Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Eukarióták Fő genetikai jellemzők –sejtmag –Kromoszóma centromeronnal és telomérákkal, valódi hisztonok képeznek nukleoszómákat –Mitotikus aparátus Például.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Eukarióták Fő genetikai jellemzők –sejtmag –Kromoszóma centromeronnal és telomérákkal, valódi hisztonok képeznek nukleoszómákat –Mitotikus aparátus Például."— Előadás másolata:

1 Eukarióták Fő genetikai jellemzők –sejtmag –Kromoszóma centromeronnal és telomérákkal, valódi hisztonok képeznek nukleoszómákat –Mitotikus aparátus Például az élesztő Saccharomyces cerevisiae haploid / diploid

2 Prokarióták Fő genetikai jellemzők –Nincs sejtmag –Kezdetleges kromoszóma –Nincs mitózis Például –Escherichia coli –Bacillus subtilis –Enterococcus faecalis haploid (biztosan?)

3 Közös problémák A sejtnek növekedni kell és osztódni –Drámai különbségek a térfogatban –A S. cerevisiae 64X nagyobb, mint az E. coli –A sejt osztódásakor alapvetően egy szeptum, egy válaszfal alakul ki B. subtilis E. coli a citoplazmát csak összehúzza az FtsZ gyűrűvel

4 A prokarióták további felosztása Baktériumok –A szokásosan baktériumok –Standard riboszóma RNS Archaea –Extrém körülmények között találhatók –Taxonómiailag idősebbek –Nem standard riboszóma RNS

5

6

7 DNS szerkezet Nagy árok Kis árok 3’ 5’ 2 hidrogén híd 3 hidrogén híd

8 DNS sztereokémiája Egy hasznos webtár NAintro/B/index.html

9 A kromoszóma szerkezete Bendich és Drlica mellékelt cikk –Érvek, hogy az eukarióta:prokarióta idea túlhaladott (néhány példa alább) Több kromoszóma a Vibrio-kban, de csak egy a Myrmecia pilosula-ban (egy hangya) Myxococcus genom > Pneumocystis Poliploid Azotobacter Lineáris kromoszóma Borrelia, gyűrűs a telomeráz hiányos Schizosaccharomyces pombe

10 További példák Sok dinoflagella-ban nincs nukleoszóma, de hisztonok és nukleoszóma a Methanothermus fervidus-ban –A nukleoszóma szerkezet alapjának kettősségét sugallják

11 hisztonok A DNS-hez kapcsolódó szerkezeti fehérjék H1, H2A, H2B, H3, H4 –H2 → H4 cilindert képeznek, erre tekeredik fel a DNS –H1 (nincs mindíg) a cilinderek között borítja a DNS-t

12 Hiszton alternatívák Csoportként: hiszton szerű fehérjék Példa a HU fehérje –A DNS-hez kötődik, de nem olyan erősen, mint egy igazi hiszton –Nukleázos vizsgálatok azt jelzik, hogy a DNS- HU komplex szorosabban tekeredik fel Gram-negatív baktérimokbam H-NS, vagy ezzel ekvivalens fehérje –A görbült DNS-hez kötődik előszeretettel –Úgy tűnik, hogy a génexpressziót befolyásolja

13 Az E. coli kromoszóma mérete Cairns autoradiogramja, replikálódó DNS Replikációs villa Újonnan replikálódott DNS Vonal 100  m Ez a pont kb. az E.coli sejt mérete

14 A DNS-t fel kell tekerni, hogy beférjen a sejtbe Szupercsavart DNS hurkok Topoizomeráz enzim

15 Eredmény a nukleoid

16 A nukleoid szerkezet modellje Figure A flexible doublet model for bacterial nucleoid structure.(a) simultaneous phase-contrast and DAPI (DNA)-fluorescence images. The “V” marks indicate presumptive unit nucleoids. (b) Hypothetical unit nucleoid, composed of two subunits joined by a spacer. (c) Unit nucleoid within rapidly grown cell. Nucleoid subunits tended to be radially directed and closely apposed to cell envelope, as drawn here. Reproduced from Zimmerman, S.B. (2003). Journal of Structural Biology 142: 256–265

17 Ploidia Milyen a diploid sejt? –Sejtben két kópia mindegyik kromoszómából Milyen a haploid sejt? –Sejtben egy kópia mindegyik kromoszómából Milyen is akkor a baktérium sejt? –Jó kérdés –Nem igazán felel meg a terminológiának

18 Replikáció hatása a géndózisra A A A BC BC Replikációs origó A A B B C A A A A B B C

19 Ha a DNS gyűrűs ZA ZA Ha a replikáció kétirányú, a markerek két készlete duplikálódik

20 A nem-replikálódó kromoszómában lévő DNS mennyisége a GENOM EKVIVALENS

21 A géndózis hatásai A replikációs origó közelében lévő markerek felül-reprezentáltak. Ez a jelenség hasznos lehet –Az E. coli sejt legnagyobb része riboszóma –Sok példány rRNS gén (amplifikáció nélkül is) –Egy riboszóma fehérje gén-cluster

22 Terminológia Merodiploid –Parciális diploid –Géneket hordozó extra DNS darab, lehet a kromoszómán is Plazmid –Önállóan replikálódó, nem esszenciális DNS darab –Kérdés: mi a különbség egy nagy plazmid és egy kis kromoszóma között? –EPISZÓMA : kromoszómába integrálódott plazmid

23 SZELEKCIÓ Nélkülözhetetlen, ha nagy sejtszámokkal dolgozunk –Csak azokat a sejteket kapjuk meg, amelyekkel valami történt –A fenotípus megváltozását látjuk, (nem a genotípusét) Általában a telep megjelenését figyeljük meg Rekombinációs gyakoriság –Nem könnyű kiszámítani, mert az utódok számát nem tudjuk pontosan

24 A genetikai folyamatok összefoglalása Mindegyik folyamathoz kell egy donor és egy recipiens! –A genetikai információ átvitele egyirányú utca! –NINCS CSERE! Majdnem mindig szükség van szelekcióra, hogy lássuk, ha valami történt

25 Genetikai transzformáció Tisztított, csupasz donor DNS a recipiensbe (MINDIG VALAMIT (kompetens sejtet)TRANSZFORMÁLUNK VALAMIVEL (transzformáló DNS-sel, plazmid DNS-sel, stb)!!) Nukleázokkal megszakítható Az eredménye a transzformáns –A sejt megköti a csupasz DNS-t –A citoplazmába transzportálja –Donor DNS/Recipiens DNS között rekombináció –Új fenotípusú transzformáns

26 Transzdukció A DNS-t bakteriofág szállítja a donorból a recipiensbe –Védelmet biztosít (nukleázokkal nem szakítható meg) –Specifikus szállító eszköz (host range) Két típus –Fág DNS helyett teljes egészében baktérium DNS van a fágrészecskében –Csak kis rész a kromoszóma DNS, a többi fág DNS –Rekombináció a recipiensben Az eredmény a transzdukáns

27 Konjugáció Élesztőben a konjugáció két haploid sejt fúziója → egy diploid sejt Baktériumokban a konjugáció: két sejt összetapad és DNS átvitel a donorból a recipiensbe –Egyirányú transzfer –Az átszállított DNS lehet nagy, vagy kicsi (kromoszóma DNS/plazmid DNS/transzpozon DNS) Rekombináció Az eredmény a transzkonjugáns

28 Más módszerek Protoplaszt fúzió –Ha eltávolítjuk a sejtfalat → protoplasztok fúzionáltathatók –Az eredmény diploid sejt (poliploid) Általában instabil → rekombináns utódok Néha stabil (egy ideig) Elektroporáció / elektrotranszformáció –Nagy feszültségű elektrosokk → sérül a membrán –A DNS beszivárog a citoplazmába

29 Nomenklatúra Demerec et al. –3 dőlt kis betű (gén) Laktóz bontás lac Triptofán bioszintézis trp –Nagy betű jelenti a különböző géneket lacA transzacetiláz lacZ  -galaktozidáz –Ugyanazon fenotípusú, de különböző mutációkat számozzuk pro-5 különbözik a proA15-től Az E. coli Genetic Stock Center osztja ki a számokat


Letölteni ppt "Eukarióták Fő genetikai jellemzők –sejtmag –Kromoszóma centromeronnal és telomérákkal, valódi hisztonok képeznek nukleoszómákat –Mitotikus aparátus Például."

Hasonló előadás


Google Hirdetések