down-regulációja 1 óra Ins előkezelés – FITC-Ins kötés Xóra múlva X óra Ins előkezelés utáni FITC-Ins kötés FITC-Ins kötés X órás Ins előkezelés után 24 órával Csaba, G. and Kõhidai, L. Modeling the insulin receptor in the Tetrahymena. Time-dependence of receptor formation, down-regulation and imprinting. Acta Protozool. 25, 331-338 /1986/

8 Hormonális imprinting – Hosszútávú hatás Insulin előkezelés hatása FITC-Insulin kötésre (Tetrahymena) Kõhidai, L., Csaba, G. and László, V. Persistence of receptor "memory" induced in Tetrahymena by insulin imprinting. Acta Morphol. Hung. 37, 269-275 /1990/

9 Kemotaktikus szelekcó Kevert populáció “kemotaktikus szelekció” Szubpopulációk többszöri átoltás kemotaxis Megváltozott (fokozott) válaszkészségű sejtek

10 Chemotaktikus szelekció Cont/ContCont/InsIns/ContIns/Ins 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Number of cells [%] y p< 0.01 y y x x p<0.05 Ch sel 1.57 Insulin Ch sel 1.12 IL-8 y y z z z z z z Ch sel 0.58 Ch sel 2.63 Ch sel 0.64 Ch sel 0.83 Kőhidai, L., Schiess, N. and Csaba, G. Chemotactic selection of Tetrahymena pyriformis GL induced with histamine, di- iodotyrosine or insulin. Comp. Biochem. Physiol. 126C, 1-9 /2000/

11 Chemotactic-Range-Fitting Attraktáns Neutrális Repellens

12 Aminosavak Kőhidai, L., Láng, O. and Csaba, G. Chemotactic-range-fitting of amino acids and its correlations to physicochemical parameters in tetrahymena pyriformis - evolutionary consequences. Cell Mol Biol. 49, OL /2003/

13 Chemotaxis – SEA összefüggése TetrahymenaLM3 Mass/SEA = molekulatömeg/solvent exposed area Láng, O., Illyés, E., Colombo, L., Hudecz, F., Kőhidai, L. SXWS szerkvenciák sejtfiziológiai hatásai LM2/LM3 adenocarcinoma sejtvonalak esetében. (MIT, Győr, 2003.)

14 Chemoattraktáns jelleg és molekuláris evolúció Kõhidai, L., Láng, O., Csaba, G. Chemotactic-range-fitting of amino acids and its correlations to physicochemical parameters in Tetrahymena pyriformis – Phylogenetical consequences. Cell Mol. Biol. 49: OL487-495 /2003/

15 Chemotaxis-Ligand  Steroid-steroid chtx. membrán rec.  Illóolajok  Aminosavak chtx. – fizikokémiai jell.  SXWS-család  Chemokin hatás protozoonban  Vasoactiv peptidek

16 Vízoldékony, CD-szteroidok Testosterone Dexamethasone 0 Progesterone Hydrocortisone  -Estradiol membrán - gyors - sejtmag - lassú -

17 Steroid-steroid chtx. membrán rec. -9-8-7-6-5-4-3 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 chemotaxis index [%] (control=100%) log konc. [mg/ml] z y z y y x -9-8-7-6-5-4-3 0 20 40 60 80 100 120 Chemotaxis index [%] (control=100%) log konc. [mg/ml] y xx x Kőhidai, L., Katona, J., Csaba, G. Effects of steroid hormones on five functional parameters of Tetrahymena: evolutionary conclusions. Cell Biochem. Funct. 21, 19-26 /2003/

18 Kõhidai, L., Lemberkovits, É. and Csaba, G. Molecule dependent chemotactic responses of Tetrahymena pyriformis elicited by volatile oils. Acta Protozool. 34, 181-185 /1995/ Illóolajok

19 pK (-COOH) pK (-NH 2 ) SEA [sqÅ] Oldallánc SEA [sqÅ] Rejtett oldallánc [%] Hydro- pathy index Kemoattraktáns széles cc.tart. 2.14±0.059.79±0.28148.3±15.761.95±8.3836.3±9.34-1.21 Intermediate2.12±0.079.35±0.12179.7±14.673.12±9.5734.87±7.140.9 Kemorepellens szűk cc. tart. 2.21±0.089.3±0.11218.2±14.4 102.25 y ±10.5243.00±9.910.78 Kemotaktikus jellegű aminosavak fizikokémiai jellemzői jellemzői Kõhidai, L., Láng, O., Csaba, G. Chemotactic-range-fitting of amino acids and its correlations to physicochemical parameters in Tetrahymena pyriformis – Phylogenetical consequences. Cell Mol. Biol. 49: OL487-495 /2003/

20 PROLIN TARTALMÚ DIPEPTIDEK KIS AMINO- TERMINÁLIS AMINOSAVAK - ERŐS KEMOTAKTIKUS HATÁST FEJTENEK KI Kőhidai, L., Soós, P. and Csaba G. Effects of dipeptides containing the amino acid, proline on the chemotaxis of Tetrahymena pyriformis. Evolutionary conclusions on the formation of hormone receptors and hormones. Cell-Biol. Internat. Rep. 21,341-5 /1997/

21 (W)SXWS motívum - Cytokin receptorok - Cytokin receptorok

22 SXWS-család – Fizikokémiai jelleg Kõhidai, L., Bõsze, Sz., Soós, P., Illyés, E., Láng, O., Mák, M., Sebestyén, F., Hudecz, F. Chemotactic activity of oligopeptides containing EWS motif on Tetrahymena pyriformis. The effect of amidation of the C-terminal residue. Cell Biochem. Funct. 21, 113-120 /2003/

23 SXWSaa A ++ S ++ M ++ P ++ H ++ T ++ E ++ I ++ Q ++ SXWSaa W -- F -- Y -- V -- K -- SXWSaa N +0 L 0-

24 SXWS – szerkezeti hasonlóság és eltérés Láng, Menyhárd, Sebestyén, Hudecz and Kőhidai Chemotaxis induced by SXWS tetrapeptides in Tetrahymena - Overlapping chemotactic effects of SXWS sequences and their identical amino acids. J. Mol.Recogn. (in press) Szerkezeti hasonlóság és eltérés

25 1 ng/ml IL-8 Chemokin hatás protozoonban 75 ng/ml RANTES Kőhidai, L. and Csaba, G. Chemotaxis and chemotactic selection induced with cytokines (IL-8, RANTES and TNF alpha) in the unicellular Tetrahymena pyriformis. Cytokine 10, 481-486 /1998/

26 Vasoactiv peptidek Kőhidai, L., Tóth, K., Ruskoaho, H., Csaba, G. Effect of vasoactive peptides in Terahymena – Chemotactic properties of endothelins (ET-1, ET-2, ET-3, fragment 11-21 of ET-1 and big endothelin) – a short-term inducible signaling mechanism of chemotaxis. Cell. Biol. Internat. 25, 1173-1177 /2001/

27 Endogén ligandok  Endothelin  ANP  IL-6  Insulin  Melatonin

28 INZULIN ENDOTHELIN-1 IL-6 ACTH RELAXIN MELATONIN Kőhidai, L. and Csaba, G. Effects of the mammalian vasoconstrictor peptide, endothelin-1, on Tetrahymena pyriformis GL, and the immunocytological detection of endogenous endothelin -like activity. Comp. Biochem. Physiol. 111C, 311-316 /1995/ Csaba, G., Gaál, Annamária, Kovács, P., Simon, G. and Kőhidai, L. Prolonged elevation of insulin content in the unicellular Tetrahymena after insulin treatment: induction of insulin production or storage ? Cell Biochem. Function 17, 165-173 /1999/ Kőhidai, L. Kovács, P., Lázár-Molnár, E., Csaba, G. Presence, uptake and localization of the cytokine, interleukine 6 /IL-6/ in the unicellular Tetrahymena pyriformis. Cell Biol. Internat. 24, 749-755 /2000/ Kőhidai, L., Vakkuri, O., Keresztesi, M., Pállinger, É., Leppaluoto, J., Csaba, G. Melatonin in the unicellular Tetrahymena: effects of different lighting conditions regarding possible functions of melatonin at this low level of evolution. Cell Biochem Funct. 20, 269-272 /2002/ Kőhidai, L., Vakkuri, O., Keresztesi, M., Leppäluoto, J. Csaba, G. Induction of melatonin synthesis in Tetrahymena pyriformis by hormonal imprinting - a unicellular „factory” of the indoleamine. Cell Mol. Biol. 49, 521-524 /2003/

29 Endothelin Kőhidai, L. and Csaba, G. Effects of the mammalian vasoconstrictor peptide, endothelin-1, on Tetrahymena pyriformis GL, and the immunocytological detection of endogenous endothelin -like activity. Comp. Biochem. Physiol. 111C, 311-316 /1995/

30 IL-6 Kõhidai, L. Kovács, P., Lázár-Molnár, E., Csaba, G. Presence, uptake and localization of the cytokine, interleukine 6 /IL-6/ in the unicellular Tetrahymena pyriformis. Cell Biol. Internat. 24, 749-755 /2000/

31 Insulin Csaba, G., Gaál, Annamária, Kovács, P., Simon, G. and Kõhidai, L. Prolonged elevation of insulin content in the unicellular Tetrahymena after insulin treatment: induction of insulin production or storage ? Cell Biochem. Function 17, 165-173 /1999/ Kontroll Ins. előkezelés

32 Melatonin Kõhidai, L., Vakkuri, O., Keresztesi, M., Pállinger, É., Leppaluoto, J., Csaba, G. Melatonin in the unicellular Tetrahymena: effects of different lighting conditions regarding possible functions of melatonin at this low level of evolution. Cell Biochem Funct. 20, 269-272 /2002/

33 Módszerek  Mikrohullámú fixálás – protozoon  Double-P chamber  Chemotaxis assay – multichannel  Biomorph

34 Mikrohullámú fixálás – protozoon Mikrohullámkezelés Vegyszerek, antitestek szabad internalizációja

35 Double-P chamber Kőhidai, L. Method for determination of chemoattraction in Tetrahymena pyriformis. Current Microbiology 30, 251-253 /1995/

36 Kőhidai, L., Lemberkovits, É. and Csaba, G. Molecule dependent chemotactic responses of Tetrahymena pyriformis elicited by volatile oils. Acta Protozool. 34, 181-185 /1995/ Chemotaxis assay – multichannel

37 Wikipedia (www.wikipedia.org)

38 Csaba György Kovács Péter Kincses Mariann Lovas Béla László Valéria Darvas Zsuzsa Pállinger Éva Wagner János Molnárné-Lázár E. Hudecz Ferenc Tóth Miklós Mező Gábor Illyés Eszter Sebestyén Ferenc Bősze Szilvia Jesse Roth Steven Marx Barsony Julia Heikki Ruskoaho Olli Vakkuri Juhanni Leppaluoto Szebeni János Rosalba Bancetti Soós Pál Schiess Nicoline Láng Orsolya Keresztesi Márk Tóth Katalin Kovács Krisztina Török Krisztina Kun Lídia Tarcsay Ákos Szabó Lajos Láng Júlia Lajkó Eszter Matlakovics B.