Molekuláris genetika Falus András
MIÉRT VAGYUNK KÜLÖNBÖZŐEK?
MIÉRT VAGYUNK BETEGEK?
TŰT A SZÉNAKAZALBAN!! DE MEKKORA A SZÉNAKAZAL?
27
Genom méretek /bp/
3% 97% pyknonok, fracto, miRNS?
GENETIKA REVERZ GENETIKA Mutáns fenotípus Mutáns allél DNS szekvencia Protein szekvencia REVERZ GENETIKA Protein szekvencia DNS szekvencia Mutáns allél Mutáns fenotípus
LEHETŐSÉGEK BETEGSÉGGÉNEK AZONOSÍTÁSÁRA MÉG NEM AZONOSÍTOTT BETEGSÉGGÉN A pathogenezis biokémiai mechanizmusa ismert Ismert kromoszómán belüli pozíció FUNKCIONÁLIS KLÓNOZÁS POZÍCIONÁLIS KLÓNOZÁS Elképzelés a pathogenezis molekuláris mechanizmusáról vagy rokon mechanizmusú állati vagy emberi betegség KANDIDÁNS(JELÖLT) KLÓNOZÁS
Deléciós térképezés gének kromoszómális poziciójának meghatározására
A genom szek- 2003 vencia ismert A teljes genom %-ában 1980 1985 o 1980 A teljes genom %-ában 100 1980 1985 Funkcionális Human Genome Project kezdete 1990 Pozício- nális 1995 Jelölt Az emberi gének 80%-a feltérképezve 2000 Pozícionális jelölt A genom szek- vencia ismert 2003 2005
Szekvenciák: DNS RNS fehérje DNS szekvenálás „könnyű” RNS és fehérje szekvenciák a DNS alapján komputerrel meghatározhatók Fehérje 3D szerkezete? Biológiai funkciója? Hogyan működik az egész a többi fehérjével kölcsönhatásban?
Hatalmas szakadék volt az elméleti tudás (modellek) és a gyakorlati genetikai vizsgálatok között Nem állt megfelelő módszer rendelkezésre Áttörés—technológiai— endonukleázok vektorok
Az elvi lehetőség létrejött: ettől kezdve bármely gén, génszakasz klónozható volt
A REKOMBINÁNS DNS FELHASZNÁLÁSA szekvencia bankok DNS próbák expressziós vektorok gén terápiás vektorok
DNS komplementaritás (bázis párosodás)
DNS DENATURÁLÁS ÉS HIBRIDIZÁLÁS
A PRÓBÁK: Egyszálú jelölt oligonukleotidok (genomiális vagy cDNS szekvenciák vagy RNS), amelyek a komplementaritás alapján hibridizálnak a DNS szállal Segítségükkel egy keresett szekvencia vagy in situ (sejtben, kromoszómán) vagy gélben mutatható ki
Southern blot (DNS) I.
Southern blot (DNS) II.
RFLP ANALÍZIS RFLP=restrikciós fragment hossz-polimorfizmus
Restrikciós térkép készítése
DNA „ujjlenyomat”
VNTR alkalmazása (egyedi azonosítás)
Polimeráz láncreakció
Automatizált DNS szekvenálás
AZ AUTOMATIZÁLT SZEKVENÁLÁS EREDMÉNYE Elektroforézis iránya
Genom programok HGP kórokozók haszonállatok és növények laboratóriumi modell állatok
A SZEKVENCIA MÉG NEM ELÉG!!
Babits Mihály: Messze..messze
METTŐL MEDDIG TERJED EGY GÉN, HOL VANNAK A SZABÁLYOZÓ RÉGIÓK, FONTOS A KÖZPONTOZÁS ÉS A HANGSÚLY!! METTŐL MEDDIG TERJED EGY GÉN, HOL VANNAK A SZABÁLYOZÓ RÉGIÓK, ÉS HOGYAN MŰKÖDNEK??
EPIGENETIKA Szekvenciák: DNS RNS fehérje DNS szekvenálás „könnyű” RNS és fehérje szekvenciák a DNS-é alapján komputerrel meghatározhatók Fehérje 3D szerkezete? Biológiai funkciója? Hogyan működik az egész a többi fehérjével kölcsönhatásban? EPIGENETIKA
A PUZZLE NÉHÁNY DARABKÁJA MÉG HIÁNYZIK!