Molekuláris biológiai módszerek

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
Rekombináns fehérjék termeltetési stratégiái
Advertisements

Text Pioneers into Practice 2016 Hungary. 2 A Pioneers into Practice program célja, hogy elősegítse az alacsony széndioxid kibocsátással működő, versenyképes.
A fehérjék világa. Az élővilág legfontosabb szerkezeti és funkcionális építőkövei a fehérjék Szállítás és raktározás (hemoglobin, myoglobin, ferritin)
Génterápia A génterápia genetikai anyag bejuttatatása diszfunkcionálisan működő sejtekbe abból a célból, hogy a hibát kijavítsuk. A genetikai betegségek.
Világveszedelem No.1 1. Moratórium a genetikai manipulációkra - Asilomar: a feloldozás Moratórium a genetikai manipulációkra - Asilomar: a feloldozás.
A nyomonkövetési dokumentáció javasolt adattartalma: I
ENERGIA TAKARÉKOS RENDSZERSZEMLÉLET AZ ÉPÜLETGÉPÉSZETBEN Fehér János okl. kohómérök Fűtéstechnikai szakmérnök Székesfehérvár, 2010.JAN.20.
Koncz Gábor 1-9, 25-26,29-30 előadások. Ebben az előadásban: 1.Miért van szükség immunrendszerre 2.Az immunrendszer egyszerűsített vázlata 3. lexiális.
Nukleinsavak Felfedezésük, típusaik Biológiai feladatuk Kémiai felépítésük Pentózok Foszforsav N-tartalmú bázisok Purin bázisokPirimidin bázisok.
33. lecke A nukleinsavak felépítése és jelentősége a sejt életében.
Multirezisztens törzsek Az antibiotikumok támadáspontja Szerkezeti elemek (pl. sejtmembrán) Szintézis (sejtfal szintézist gátló szerek) DNS.
A fehérjék emésztése, felszívódása és anyagcseréje
EGÉSZSÉGES TÁPLÁLKOZÁS
11/2/2017 Horváth Botond, Dunaújvárosi Főiskola, Informatika Biztonság Labor Konzulens Dr. Leitold Ferenc, Hadarics Kálmán “Nemcsak azokkal a sebezhetőségekkel.
Nemzeti Erőforrás Minisztérium Oktatásért Felelős Államtitkárság
Általános Genetika Mutációk.
Védőoltások immunológiája
Fehérjék szabályozása II
Perinatalis Intenzív Centrumokból származó ESBL-termelő Klebsiella törzsek komplex epidemiológiai tipizálása Damjanova, I., Tóth, Á., Pászti, J., Jakab,
Hitelkonstrukciók a pályázati rendszerben
Sejtbiológia.
Evolúció… MENSA október 14. video.
Az eukarióta sejtek felépítése
Molekuláris biológiai módszerek 2015 Wunderlich Lívius
Molekuláris biológiai módszerek
Drog azok a természetes vagy mesterséges anyagok, amelyek az élő szervezetbe kerülve a központi idegrendszerre hatva megváltoztatják annak működését, funkcióját,
ENZIMOLÓGIA.
Kardiális troponint felisimerő oligonukleotidok fejlesztése
Makromolekulák Simon István.
The lactose (lac) operon - an example for prokaryotic gene regulation
Általános kémia előadás Gyógyszertári asszisztens képzés
Új molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Hogyan ismerik fel a sejtek a hibás géntermékeket?
Fehérjerétegek leválasztása és vizsgálata
Egy allélpár- több tulajdonság
H+-ATP-áz: nanogép.
ELEKTROMÁGNESES KÖRNYEZETVÉDELEM
A sejtmembrán Foszfolipid kettős réteg Poláros fej, apoláros láncok
A naptevékenységi ciklus vizsgálata a zöld koronavonal alapján
Ismétlés.
… avagy, amikor a baktérium „megfázik”
A génműködés szabályozása
Új molekuláris biológiai módszerek
Vegyes kultúrák, mikrobiális kölcsönhatások
Dr. Röhlich Pál prof. emeritus
Hormonokról általában Hormonhatás mechanizmusa
Egészségügyi ügyvitelszervező szak Bevezető előadás
Új molekuláris biológiai módszerek
Haltenyésztés.
Transzgénikus organizmusok Transzgénikus állatok Összefoglaló
Környezetvédelem a II/14. GL osztály részére
Biotechnológia, génmanipulációk, transzgenikus élőlények
Nukleotidok és nukleinsavak
Fehérjék funkciói.
Az Európai Unió földrajzi vonatkozásai
Klasszikus genetika.
Budapest, ETT Műhely ETT-monitor Bemutató.
CISZTÁS FIBROSIS Dr. Boda Márta.
10. POLITIKAI FÖLDRAJZI ALAPFOGALMAK ÉS AZ ÁLLAMOK FAJTÁI.
A szállítási probléma.
Nukleotidok, nukleinsavak
A 21. SZÁZADI TANÁR – TRENDEK, ELVÁRÁSOK, DILEMMÁK
AMR ELMÉLETI HÁTTÉR OKTATÁSI ANYAG.
Makromolekulák Simon István.
A humán genom projekt.
Makromolekulák Simon István.
TIENS FOKHAGYMAOLAJ KAPSZULA.
A nukleinsavak.
Bevezetés Tematika Számonkérés Irodalom
Előadás másolata:

Molekuláris biológiai módszerek Vektorok

Klónozó és expressziós vektorok Plazmidok Prokariota Eukariota Fágok M13 Lambda Kozmidok Mesterséges kromoszómák

Plazmidok 1. F plazmid (sex plazmid) 2. R plazmid: Antibiotikum rezisztencia 3. Col plazmid: Kolicinogén faktorokat termelnek (antibiotikum) más baktériumok ellen Önálló replikonok, ori replikációs origó, téta-replikáció, rolling-circle replikáció Fágemid vektorok

Lineáris konkatamer

Ampicillin Tetracycline Chloramphenicol Carbanecillin Transzpeptidázt gátol, sejtfal nem épül fel 30S alegységhez köt, AA-tRNS kötését gátolja Peptidil-transz- ferázt gátolja β-laktamáz 40 kDa membrán- protein, antiporter Chloramphenicol acyltransferase

Streptomycin Kanamycin 30S alegységhez kapcsolódik, formil- metionin kapcsoló- dását gátolja 30S alegységhez kapcsolódik, misz- transzlációt okoz Streptomycin foszfotranszferáz Kanamycin acyltransferase

Pro-, és eukarióta antibiotikumok Zeocin Blasticidin Hygromycin B DNS-t vágja Peptidkötés kialakulását gátolja Fehérjeátíródás gátlása 2 módon is Zeocinhoz köt, inaktiválja Blasticidin- S-deaminase Hygromycin B phosphotransferase

A molekuláris klónozás főbb lépései

Klónozás ragadós végekkel

Klónozás tompa végekkel

Klónozás tompa végekkel + linkerekkel

Klónozás PCR-rel

A transzdukció mechanizmusa

Klónozás λ fágba λ-fág, mint vektor DNS λ-fág λ DNS központi régió eltávolítása idegen DNS beültetése λ DNS λ „karok” in vitro „csomagolás” a kapszid fehérjékbe rekombináns, fertőzőképes λ-fág, mint vektor

M13 alapú vektorok

Szelekció

ONPG X-gal IPTG ortho-Nitrophenyl- β-galactoside (kolorimetria) β-galactosidase repressor protein permease transacetylase ONPG X-gal IPTG ortho-Nitrophenyl- β-galactoside (kolorimetria) Isopropyl β-D-1- thiogalactopyranoside (aktiváció) kék-fehér szelekció

A kék-fehér szelekció genetikai háttere lacI lacZω 11-41. aminosavakat kódoló régió deléciója lacZα LacZα peptid aktív β-galaktozidáz X-gal kék színű termék inaktív IPTG LacI A kék-fehér szelekció genetikai háttere

transzdukció, vagy transzformáció Fágemid vektorok kétféle replikáció, transzdukció, vagy transzformáció

Vektorok in vitro transzkripcióhoz

Kombinált klónozó/expressziós vektorok