Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium kv1n1lv1 Bemutatkozás

Ionpár fordított fázisú folyadékkromatográfia Ionpárképző reagens (Quaterner alkil ammónium só) N+ Ion-párképző só [Molekula ION]- Mérendő komponens ionos formája C18 szilárd fázis N+ [Molekula ION]-

Ionpár fordított fázisú folyadékkromatográfia Ionpárképző reagens (Alkil szulfonsav só) Ionpárképző só S O O- [Molekula ION]+ Mérendő komponens ionos formája C18 szilárd fázis O S [Molekula ION]+ O- Esetleg: CF3COO-; BF4-; ClO4-, PF6-

Ioncserés folyadékkromatográfia Ioncsere: ha az állófázis állandó töltéssel rendelkezik; Ioncserélő kapacitás: megkötött ellentétes ion mennyiség egységnyi tömegű tölteten (mmol/g vagy mekv./g); „Ioncserélő gyanták” Ionkizárásos kromatográfia Ionkromatográfia

Ionkromatográfia

Hidrofób kölcsönhatású kromatográfia

(A víz az erős oldószer !!!) HILIC Állófázis: mint a normál fázisú kromatográfiában Eluens: mint a fordított fázisú kromatográfiában 3-40% vízzel (A víz az erős oldószer !!!) Alkalmazásai: RP-hez túl poláros, nehezen visszatartható komponensek elválasztására

Komponensek tulajdonságát észlelik A folyadékkromatográfiás detektorok Komponensek tulajdonságát észlelik UV- látható abszorbancia detektor (UV- VIS) Fluoreszcenciás detektor (FLD) Elektrokémiai detektor (ECD) Radiokémiai detektor (RD) Tömeg detektorok (MSD) Előnyök: specifikusság, érzékenység, szelektivitás Hátrányok: minden vegyület más (pl. más UVmax)

Mozgófázis tulajdonságát észlelik A folyadékkromatográfiás detektorok Mozgófázis tulajdonságát észlelik Törésmutató detektor (RID) Vezetőképesség detektor (CD) Fényszórásos detektor (LSD) Előnyök : nagyon sok komponensre – majdnem univerzális Hátrányok: zaj, érzékenység

Alapelv: Lambert-Beer törvény UV-VIS detektor Alapelv: Lambert-Beer törvény

VWD – Variable Wavelenght detector lencse tükör Diffrakciós rács tükör deutérium lámpa A diffrakciós rács monokromatikus fényt állít elő tükör A monokromatikus fényt megosztjuk a referencia és minta fotodióda között Fénynyaláb osztó Átfolyó cella tükör Minta fotodióda Az intenzitásbeli különbséget a cellában történő abszorbancia okozza

Diódasoros detektor – DAD, Diodarray detector Diode Array Grating Optical Slit Detector Flow Cell Homium Filter Achromatic Lens UV Lamp Vis Lamp

Ismétlés vége

UV/VIS detektorhoz képest: Fluoreszcenciás detektor – FLD UV/VIS detektorhoz képest: Érzékenyebb Szelektívebb (Csak fluoreszkáló komponensek detektálására alkalmas)

Az antracén gerjesztési és emissziós spektruma metanolban Fluoreszcenciás detektor – FLD Az antracén gerjesztési és emissziós spektruma metanolban Vibrációs alszintek p* gerjesztés gerjesztés Intenzitás h1 emisszió h2 p emisszió excitation 225 275 325 375 425 475 Wavelength / nm

Fluoreszcenciás detektor – FLD

Fluoreszcenciát befolyásoló tényezők Fluoreszcenciát csökkentő tényezők: Oldott oxigén vagy más szennyező

Fluoreszcens detektálást befolyásoló egyéb tényezők A mérendő komponens koncentrációja; Gerjesztési forrás intenzitása; Besugárzott minta térfogata (cella térfogat); A z emittált fényt elnyelő oldószer, vagy oldott anyagok (koelució, szennyezések); A szórt fény megnöveli a zajt (nagy molekulák, más fényvisszaverő felület)

PAH-ok mérése HPLC-FLD-vel Gerjesztési / emissziós hullámhossz lex/lem 225/314 246/368 237/440 230/330 277/376 255/420 230/400 250/495

Elektrokémiai (amperometriás) detektor-ECD Olyan vegyületek detektálására alkalmazzuk, amelyek un. „elektroaktív” csoportot tartalmaznak. Ezek a csoportok könnyen: Oxidálódhatók Redukálhatók Szerkezet megvizsgálásával és egy ciklikus voltammogram felvételével tervezhetővé válik.

Elektrokémiai (amperometriás) detektor-ECD Előnyök: Igen szelektív, igen érzékeny Hátrányok: Fémek jelenléte jelentősen zavarja (Fe, Ni, etc.). Gradiens nem alkalmazható Kis hőmérséklet- és áramlás- ingadozások is zavarják = NEM ROBOSZTUS 21

Elektrokémiai (amperometriás) detektor - ECD Oxidálható Redukálható Fenolok Ketonok Oximok Aldehidek Merkaptánok Peroxidok Konjugált savak/észterek/nitrilek Hidroperoxidok Konjugált kettőskötés Aromás aminok, diaminok Aktív halogén Purin vázasok Aromás halogén Nitrovegyületek

Radiokémiai detektor - RD A mérendő komponens rádióaktivitása által kiváltott fény emissziót méri (Heterogén – homogén szcintilláció) Fő alkalmazási terület: metabolizmus kutatásban Mérhető pl: 35S, 14C, 3H, 131I

Fényszórásos detektor – Evaporative Light Scattering Detector, ELSD Porlasztás: Nitrogén gáz segítségével az oszlopot elhagyó eluenst elporlasztjuk. Mozgó fázis elpárologtatása: Egy fűtött csőben áramoltatjuk át, ahol az oldószer elpárolog. 3. Detektálás: A száraz minta részecskéket lézer fénnyel világítjuk meg egy átfolyó cellában. A részecskék által szórt fényt detektáljuk. A detektált fény arányos a részecskék számával (koncentrációjával).

Refraktív index (törésmutató) detektor – RID Univerzális detektor, de csak akkor alkalmazható, ha az elválasztott komponensek törésmutatója eltér az eluens törésmutatójától; Gradiens elúcióval nem kompatibilis (0,1% eluens összetétel változás már a törésmutató változását idézheti elő); Hőmérséklet változás (0,001C –ra termosztáljuk); Pumpa pulzálás kontroll !!!! Off-line eluens keverés