FLAVOBACTERIUM OKOZTA MEGBETEGEDÉS HAZAI HALFAJOKBAN Varga Zsuzsanna1, Sellyei Boglárka1, Paulus Petra2, Papp Melitta2, Molnár Kálmán1 és Székely Csaba1 MTA ATK Állatorvos-tudományi Intézet1 NÉBIH Állategészségügyi Diagnosztikai Igazgatóság2 2015.05. 21. Szerző Neve: Varga Zsuzsa

Cél Bőr elváltozást mutató magyarországi halak Flavobacterium fertőzöttségének vizsgálata Izolátumok antibiotikum érzékenységének vizsgálata

Klinikai tünetek

Elterjedés Az ubiquiter Flavobacterium columnare okozta ún. columnaris betegség elsősorban a meleg égövi országokban okoz komoly hal elhullással járó veszteséget. Magyarországon az intenzív haltenyésztés bevezetésével került a patológusok látóterébe, ill. a klímaváltozás során felmelegedő természetes vizekben kell számítani fokozott kártételére.

Neomycinnel és polymyxin B-vel kiegészített „szelektív” Cytophaga agar

Columbia véres agar

Natív kenet és Gram festés

25 izolátum adott pozitív eredményt a 16S rRNS génre tervezett Flavobacterium columnare fajspecifikus PCR reakcióban (Bader és mtsai, 2003)

Gazdafaj és eredet A pozitív minták 10 balatoni, ill. tógazdasági eredetű halfajból (compó, csapósügér, dévérkeszeg, ezüstkárász, fogassüllő, garda, karika keszeg, kősüllő, ponty és szibériai tok) származtak. Az izolálás helye fekélyes állat elváltozást mutató bőre, szeme, kopoltyúja, belső szervei (lép, vese, máj), ill. a klinikai tüneteket nem mutató halak kopoltyúja volt.

„A” típusú vágásképet mutató izolátumok 16S rRNS génje HaeIII és RsaI enzimmel emésztve (20/25) HaeIII. RsaI.

„A”, „B”, „C” és „D” típusú vágási képet mutató F. columnare izolátumok M A C D B B B M A C D B B B M 1., 8. és 15. sor : Gene Ruler 100bp Plus marker 2-7. sor: F. columnare specifikus PCR termékek HaeIII. enzimmel emésztve. 9-14. sor: F. columnare specifikus PCR termékek RsaI. enzimmel emésztve.

Flavobacterium johnsoniae Darwish (2004) a Bader által leírt fajspecifikus PCR vizsgálattal (2003) pozitív reakciót adó izolátumok egy részéről megállapította, hogy azok eltérő fajt képviselnek és az új fajt Flavobacterium johnsoniae néven írta le. Az általunk izolált „törzsek PCR fragment nagysága és vágásképe eltért az irodalomban találhatónál.

Szekvenálás Az eltérő genomtípusoknak megfelelően kiválogatott törzsek 16S rRNS génjének ≈1550 bp nagyságú szakaszának szekvenciája alapján megerősítést nyert, hogy 23 esetben F. johnsoniae-t izoláltunk. Mintáink 97-99%-os hasonlóságot mutattak a faj ismert szekvenciáival. A fennmaradó 2 izolátum egyike Chryseobacterium piscium volt, míg a másik egy név nélküli Chryseobacterium fajjal bizonyult azonosnak.

Antibiotikum rezisztencia Vizsgált antibiotikumok: Chloramphenicol 30 Enrofloxacin 5 Fluorfenicol 30 Gentamycin 10 Ampicillin 10 Erythromycin 15 Oxytetracyclin 30 Furazolidone 20 Cotrimoxazole 25 Polymyxin 300

Kirby-Bauer korong diffúziós módszer

Flavobacterium törzsek egyedi antibiotikum rezisztenciája

Flavobaktériumok antibiotikum rezisztenciája Izolátum Flavob. johnsoniae A Flavob. johnsoniae B Chryseo- bacterium sp. Összesített   É R Össz Chloramphenicol 30 3 17 20 2 1 6 19 25 Enrofloxacin 5 16 4 21 Fluorfenicol 30 13 7 8 Gentamycin 10 23 Ampicillin 10 Erythromycin15 22 Oxytetracyclin 30 Furazolidone 20 Cotrimoxazole 25 Polymyxin 300

Antibiotikum rezisztencia mértéke Az izolátumok átlagosan 5,6 atibiotikummal szemben mutattak rezisztenciát annak ellenére, hogy a gazdahalak többsége nem részesült antibiotikum kezelésben. MAR (multi-resistance index): 0,3-1 rezisztenciát okozó antibiotikumok száma / összes vizsgált antibiotikum száma

Összefoglalás Izoláláshoz szelektív talaj szükséges: 23/25 Flavobacterium columnare nem fordult elő Flavobacterium johnsoniae a jellemző faj Eddig 2 genomtípust találtunk Nagyfokú antibiotikum rezisztencia : 5,6 antibiotikum /izolátum 0,3 -1 MAR érték

Köszönjük a figyelmet! 2015.05. 21. Szerző Neve: Varga Zsuzsa