Nagy hatékonyságú folyadékkromatográfia

Az előadások a következő témára: "Nagy hatékonyságú folyadékkromatográfia"— Előadás másolata:

1 Nagy hatékonyságú folyadékkromatográfia
HPLC Nagy hatékonyságú folyadékkromatográfia

2 A folyadékkromatográf elvi felépítése
Nyomás- és áramlás szabályozó Injektáló egység integrátor pumpa Kromatográfiás oszlop detektor eluensedény

3 Folyadékszállítás Az eluens mozgatása nagynyomású pumpával
Eluens összetétel >>állandó (izokratikus) változó (gradiens)

4 Mintabevitel - injektálás
Nagy nyomás ellenében nehéz injektálni, speciális mintabemérő csap

5 Folyadékkromatográfiás oszlopok
15-30 cm hosszú, mm belső átmérőjű rozsdamentes acélcsövek – megfelelő töltettel

6 Kromatográfiás oszloptöltet - állófázis
Töltet: nagy mechanikai szilárdságú 3-10 m átmérőjű (gömbszimmetrikus) szilikagél. Normál fázisú kromatográfia: szilikagél Fordított (reverz) fázisú kromatográfia: a szilikagél hidrofil felületére alkilcsoportot kötnek > hidrofób lesz pl. RP18 – (-Si-C18H37) A szilikagél felülete A módosított szilikagél felülete

7 A szilikagél felületének módosítása

8 A mozgó fázis kiválasztása
Az állófázishoz kell megfelelő eluenst (mozgófázist) választani A mozgófázis erőssége (polaritása) határozza meg a komponensek haladási sebességét Fordított fázisú kromatográfiában legfontosabb oldószerek: víz, metanol, acetonitril, tetrahidro-furán

9 Detektorok UV/VIS detektor Vezetőképességi detektor