Bioaktív komponensek kimutatása növényi mintákból Dr. Remenyik Judit PhD (Kertészettudományi és Növényi biotechnológia Tanszék Biokémiai és molekuláris diagnosztikai laboratórium)

Mérés menete Mintavétel Minta tárolás Minta előkészítés Mérés

Mintavétel Adott fajra, fajtára jellemző legyen Adott termőhelyre jellemző legyen Nagy számú/ nagy tömegű egyed gyűjtése Homogenizálás A minta tárolása A minta szállítása

A minta tárolása Minden esetben a mérendő komponenstől függ! +8 °C Liophilizálás - 70 °C

A minta előkészítése Homogenizálás Feltárás Kioldás Szűrés , tisztítás

Bioaktív komponensek Cukor tartalom- egyszerű cukrok (glükóz, fruktóz szacharóz ) Savtartalom (almasav, citromsav) Fehérje tartalom Rost tartalom (oldhatatlan, oldható) Szárazanyag Nitrát tartalom

Bioaktív komponensek Antioxidáns sűrűség meghatározás Vízoldékony- és zsíroldékony antioxidánsok Vízoldékony antioxidánsok: C-vitamin Antioxidáns fehérjék (enzimek) Vízoldékony színanyagok (antocianinok, flavonoidok) B-vitaminok Galluszsav

Bioaktív komponensek 2. Zsíroldékony antioxidánsok Karotinoidok Tokoferolok Szabad zsírsavak d. Izoprén származékok e. Klorofollok Polifenolok A-vitamin

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek α-tokoferol: R1,R2,R3=CH3 ß-tokoferol: R1,R3=CH3; R2=H γ-tokoferol: R2,R3=CH3; R1=H δ-tokoferol:R3=CH3; R1,R2=H

Antioxidáns kapacitás mérése kemiluminométerrel

A mérés elve 1.A fotoérzékeny vegyületet hν energiával besugározzuk. S+ hv→ S.+ + O2.- A O2.- reagálnak a minta antioxidáns anyagaival. 2.A detektor vegyület lép ezután reakcióba a maradék O2.- . O2.- + D → hv 3. A kisugárzott energiát méri a detektor.

Minták adatanalízise (ACW)

Minták adatanalízise (ACL)

Spektrofotometria A fényintenzitás változását mérjük. Az UV-VIS tartományban az anyagok szelektíven adszorbeálják a fényt. A= ε*c*l A mérést minden estben az adszorpciós maximumon mérjük. Hibalehetőségek: Fényszóródás, oldószerpárolgás A ε nem helyes meghatározása .

Mérés 1. C-vitamin tartalom meghatározása 3.4. A C-vitamin (L-aszkorbinsav)

A mérés alapja Erősen redukáló hatású Fe3+ → Fe2+ Fe2+ színes komplexet képeznek az α,α, dipiridil reagenssel Fotometriás meghatározás Látszólagos C-vitamin tartalom Reduktonok Valódi C-vitamin tartalom

NAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA MŰSZER oszlop: (kolonna)  felépítése: minta  töltet: szilikagél (módosított), adszorbens, ioncserélő, gél,… szűrő előkolonna:  hőfok: szobahőmérséklet (!) 25 °C mozgófázis: folyadék  oldószerek, oldószer-keverékek főkolonna HPLC-készülék felépítése: 4. oszlop detektor 1. eluens (mozgófázis) 2. pumpa 3. mintaadagoló (minta) 5. detektor 6. rekorder  nagy nyomás biztosításához pumpa:  „pulzálás-mentes” (több pumpa) mintabevitel:  fecskendő  szelepes megoldás detektor:  UV spektrofotometriás, fluoreszcencia, vezetőképességi, tömegspektrometriás,.. UV-detektor I. oszlopkromatográfia: 1. klasszikus, 2. GC, 3. HPLC, 4. ionkr. II. rétegkromatográfia : 1. papírkr. 2. vékonyrétegkr.

A kromatogram értékelése