Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Biolisztika Készítette: Kiss László. Biolisztika fogalma „Génpuska” (Gene gun) „Génpuska” (Gene gun) Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Gének.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Biolisztika Készítette: Kiss László. Biolisztika fogalma „Génpuska” (Gene gun) „Génpuska” (Gene gun) Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Gének."— Előadás másolata:

1 Biolisztika Készítette: Kiss László

2 Biolisztika fogalma „Génpuska” (Gene gun) „Génpuska” (Gene gun) Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Transzformációs módszer Transzformációs módszer Új keletű technika (kb. 25 éves) Új keletű technika (kb. 25 éves) Növényi sejtek transzformálására fejlesztették ki Növényi sejtek transzformálására fejlesztették ki

3 Transzformációs módszerek Mikroorganizmusokra hatékony módszerek: kémiai transzformáció, elektroporáció, protoplaszt Mikroorganizmusokra hatékony módszerek: kémiai transzformáció, elektroporáció, protoplaszt Növények Növények - Agrobacterium tumefaciens (Ti plazmid) fertőzés; probléma: egyszikűekre (pl. gabonafélék) többnyire nem alkalmas - Protoplaszt transzformáció; probléma: regeneráció nem működik olyan jól, mint a Gram+ baktériumoknál (pl. Bacillusok)

4 Génpuska működése A DNS-t (gént) nehézfém (W, Au, Ag) mikrorészecskék felületére viszik fel (d=1 μ m) A DNS-t (gént) nehézfém (W, Au, Ag) mikrorészecskék felületére viszik fel (d=1 μ m) Hordozó lemezhez rögzítve nagy sebességre gyorsítják (kb. 500 m/s). Hajtóanyag: nagy nyomású He gáz Hordozó lemezhez rögzítve nagy sebességre gyorsítják (kb. 500 m/s). Hajtóanyag: nagy nyomású He gáz Rácsnak ütköztetik, csak az apró, nagy sebességű DNS-sel burkolt részecskék repülnek tovább Rácsnak ütköztetik, csak az apró, nagy sebességű DNS-sel burkolt részecskék repülnek tovább Petri csészén tenyésztett növényi szövetnek (ált. callus-nem differenciálódott totipotens növényi szövet) ütköznek Petri csészén tenyésztett növényi szövetnek (ált. callus-nem differenciálódott totipotens növényi szövet) ütköznek Transzformáció: amerikai fánk-effektus Transzformáció: amerikai fánk-effektus

5 Génpuska működése

6 Transzformánsok szelekciója Transzformáns sejtekben membrán, sejtfal regenerálás; DNS leválása a hordozóról, vándorlás a kromoszóma felé, majd beépülés Transzformáns sejtekben membrán, sejtfal regenerálás; DNS leválása a hordozóról, vándorlás a kromoszóma felé, majd beépülés Szelekció valamilyen marker segítségével (antibiotikum rezisztencia, fluoreszcens protein) Szelekció valamilyen marker segítségével (antibiotikum rezisztencia, fluoreszcens protein) Szelektált totipotens sejtekből felépíthető (hormonok) a teljes rekombináns növény Szelektált totipotens sejtekből felépíthető (hormonok) a teljes rekombináns növény

7 Génpuska előnyei Egyszerű, gyors, könnyen kezelhető Egyszerű, gyors, könnyen kezelhető Mechanikai → univerzális (sejt típus, méret, alak, sejtfal megléte vagy hiánya nem számít) Mechanikai → univerzális (sejt típus, méret, alak, sejtfal megléte vagy hiánya nem számít) Hatékony- többszörös találatok egyszerre sok sejten Hatékony- többszörös találatok egyszerre sok sejten Növények, állatok (ember- jövőbeni klinikai alkalmazások) Növények, állatok (ember- jövőbeni klinikai alkalmazások)

8 Alkalmazások, érdekességek Széles körű alkalmazás, pl.: Széles körű alkalmazás, pl.: - Rovar (paradicsom gének), só és szárazság (árpa gének) rezisztens rizs - Vírus rezisztens papaya Mitokondrium, kloroplaszt is transzformálható ily módon Mitokondrium, kloroplaszt is transzformálható ily módon DNS helyett akár organellumok is juttathatók a sejtbe DNS helyett akár organellumok is juttathatók a sejtbe

9 Köszönöm a figyelmet!


Letölteni ppt "Biolisztika Készítette: Kiss László. Biolisztika fogalma „Génpuska” (Gene gun) „Génpuska” (Gene gun) Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Gének."

Hasonló előadás


Google Hirdetések