Nagy hatékonyságú folyadékkromatográfia HPLC Nagy hatékonyságú folyadékkromatográfia
A folyadékkromatográf elvi felépítése Nyomás- és áramlás szabályozó Injektáló egység integrátor pumpa Kromatográfiás oszlop detektor eluensedény
Folyadékszállítás Az eluens mozgatása nagynyomású pumpával Eluens összetétel >>állandó (izokratikus) változó (gradiens)
Mintabevitel - injektálás Nagy nyomás ellenében nehéz injektálni, speciális mintabemérő csap
Folyadékkromatográfiás oszlopok 15-30 cm hosszú, 2.5-8 mm belső átmérőjű rozsdamentes acélcsövek – megfelelő töltettel
Kromatográfiás oszloptöltet - állófázis Töltet: nagy mechanikai szilárdságú 3-10 m átmérőjű (gömbszimmetrikus) szilikagél. Normál fázisú kromatográfia: szilikagél Fordított (reverz) fázisú kromatográfia: a szilikagél hidrofil felületére alkilcsoportot kötnek > hidrofób lesz pl. RP18 – (-Si-C18H37) A szilikagél felülete A módosított szilikagél felülete
A szilikagél felületének módosítása
A mozgó fázis kiválasztása Az állófázishoz kell megfelelő eluenst (mozgófázist) választani A mozgófázis erőssége (polaritása) határozza meg a komponensek haladási sebességét Fordított fázisú kromatográfiában legfontosabb oldószerek: víz, metanol, acetonitril, tetrahidro-furán
Detektorok UV/VIS detektor Vezetőképességi detektor