Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

A szabályozó fehérjék szabályozása. GAP Rac·GTP Rac·GDP GEF RhoGDI·Rac·GDP A Rac kis G fehérje szabályozása GAP = GTPáz aktiváló protein GEF = Guanin.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "A szabályozó fehérjék szabályozása. GAP Rac·GTP Rac·GDP GEF RhoGDI·Rac·GDP A Rac kis G fehérje szabályozása GAP = GTPáz aktiváló protein GEF = Guanin."— Előadás másolata:

1 A szabályozó fehérjék szabályozása

2 GAP Rac·GTP Rac·GDP GEF RhoGDI·Rac·GDP A Rac kis G fehérje szabályozása GAP = GTPáz aktiváló protein GEF = Guanin nukleotid kicserélő faktor GDI = Guanin nukleotid disszociáció inhibitor

3 A kis GTPázok alcsaládjai és szabályozó fehérjéi RAS RHO RAB ARF RAN H-Ras Rho-A Rab1- ARF1- Ran K-Ras Rho-B Rab32 ARF7 N-Ras Rho-C Rap1 Rac1 Rap2 Rac2 Ral Cdc42 GAPok 25 70 52 27 1 GEFek 50-60 Rho-GDIRab-GDI

4 Mi újság a GEF- ek körül?

5 (Zheng, 2001) A DH-GEFek domén szerkezete

6 GEF-ek GTPázok Target fehérjék

7 GEF-ek GTPázok Target fehérjék

8 GEF-ek GTPázok Target fehérjék

9 GEF-ek GTPázok Target fehérjék

10 GEF-ek GTPázok Target fehérjék PROBLÉMA: Hol a specificitás?

11 Specificitás pedig van: Patel et al. 2002, MBC, 13., 1215-1226

12 GEF-ek GTPázok Target fehérjék MEGOLDÁS: fehérje komplexek

13 PH/DHRGS p115RhoGEF 1. példa

14 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho

15 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje Jaffe A.B. et al. MCB 24. 1736. 2004; Cur. Biol. 15. 405. 2005;

16 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz

17 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P

18 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P MKK7

19 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P MKK7 Gα12

20 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P MKK7 Gα12 LPA-R Plazmamembrán

21 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P MKK7 Gα12 LPA-R Plazmamembrán

22 PH/DHRGS p115RhoGEF Rho CNK1 target/scaffold fehérje MLK2 kináz Jun → Jun-P MKK7 Gα12 LPA-R Plazmamembrán Kísérleti tény: CNK1 hiány: LPA-indukált jun-P hiányzik, de stressz-rost képzés változatlan CNK1 túltermelés: (GEF/Rho63 indukált) jun-P ↑ stressz-rost képzés ↓ (Rho megkötése)

23 2. példa Tiam-1 Rac Conolly BA et al., MCB 25. 4602. 2005.

24 2. példa Tiam-1 Rac IBS/JIP2 siderophilin IRSp53

25 2. példa Tiam-1 Rac IBS/JIP2 siderophilin IRSp53 p38 MAP kináz p70 S6 kináz WAVE 2 Aktin citoszkeleton

26 2. példa Tiam-1 Rac IBS/JIP2 siderophilin IRSp53 p38 MAP kináz p70 S6 kináz WAVE2 Aktin citoszkeleton

27 IRSp53 Cdc42 Mena filopódium képzés

28 IRSp53 Tiam-1 Rac Cdc42 DH/PH

29 IRSp53 Tiam-1 Rac Cdc42 DH/PH

30 IRSp53 Tiam-1 Rac WAVE2 lamellipodium képzés DH/PH

31 IRSp53 Tiam-1 Rac WAVE2 lamellipodium képzés DH/PH Ras PDGF-R

32 IRSp53 Tiam-1 Rac WAVE2 lamellipodium képzés DH/PH Ras PDGF-R Kísérleti tény: IRSp53 hiányban PDGF-R indukált lamellipódium képzés ↓

33 3. példa Cool-2/α-Pix (Cloned out of library 2) (PAK-interactive exchange factor) Feng et al., EMBO J. 23. 3492. 2004; Baird et al., Curr. Biol. 15. 1. 2005

34 Cool-2/α-Pix dimér mint Rac-GEF Cdc42 → Rac aktiválás mechanizmusa

35 Cool-2/α-Pix monomer mint Cdc42-GEF Gβγ + PAK kötődés

36 Cool-2/α-Pix monomer mint Cdc42-GEF Gβγ + PAK kötődés GEF-smg-target komplex

37 Gondolatok : 1.G-fehérje kaszkádok Gα12 → p115RhoGEF → Rho Ras → Tiam-1 → Rac Cdc42 → Cool-2/α-Pix → Rac 2. smg kezd „beágyazódni” (up-stream, down-stream kapcsolatok)

38 GAPok

39 Rho/Rac GAPok doménszerkezete TiCB 13. 13-22. 2001

40 Lipidek részvétele GAP-ok szabályozásában ChimaerinRac PMA, DAG, stb. ↑ / ↓ ASAP1ARF1, ARF5 PIP2↑ GITARF6 PIP3 ↑ ARAP1ARF1, ARF5 PIP3 ↑ Rho = ARAP3ARF6 PIP3↑ Brown et al. MCB 18. 7038. 1998; Vitale et al. JBC 275. 13910. 2000; Miura et al. Mol. Cell 9. 109. 2002; Krugmann et al. Mol. Cell 9. 95. 2002

41 Antonny B. et al. JBC 1997. 272. 30848. A PL szerkezet hatása az ARF-GAP1 aktivitására

42 Bigay J. et al. Nature 2003. 426. 563. A vezikulaméret hatása az ArfGAP1 aktivitására

43 Bigay et al. Nature 2003. 426. 563 Az ARF-GAP1 szabályozásának modellje

44 ARF1. Antonny B. et al. JBC 1997. 272. 30848-51 Az ARFGAP és ARFGEF lipid érzékenysége

45 Antonny B. et al. JBC 1997. 272. 30848-51

46 GTPáz4 x FFGAP A p190RhoGAP domén szerkezete PKCSrc

47 PS hatása az endogén GTPáz aktivitásra Rho Rac Ligeti et al. JBC 2004.

48 p190GAP relatív menyisége Bound 32 P-GTP (%) PS hatása p190 Rho-GAP és Rac-GAP aktivitására Rho Rac + PS Ligeti et al. JBC 2004.

49 [32P]GTP fogyás alapján [32P]foszfát keletkezés alapján A kísérletek kontrollja Ligeti et al. JBC 2004.

50 PS és SDS hatása a p190 Rho- és RacGAP activitására Ligeti et al. JBC 2004.

51 Különböző PL-k hatása a p190 GAP activitására Rho Rac Ligeti et al. JBC 2004.

52 A PKC hatása a p190 Rho- and RacGAP activitására ATP jelen ATP nélkül

53 P190 kísérletek újdonsága : GAP fehérje módosítása változtatja a szubsztrát specificitást Hasonló helyzet : MgcRacGAP → nem-foszforilált állapotban Rac/Cdc42-GAP foszforiláció után: Rho-GAP is Minoshima et al. Dev. Cell 4. 549. 2003.

54 Autoinhibició: p50GAP – nyitja: smg prenil csoportja RA-RhoGAP – nyitja: RapGTP kapcsolódás funkció: neurit növekedésben További példák GAP-szabályozásra

55 GAP hatástól független funkciók : p190GAP FF-domén TFII-I köt, citoszolba lokalizálja azt FF-domén Tyr-foszforiláció → TFII-I elengedés → magba vándorol Tumbleweed (RacGAP50C) (Droso) axon növekedés – GAP hatás függő citokinesis – GAP hatástól független p50GAP Sec14 domén lokalizálja, Sec14 mutáció – de nem GAP domén mutáció – biológiai hatása

56 p50GAP eloszlása és biológiai hatása a Sec14 doménhoz kötött Sirokmány et al. 2006 JBC. 281. 6096.

57 Rho-GDI

58

59 RhoGDI RacGDP RhoGDP

60 P - RhoGDI RacGDP → RacGTP RhoGDP PAK X

61 P - RhoGDI RhoGDP PAK X Cdc42 / Rac RacGDP → RacGTP DerMardirossian C. et al. Mol. Cell 15. 117. 2004.

62 Gondolatok : 1.G-fehérje kaszkádok Gα12 → p115RhoGEF → Rho Ras → Tiam-1 → Rac Cdc42 → Cool-2/α-Pix → Rac Cdc42→ PAK → RhoGDI→ Rac Rap → RA-RhoGAP → Rho↓ 2. smg kezd „beágyazódni” (up-stream, down-stream kapcsolatok)

63 IRODALOM Bernards A. GAPs galore! A survey of putative Ras superfamily GTPase activating proteins in man and Drosophila BBA 1603. 47-82. 2003. Bernards A. and Settleman J. GAP control: regulating the regulators of small GTPases Trends Cell Biol. 14. 377. 2004.


Letölteni ppt "A szabályozó fehérjék szabályozása. GAP Rac·GTP Rac·GDP GEF RhoGDI·Rac·GDP A Rac kis G fehérje szabályozása GAP = GTPáz aktiváló protein GEF = Guanin."

Hasonló előadás


Google Hirdetések