STERILEZÉS, DEZINFICIÁLÁS

Az előadások a következő témára: "STERILEZÉS, DEZINFICIÁLÁS"— Előadás másolata:

1 STERILEZÉS, DEZINFICIÁLÁS

2 Kórokozók érzékenysége
HIV: 10% hypo, 70% etanol vagy i-propanol, 2-4% aldehid, 6% H2O2, mosószeres mosás! HBV: 10% hypo Prion: erősebb autoklávozás (1 óra), 5% hypo, 1M NaOH

3 Baktériumokat károsító hatás
Bakteriosztatikus – nem pusztítja el , csak szaporodásukat gátolja, hatás megszűnte után újból növekedés Baktericid – elpusztítja a mikróbákat Baktericid hatású szerek: időegység alatt mikrobák azonos hányadát pusztítja el, tehát az élő baktérium szám exponenciálisan csökken

4 I - STERILEZÉS

5 Csíraszám csökkenése

6 Sterilezés hővel Nukleinsav, membránkárosító hatás
(Hideghatás – csak bakteriosztatikus hatás) Nyílt láng – pl kacsanál is Hőlégsterilezés („száraz hő”) 160oC 2 óra, vagy 140oC 3 óra üvegáruhoz „Nedves hő”- gyorsabb, hatásosabb Denaturálják a mikrobiális fehérjéket Legtöbb mesophil nem spórás 60° 30 perc de S. aureus, S. fecalis 60 perc, Legtöbb betegséget okozó bakt. és gomba 80° 10perc de C. botulinium 100° 5,5 óra!!

7 2. Autokláv (túlnyomás, telített gőz)
1. Kifőzés – de max 100°C Spóra, hepatits nem puszul el 2. Autokláv (túlnyomás, telített gőz) nyomás alatti telített vízgőz elősegíti a hő bejutását a sterilezendő anyagba nyomás növelésével emelkedik a hőmérséklet is +1 Atm  121 oC, percig ( bár 10 perc alatt hatásos) + 2 Atm °C steril próba: színváltó csíkkal bakt. spórával (=B. stearothermophilus)

8 Autokláv - ipari méretek

9 Autokláv - labor méretek
Autokláv fogászati eszközökhöz

10 Az autokláv működése - 1

11 Az autokláv működése -2

12 Az autoklávozás szakaszai

13 Sterilezés egyéb lehetőségei
Szűrés pirogén anyagok (LPS) eltávolítása hővel sterilezett folyadékokból nem hővel sterilezhetők csíramentesítése, ill levegő HEPA szűrővel Nitrocellulóz szűrőn, (mikr. adszorpciója) szita hatás Tulnyomáson , megfelelő pórusmérettel akár vírusok is! Besugárzás UV– citozin : hidratáció, timin uracil :dimerizáció Germicid lámpák, inkább boxokban, kisebb munkaterületekre (sötét terület) Y – nagy áthatoló képességű, szabad (hidroxilion) gyökök keletkeznek- replikáció gátlódik. Egyszer használatos eszközök : injekciós tű, fecskendő Gázzal - β-propiolakton alkiláló hatás: protein és ns károsító Műanyagok sterilezése, de szellőztetni kell

14 Plazmasterilezés Mechanikus hatások
Elektromos vagy mágneses erőtérrel a H2O2 plazmaállapotba kerül, szabadgyökök kölcsönhatásba lépnek a mikroorganizmussal. Végén O2 ill víz lesz belőle Hőre és nedvességre érzékeny anyagok Vírus, spóra, bakt. Mechanikus hatások Többször 10mPa, de csak elmélet, ill ultrahang is, fagyasztás olvasztás többször…

15 Szűrés

16 Membránszűrés (tápfolyadékok)

17 Besugárzás

18 Gázsterilezés

19 II - CSÍRASZÁM ÁTMENETI CSÖKKENTÉSE

20 Hőkezeléssel Pasztőrözés:
65oC 30 perc, vagy 85oC 5 perc (tej) de TBC kórokozó túléli Tyndallozás (frakcionált hőkezelés): 85oC 30 percig – 37oC egy éjszakáig (3x) - spórákból vegetatív alakok lesznek

21 Fertőtlenítőszerekkel
Bőrfertőtlenítés (=antisepticumok) Bőr élő mikróbáinak számát csökkentjük. Szőrtüszőkből újra kolonizálódik. Élettelen felszín fertőtlenítése (=dezinficiálás) Hatáserősség függ: koncentráció, behatási idő, pH fenoléhoz hasonlítják (=fenol-koefficiens) természetes anyagok (vér, genny, stb.) inaktiválhatják, közömbösíthetik a fertőtlenítőszer hatását !Fontos h minél kisebb koncentrációban gátolja a mikr. és ne legyen toxikus, bomlékony, hatása sokáig tartson

22 Fenolkoefficiens meghatározása
Baktérium 1:50 1:60 1:70 1:80 1:90 1:100 Fenol Baktérium 1:100 1:200 1:300 1:400 1:500 1:600 X

23 Kioltás 5 és 10 perc inkubáció után
fenol X 1:50 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600 fenol X 1:50 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600

24 Leolvasás 24 óra múlva 5 perc 10 perc Értékelés: 200/70 = 2,85 fenol
X 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:50 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600 fenol X 1:50 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600 Értékelés: 200/70 = 2,85

25 Fertőtlenítőszerek Sejtmembrán károsítása
detergensek – felületaktív anyagok (anionos, kationos) támadáspont a bakt. membránja alkoholok (70%-os ethanol, i-propanol) dezorganizálják a lipid struktúrát, fehérje denat. és vízelvonó hatás Spórák és gombák ellen kevéssé hatásosak fenoltartalmú szerek (fenol, klórhexidin) membránhoz kötött oxidázokat és dehidrogenázokat inaktiválja

26 Fertőtlenítőszerek Denaturálószerek
Erős ásványi savak (HCl, H2SO4) Szerves savak (ecetsav, citromsav, tejsav) Élelmiszeriparban gyakran használják tartósításra Nehézfémsók: (enzimek működését gátlók) Ezüst-sók (Ag-acetát szemcsepp újszülötteknék, N. gonorrhoeae okozta blenorrhoea kialakulása ellen) Hg-sók (főleg szerves) As-vegyületek

27 Fertőtlenítőszerek Oxidálószerek
Szabad SH- csoportokat oxidálják Halogének (jód, klór - hipo) H2O2, KMnO4 Festékek (bőrecsetelésre) Anilin festékek: brillantzöld, malachitzöld, kristályibolya!! – szelektív táptalajokba is keverik biz. baktériumok gátlására

28 Fertőtlenítőszerek Alkiláló ágensek
Fehérjék alkilezése formaldehid (formalin), glutáraldehid

29 Dezinficiensek lehetséges támadáspontjai

30 Dezinficiensek hatása a baktériumokra

31 III - KONZERVÁLÁS

32 Élelmiszerek Konzervek – autoklávban sterilizálják lekvár, savanyúság
1-3% NaCl, 40% > cukor, benzoesav, szalicil

33 Gyógyszeriparban injekció, orrcsepp, szemcsepp
benzoesav, fenolszármazékok besugárzás

34 Steril gyógyszerkészítmények ellenőrzése
anaerob táptalaj (tioglikolát vagy Holman) gomba táptalaj

35 „Limulus amebocyte lysate” (LAL) teszt
Cél – endotoxin kimutatás injekciós készítményekből elsősorban ill egyéb gyógyszeralapanyagokból Biológiai háttér – a patkórák, Limulus polyphemus vére endotoxin hatására megalvad – az alvadásért felelős enzim a vér amoebocytáinak granulumaiban található  lizátum: enzim Proenzim Koaguláz Koagulogén Koagulin LPS Reakció Detektálás – koagulin (alvadék) – turbidimetria

36 Pozitív reakció: ha az inkubálási idő letelte után a csövet megfordítva a gél állagú anyag megtartja formáját. Minden más esetben negatív

37 Mikrobiális korrózió BIOFILM !!!