Készítette: Czigléczki Gábor

Az előadások a következő témára: "Készítette: Czigléczki Gábor"— Előadás másolata:

1 Készítette: Czigléczki Gábor
Tumorőssejt markerek azonosítása valós idejű polimeráz láncreakcióval dermatofibroszarkoma tumorokból Készítette: Czigléczki Gábor

2 Nicolas-Sebastian Roch de Chamfort
„Minél előbbrehalad a tudás, annál jobban megkettőzi erőfeszítéseit a butaság, hogy fenntartsa az előítéletek hatalmát.” Nicolas-Sebastian Roch de Chamfort

3 Tartalomjegyzék Őssejtek, tumorőssejtek Dermatofibroszarkóma PCR
RT-PCR Saját kísérletek: RNS- izolálás Reverz transzkripció Valós idejű kvantitatív PCR

4 Az őssejt Az őssejt olyan sejt, amely képes osztódni, és amelyből további sejtek keletkeznek, ami biztosítja a szervezet növekedését és megújulását. Csoportjai: embrionális őssejtek germinális őssejtek szomatikus őssejtek

5 Újabb mutáció(k) az őssejtben vagy a progenitor sejtekben
Normális Őssejtek Multipotens progenitorok Elkötelezett Érett sejtek Őssejt mutáció Proliferáció Újabb mutáció(k) az őssejtben vagy a progenitor sejtekben  Proliferáció  Sejt halál  Önmegújulás  Immunválasz elkerülése

6 Az őssejtek és daganatok hasonlóságai
a korlátlan proliferáció szövetspecifikus differenciációs képesség klónképzés Keletkezhetnek e daganatok őssejtekből?

7 Célzott terápiák Konvencionális kemoterápia Betegség kiújulása
Tumor visszahúzódás Konvencionális Betegség enyhülése kemoterápia Célzott LSC terápia Célzott LSC + konvencionális Tumor sejtszám csökkenés

8 A dermatofibrosarcoma

9

10 A polimeráz láncreakció
Angol név: Polymerase Chain Reaction Felfedezője: Kary B. Mullis-1985 Lehetővé teszi a DNS egy kis darabjának megsokszorosítását

11 A reakció összetevői DNS templát
Taq-polimeráz—Thermus aquaticus baktériumból Nukleotidok Puffer Primerek

12

13 Hőmérsékleti profil

14

15 Az agargél-elektroforézis

16 Felhasználása Fertőző betegségek kimutatása
Igazságügyi orvostani vizsgálatok Ősi DNS elemzése Örökletes betegségek kimutatása

17

18 A SOX-2 gén vizsgálata A SOX-2 transzkripciós faktor, valamint tumormarker is Kérdés: A SOX-2 jellemző-e a tumor fibroszfer és adherens állapotára egyaránt, és ha igen, akkor mekkora a génkifejeződés mértéke?

19 RNS-izolálás tumoros sejtekből
Homogenizálás Kloroform hozzáadása3 fázisra különül el Felső fázis (RNS) elkülönítése RNS kicsapása izopropanollal Felesleges izopropanol eltávolítása abszolút alkohollal

20 Koncentrációmérés

21 Reverz transzkripció Master mix összeállítása: Fiziológiás oldat
Nukleotidok Random primer Rn-áz gátló Reverz transzkriptáz

22 Megfelelő hőmérséklet biztosítása termosztáttal

23

24 A PCR-gép

25

26

27

28 Köszönetnyilványítás
Ezúton is szeretnék köszönetet mondani Dr. Hegyesi Hargitának, aki minden segítséget megadott, hogy ez a beszámoló létrejöhessen, és Dr. Falus Andrásnak, aki engedélyezte a kutatásba való bekapcsolódást

29 Felhasznált irodalom Kary B. Mullis: A polimeráz láncreakció felfedezése Dr. Hegyesi Hargita: Bevezetés a humángenetikába Kopper László, Hajdú Melinda: Tumor-őssejtek Dr. Tóth Sára: Tumor őssejtek

30 Köszönöm a figyelmet!