Disszekciós eljárások

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
Disszekciós eljárások
Advertisements

A HELYI ÉS A TELEPÜLÉSI ADÓRENDELETEK SZABÁLYOZÁSÁNAK EGYES KÉRDÉSEI.
T ű zvédelmi M ű szaki Irányelv Fire Protection Technical Guideline Azonosító: TvMI 6.1: Beépített t ű zoltó berendezések tervezése, telepítése.
Visszatérő űrkabin és a súrlódás Szabó Dávid, 9.c.
Intézményi Férőhelykiváltást Támogató Országos Hálózati Találkozó Kalocsai Szociális Szakellátási Központ kiváltása.
A Végrehajtó Ügynökség, a pályáztatást támogató elektronikus rendszerek, valamint az elszámolhatóság főbb kérdéseinek bemutatása Németh Veronika – NFFKÜ.
Dél-alföldi Regionális Igazgatósága SAJTÓTÁJÉKOZTATÓ MÁJUS 17.
Keverés homogenizálás. Szilárd részecskék keverése (homogenizálás) Cél: Homogén eloszlás biztosítása JellegMechanikai művelet Befolyásoló tényezők: a.
1 Az összeférhetőség javítása Vázlat l Bevezetés A összeférhetőség javítása, kompatibilizálás  kémiai módszerek  fizikai kompatibilizálás Keverékkészítés.
Az akkreditáció szerepe a megváltozott munkaképességű munkavállaló személyének társadalmi reintegrációjában Készítette: Dézsi Gabriella Melinda Budapest,
Bemutatkozás Fodor Noémi Gépészmérnök – mérnöktanár Környezetirányítási szakértő TAR-ZERT Auditor Minőségirányítási vezető.
Kristályosítási műveletek A kristályosítás elméleti alapjai Alapfogalmak Kristály: Olyan szilárd test, amelynek elemei ún. térrács alakzatot mutatnak.
NRC Omnibusz – november. Okostelefon használat  A éves internetezők 64%-a használ okostelefont (saját/céges okostelefont, vagy más készülékét).
1 Az önértékelés mint projekt 6. előadás 1 2 Az előadás tartalmi elemei  A projekt fogalma  A projektek elemei  A projekt szervezete  Projektfázisok.
Hogyan épül fel a testünk? Testfelépítés 8. oszt / 1.
„ Tágas városom kis lakásra cserélem” Hajléktalanok önálló lakhatásának elősegítése, munkaerő-piaci integrációjának megalapozása TÁMOP /
Iskolai információs rendszer. Alapkövetelmények Oktatási, nevelési intézmények részére fejlesztett Oktatási, nevelési intézmények részére fejlesztett.
A kamara szerepe az export vezérelt magyar gazdaság megteremtésében. Eredmények és problémák Dr. Parragh László elnök Magyar Kereskedelmi és Iparkamara.
Folyadék-kromatográfia Mozgófázis: folyadék (eluens) Állófázis: szilárd v. folyadék Csoportositás : Állófázis geometriája szerint Oszlop-kromatográfia.
Hőre lágyuló műanyagok feldolgozása
MÁV-START Zrt. Budapest, december
Integrációs elméleti alapok, az integrációk típusai
LEHET JOBB A GYEREKEKNEK!
Munkaközösségek támogatása, bemutatófoglalkozások szervezése
Becslés gyakorlat november 3.
A víziközmű-szolgáltatásról szóló évi CCIX
A kis dózisok kimutatására alkalmas biológiai markerek vizsgálata
Specifikus hatások mérésére:
Az elektrosztatikus feltöltődés keletkezése
Adatok importálása, rendezése és szűrése
6. lecke Az egysejtű eukarióták
Az „I. Nagy Tavaszi Rábcatorkolás” vetélkedő
Levegőtisztaság-védelem 6. előadás
CSOPORT - A minőségellenőrök egy megfelelő csoportja
Kérdések és válaszok az előfizetéses rendszerekről
A földrajzi kísérletek szervezése és végrehajtása
Szerkezet-tulajdonság összefüggések Vázlat
Ismétlés.
5. lecke TESTÜNK SZÖVETEI 8. osztály
Hallásvizsgálati eljárások
A Jobbik esélyei listán és egyéniben
dr. Jeney László egyetemi adjunktus Európa regionális földrajza
Új molekuláris biológiai módszerek
Szociális ellátást igénybevevők szükségletei – és szolgáltatásai
A VÁLLALKOZÁS 7. előadás.
Dr. habil. Gulyás Lajos, Ph.D. főiskolai tanár
STRUKTURÁLT SERVEZETEK: funkció, teljesítmény és megbízhatóság
CONTROLLING ÉS TELJESÍTMÉNYMENEDZSMENT DEBRECENI EGYETEM
A hatékony adományozás eszközei igazgató, Magyar Adományozói Fórum
Tilk Bence Konzulens: Dr. Horváth Gábor
Felhasználóképzés a kórházban
Elválasztástechnikák
A ragadozás hatása a zsákmányállatok populációdinamikájára
Új pályainformációs eszközök - filmek
Fényforrások 3. Kisülőlámpák
4. Fénytechnikai mennyiségek mérése
Az iskolai szervezet és fejlesztése
Egymáson gördülő kemény golyók
Lapkiadó, rendezvényszervező vállalatirányítási rendszer SQL alapon
A RÖNTGEN ÉS A RADIOAKTÍV SUGÁRZÁSOK DETEKTÁLÁSA
AZ ANYAGI RENDSZER FOGALMA, CSOPORTOSÍTÁSA
Együtt Nyírbátorért Helyi Közösség
Az egyén társadalmi integrációja
Fluidumok (folyadékok) keverése
SZAKKÉPZÉSI ÖNÉRTÉKELÉSI MODELL I. HELYZETFELMÉRŐ SZINT FOLYAMATA 7
EURÓPAI TÁMOGATÁSOKAT AUDITÁLÓ FŐIGAZGATÓSÁG
Öntözés tervezés László Ormos
Stratégiai gondolkodás
A talajok mechanikai tulajdonságai III.
Dr. Parragh László elnök Magyar Kereskedelmi és Iparkamara
Előadás másolata:

Disszekciós eljárások Szövet-szeletek Explantátum - biopszia Megőrzött szövet-struktúra (legalább a kiültetés pillanatában) 3. Kézi mikrodisszekció Biopszia

LCM=laser captured microdissection friss fagyasztott szöveten alkalmas szelektív sejt-izolálásra; molekuláris összetevők elemzésére Leica Kritikus tényezők: jól választott szövetrész, kivágott szövet „elkapásának” módszere, molekuláris integritás megőrzése

Sluka , et al., Progress in Histochemistry and Cytochemistry;2008

Szövet-disszociáltatás: szövetből sejtszuszpenzió Módszer kiválasztása szövet típus – ECM aránya; állaga; - Sejtkapcsolatok típusa, aránya, erőssége szövet kora kinyerendő sejttípus I. Mechanikus szövet-disszociáltatás Csak laza – pl. Lép vagy korai embrionális – szövetek esetén 1. A szerv aprítása (~ mm-es darabkák) fiziológiás oldatban 2. Triturálás (szűk [100-400 um] kapilláris-nyíláson át; Emelt viszkozitású (szérum; BSA) fiziológiás oldatban 3. Szűrés (40 – 120 um pórusméretű háló) vagy elkülönítő centrifugálás (sejtek csapadékba ülepíthetők 200 – 400 g; 10 min) http://www.worthington-biochem.com/tissuedissociation/

Törmelék összetapadását gátolja II. Enzimatikus disszociáltatás Ca2+ gátolja Ca2+ szükséges Törmelék összetapadását gátolja Worthington; http://www.tissuedissociation.com

Szilárd szövetek disszociáltatása sejtekre - példák

Sejtszámlálás Sejtszámláló kamra Áramlásos sejtszámoló berendezések

Szövetből nyert „primér” sejtszuszpenziók: heretogén sejt-preparátumok Embrionális szövetek: gyors agregáció! E19 patkány kisagyból nyert sejtszuszpenzió Egér lép dendritikus sejtek

fizikai- kémiai paraméterek alapján biospecifikus sajátságok alapján Sejtszeparálás fizikai- kémiai paraméterek alapján biospecifikus sajátságok alapján - szűrés - ülepítés - differenciál-centrifugálás - sűrűség-gradiens centrifugálás - elutriáció - áramlási citometria (FACS) - szelektív sejtadhézión alapuló sejtszeparálás: - sejt affinitás kromatográfia, - panning - mágneses elválasztás - sejtszeparálás szelektív lízissel - sejtszeparálás szelektív előnyök biztosításával

minta ~ Sejtszeparálás fizikai- kémiai paraméterek alapján szeparálás méret és alak alapján szeparálás sűrűség alapján Szedimentációs sűrűség-gradiens centrifugálás Egyensúlyi sűrűség-gradiens centrifugálás pl vérsejt izolálás minta oldat-rétegek sűrűsége ~ részecskék sűrűsége a részecskék sűrűsége nagyobb, mint az oldat-rétegeké emlős sejtek fajsúlya ~ 1,06 g/cm3 Idő!! ha túl sokáig centrifugálunk, minden a csapadékba kerül! részecke a rá jellemző sűrűségtartományban marad

mononukleáris sejtek polimorfonukleáris sejtek (granulociták) vvt

Centrifugal Elutriation (CE) Centrifugal elutriation: Sedimentation takes place in the presence of field flow. CE is also called counterstreaming centrifugation; counterflow centrifugation ; counterflow centrifugal elutriation (CCE)

Mágneses sejt szeparálás

Fluorescence Aided Cell Sorter - FACS

Side population: Hoechst 33342 efflux (ABCG2) Primitív (pluripotens) őssejtet azonosítja Side population: Hoechst 33342 efflux (ABCG2)

BD FACS Vantage SE BD FACSort