1. ábra A 3A9EC szerkezeti képlete 1Szent István Egyetem, Mezőgazdaság- és Környezettudományi Kar, Akvakultúra és Környezetbiztonsági Intézet, Halgazdálkodási Tanszék, Gödöllő Bevezetés A megfelelő minőségű ivóvíz nélkülözhetetlen az emberi szervezet számára. Az ivóvíz megfelelő minőségének elérése során a legfontosabb lépés a fertőtlenítés. A klór és vegyületei hozzáadásával történő fertőtlenítés az egész világon széles körben elfogadott, költséghatékony víztisztítási módszer. A klór használatának elterjedése, nem csak az alacsony költségeknek köszönhető, hanem mert védi a vizet a mikrobiális visszafertőződésektől, azonban a fertőtlenítés során keletkező melléktermékek kockázatot jelenthetnek az élő szervezetekre. Vizsgálataink fő célja, egy választott melléktermék vegyület a 3-amino-9-etilkarbazol (3A9EC) akut és szub-krónikus toxikus hatásainak felderítése volt zebradánió modellszervezeten. 1 1. ábra A 3A9EC szerkezeti képlete Eredmények II. Anyag és módszer Az elsődlegesen alkalmazott teszt az OECD 236-os Fish Embryo Acute Toxicity (FET) volt, amivel az anyag általános toxikus hatásait lehet tanulmányozni. A vizsgált vegyület különböző koncentrációban történő alkalmazásával elkészítettük az LC (letális koncentráció) görbéket valamint meghatároztuk az LC50 illetve LC10 értékeket. A kapott akut eredmények alapján a kísérletek második szakaszában a vizsgált anyag szub-krónikus hatásait vizsgáltuk az OECD 210 (Fish early life stage, FELS) protokoll alapján tervezett kísérletben. Az öt alkalmazott koncentrációt a FET teszt alapján kapott 96 órás LC10 érték alatt határoztuk meg. A vizsgálat megtermékenyített ikrákkal indult és a kelést követően 30 napig tartott. A teszt lezárásakor a kezelt egyedeket elaltattuk, majd fénymikroszkóp (LEICA M205FA) segítségével képet készítettünk róluk, ezt követően az állatokat szárítószekrénybe helyeztük és lemértük a száraz tömegüket. A képek alapján lemértük az egyedek teljes test hosszát az ImageJ nevű program segítségével. FELS teszt: A teszt végére csak a két legalacsonyabb koncentrációban maradtak életben egyedek (3. ábra), valamint az életben maradt állatok mindegyikén jellemző volt a pigmenthiány. A kezelt egyedek hosszúsága valamint száraz tömege (4. ábra) szignifikáns különbséget mutatott a kontroll csoporthoz viszonyítva. Eredmények I. FET teszt: A vizsgálat alapján elkészítettünk az LC görbéket (2. ábra), valamint meghatároztuk az LC50 illetve LC10 értékeket. A számolt értékek nem mutattak jelentős eltérést a különböző vizsgálati időpontokban, az LC50 érték 24 óra elteltével 4,076 ± 0,221 mg/l, míg a 96 órás érték 3,296 ± 0,127 mg/l volt. Az LC10 értékek esetén a 24 órás 2,166 ± 0,185 mg/l, a 96 órás pedig 2,206 ± 0,195 mg/l volt. A teszt során, az egyedeken pigment hiány, sziködéma, hematóma, valamint fej és farok torzulás volt megfigyelhető.. 3. ábra A 3A9EC FELS-tesztje során feljegyzett pusztulási adatok a termékenyülést követő eltelt napokhoz viszonyítva. A * B * 2. ábra A FET-teszt eredménye alapján készített letális koncentráció görbék, napi lebontásban. Következtetések Az anyag hosszú távú vizsgálata során csak a két legalacsonyabb koncentráció alkalmazásakor maradtak életben egyedek, melyek mérte szignifikánsan kisebb volt a kontroll csoporthoz viszonyítva, annak ellenére hogy LC10 alatti értékekkel dolgoztunk. A továbbiakban traszgenikus zebradánió vonalakon folytatjuk a vizsgálatokat, melyeken megfigyelhető az anyag ér-és idegrendszerre gyakorolt hatása., valamint az esetlegesen bekövetkező génexpresszisó szint változások nyomon követésére qRT-PCR használatát tervezzük. 4. ábra Az egyedek átlagos teljes test hossza (A) és száraz tömege (B) a 3A9EC FELS-tesztjének lezárásakor