Készítette: Czigléczki Gábor Tumorőssejt markerek azonosítása valós idejű polimeráz láncreakcióval dermatofibroszarkoma tumorokból Készítette: Czigléczki Gábor
Nicolas-Sebastian Roch de Chamfort „Minél előbbrehalad a tudás, annál jobban megkettőzi erőfeszítéseit a butaság, hogy fenntartsa az előítéletek hatalmát.” Nicolas-Sebastian Roch de Chamfort
Tartalomjegyzék Őssejtek, tumorőssejtek Dermatofibroszarkóma PCR RT-PCR Saját kísérletek: RNS- izolálás Reverz transzkripció Valós idejű kvantitatív PCR
Az őssejt Az őssejt olyan sejt, amely képes osztódni, és amelyből további sejtek keletkeznek, ami biztosítja a szervezet növekedését és megújulását. Csoportjai: embrionális őssejtek germinális őssejtek szomatikus őssejtek
Újabb mutáció(k) az őssejtben vagy a progenitor sejtekben Normális Őssejtek Multipotens progenitorok Elkötelezett Érett sejtek Őssejt mutáció Proliferáció Újabb mutáció(k) az őssejtben vagy a progenitor sejtekben Proliferáció Sejt halál Önmegújulás Immunválasz elkerülése
Az őssejtek és daganatok hasonlóságai a korlátlan proliferáció szövetspecifikus differenciációs képesség klónképzés Keletkezhetnek e daganatok őssejtekből?
Célzott terápiák Konvencionális kemoterápia Betegség kiújulása Tumor visszahúzódás Konvencionális Betegség enyhülése kemoterápia Célzott LSC terápia Célzott LSC + konvencionális Tumor sejtszám csökkenés
A dermatofibrosarcoma
A polimeráz láncreakció Angol név: Polymerase Chain Reaction Felfedezője: Kary B. Mullis-1985 Lehetővé teszi a DNS egy kis darabjának megsokszorosítását
A reakció összetevői DNS templát Taq-polimeráz—Thermus aquaticus baktériumból Nukleotidok Puffer Primerek
Hőmérsékleti profil
Az agargél-elektroforézis
Felhasználása Fertőző betegségek kimutatása Igazságügyi orvostani vizsgálatok Ősi DNS elemzése Örökletes betegségek kimutatása
A SOX-2 gén vizsgálata A SOX-2 transzkripciós faktor, valamint tumormarker is Kérdés: A SOX-2 jellemző-e a tumor fibroszfer és adherens állapotára egyaránt, és ha igen, akkor mekkora a génkifejeződés mértéke?
RNS-izolálás tumoros sejtekből Homogenizálás Kloroform hozzáadása3 fázisra különül el Felső fázis (RNS) elkülönítése RNS kicsapása izopropanollal Felesleges izopropanol eltávolítása abszolút alkohollal
Koncentrációmérés
Reverz transzkripció Master mix összeállítása: Fiziológiás oldat Nukleotidok Random primer Rn-áz gátló Reverz transzkriptáz
Megfelelő hőmérséklet biztosítása termosztáttal
A PCR-gép
Köszönetnyilványítás Ezúton is szeretnék köszönetet mondani Dr. Hegyesi Hargitának, aki minden segítséget megadott, hogy ez a beszámoló létrejöhessen, és Dr. Falus Andrásnak, aki engedélyezte a kutatásba való bekapcsolódást
Felhasznált irodalom Kary B. Mullis: A polimeráz láncreakció felfedezése Dr. Hegyesi Hargita: Bevezetés a humángenetikába Kopper László, Hajdú Melinda: Tumor-őssejtek Dr. Tóth Sára: Tumor őssejtek
Köszönöm a figyelmet!