Előadást letölteni
Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon
1
Készítette: Kiss László
Biolisztika Készítette: Kiss László
2
Biolisztika fogalma „Génpuska” (Gene gun)
Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Transzformációs módszer Új keletű technika (kb. 25 éves) Növényi sejtek transzformálására fejlesztették ki
3
Transzformációs módszerek
Mikroorganizmusokra hatékony módszerek: kémiai transzformáció, elektroporáció, protoplaszt Növények - Agrobacterium tumefaciens (Ti plazmid) fertőzés; probléma: egyszikűekre (pl. gabonafélék) többnyire nem alkalmas - Protoplaszt transzformáció; probléma: regeneráció nem működik olyan jól, mint a Gram+ baktériumoknál (pl. Bacillusok)
4
Génpuska működése A DNS-t (gént) nehézfém (W, Au, Ag) mikrorészecskék felületére viszik fel (d=1μm) Hordozó lemezhez rögzítve nagy sebességre gyorsítják (kb. 500 m/s). Hajtóanyag: nagy nyomású He gáz Rácsnak ütköztetik, csak az apró, nagy sebességű DNS-sel burkolt részecskék repülnek tovább Petri csészén tenyésztett növényi szövetnek (ált. callus-nem differenciálódott totipotens növényi szövet) ütköznek Transzformáció: amerikai fánk-effektus
5
Génpuska működése
6
Transzformánsok szelekciója
Transzformáns sejtekben membrán, sejtfal regenerálás; DNS leválása a hordozóról, vándorlás a kromoszóma felé, majd beépülés Szelekció valamilyen marker segítségével (antibiotikum rezisztencia, fluoreszcens protein) Szelektált totipotens sejtekből felépíthető (hormonok) a teljes rekombináns növény
7
Génpuska előnyei Egyszerű, gyors, könnyen kezelhető
Mechanikai→ univerzális (sejt típus, méret, alak, sejtfal megléte vagy hiánya nem számít) Hatékony- többszörös találatok egyszerre sok sejten Növények, állatok (ember- jövőbeni klinikai alkalmazások)
8
Alkalmazások, érdekességek
Széles körű alkalmazás, pl.: Rovar (paradicsom gének), só és szárazság (árpa gének) rezisztens rizs Vírus rezisztens papaya Mitokondrium, kloroplaszt is transzformálható ily módon DNS helyett akár organellumok is juttathatók a sejtbe
9
Köszönöm a figyelmet!
Hasonló előadás
