Gyakorlati képzés: Genetikai variációk igazolása PCR segítségével.

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
Az egyenes vonalú egyenletes mozgás
Advertisements

Alap Termékek.
A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat
AZ ÚJ BELÉP Ő K ÉS AZ INAKTíV MUNKATÁRSAK SIKERESSÉ TÉTELÉNEK TITKA.
„az emberek hazudnak, de a bizonyítékok nem”
EGYENLETES MOZGÁS.
KŐVIRÁG 6.
Nyomtatás.
PVC ajtó beépítés.
A DNS Szekvenálás 2008 Géntechnikák labor.
A MILLIOMOS KÉPZÉS © Success Systems International – 2006
Newton törvényei.
A nedves levegő és állapotváltozásai
Extra Árkedvezmény Azonnal! Fizessen kevesebbet akár: %-kal.
Buccalis kenet a connexin-26 gén 35delG mutációjának non-invazív szűrésére kisgyermekeken Torkos Attila 1,2, Magnus Teschner 2, Peter Erfurt 2, Gerrit.
Miskolci Egyetem Informatikai Intézet Általános Informatikai Tanszé k Pance Miklós Adatstruktúrák, algoritmusok előadásvázlat Miskolc, 2004 Technikai közreműködő:
GTPáz aktivitás mérése gyakorlat Lévay Magdolna
A hőmérséklet mérése.
HS-GC-MS Hámornik Gábor Koványi Bence Simó Zsófia Szabó Eszter
DNS amplifikáció pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van
Élelmiszeranalitika előadás
Energia és takarékosság a háztartásban
A levegő nyomása és a forrás
A gélelektroforézis Alkalmazása: különböző molekulák (nukleinsavak, fehérjék) -méret szerinti elválasztását, -detektálását -mennyiségének meghatározását.
AZ ELLENANYAG SOKFÉLESÉG GENETIKAI HÁTTERE. AZ ELLENANYAGOK SZERKEZETE KOMPLEMENT AKTIVÁCIÓ SEJTHEZ KÖTŐDÉS LEBOMLÁS TRANSZPORT Könnyű lánc (L) Nehéz.
Szükségünk lesz valamilyen spreadsheet / táblázat kezelő programra
Gyümölcslevek, ásványvíz, üdítők, tejtermékek
Az egyenes vonalú egyenletes mozgás
Arginin ammonifikáció Készítette: Vas Nóra. Arginin ammonifikáció Ammonifikáció mérésére szolgáló labor kisérlet Ammonifikáció fontossága:  Ökoszisztémák.
Nitrifikáció vizsgálata talajban
Lipáz enzimaktivtás mérése
FDA hidrolízis aktivitási teszt
Cianobaktériumok izolálása és megszámlálása Készítette: Horváth Attila.
Készítette: Cserdi Péter Környezetmérnök szakos hallgató Szerves foszfor extrakciója talajból.
OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Soil Microorganisms: Carbon Transformation Test OECD ÚTMUTATÓ VEGYI ANYAGOK TESZTELÉSÉRE Talaj Mikroorganizmusok:
IN VITRO MUTAGENEZIS Buday László.
Használati utasítás az új bikinihez.
DNA-Fingerprint1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel.
Comenius Logo (teknőc).
2. Feladat. És akkor kezdjük is el!
Csökkentsük együtt a hulladékot!
VI/1. dia Az etoricoxib tolerálhatósági profilja.
Kenyér kihűlése Farkas János
A bikini helyes feladása
KÄRCHER MOE PM-R RG - 1 FP 303 tartozékok - Termékbevezetés Keménypadló felületek optimális ápolása, és minőségének megőrzése.
SAJTFONDÜK HŰTÖTT KÉSZÉTELEK otthoni feldolgozására
Alkalmazott élettan – II: Légzés, oxigénterápia Molnár Zsolt 2009
MICA képeken. MICA 1. kísérlet Vettünk 6 db 50x50 pixeles képet. Ezeket 1-1 kétdimenziós sűrűségfügvénynek (2D-hisztogram) fogjuk fel, és importance sampling-gel.
Páciens fertőzések eredetének meghatározása. Összefüggés A fertőzött beteget a kórházban ápolták egy műtétet követően. Az ápolás során minden nap más.
Bakteriális azonosítási folyamat
Antibiogram vizsgálat baktériumtörzsön
1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel.
SDS-PAGE Kísérleti protokoll Címkézzen meg 1,5 ml-es zárható tetejű mikrocsöveket a halminták neveivel. 1. Minta előkészítés.
Immunoprecipitation Gyakorlati munka I. rész. Kísérleti protokoll Protokoll.
ELISA gyakorlati menete Gyakorlat, amivel bizonyíthatjuk a HIV fertőzést anti-HIV antitestek bizonyítéka a vérben.
„Vegyünk egy nagy levegőt”
Polyacrylamid-Gél Elektroforézis (PAGE)
A GFP in vitro génexpressziója
Proteomika, avagy a fehérjék „játéka”
Molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Győri Edit Lelle Kocsis Kinga
Tisztítási próba poliakrilamid gélelektroforézissel
Tejsav előállítása Lactobazillus Delbrueckii által
A PLA előállítása és lebomlása
Új molekuláris biológiai módszerek
ASPERGILLUS FLAVUS ÉS FUSARIUM SPP. ELŐFORDULÁSA HAZAI KERESKEDELMI FORGALOMBAN KAPHATÓ FŰSZERPAPRIKA MINTÁKBAN Készítette: Lehotkai Péter
GYAKORLATI ÚTMUTATÓ A TESZTELÉS FOLYAMATA
Biohidrogén előállítása
PHB szintézise (PolyHydroxyButyrate)
Előadás másolata:

Gyakorlati képzés: Genetikai variációk igazolása PCR segítségével

A PCR készítés alapelve 10`, 72 °C Befejezés 60``, 94 ° Denaturáció 40 kör 120``, 94°C Denaturáció 60``, 55°C Melegítés 120``, 72 °C Nyúlás

I. A DNS kinyerése

1. Előkészítés 1.1 Cimkézze fel a 2 csavaros tetejű tubust a következőkkel: - GMO mentes (- GMO) - ételminta (T) és a csoportja számával! 1.2 Pipettázzon ki 500 µl-t a homogenizált InstaGene- Matrix-ból minden csőbe! Mindkét tubusban azonos mennyiségű mintának kell lennie! felső réteg gyöngyök

2. DNS előkészítése „GMO mentes ételből” 2.1Mérjen ki 1 g-ot az igazoltan GMO- mentes ételből, és helyezze bele egy mozsárba! 2.2Adjon hozzán 5 ml desztillált vizet!

2.3 Kb. 5 percig homogenizálja a keveréket! 2.4 Ismételten adjon hozzá 5 ml H2Odeszt.-t és törögesse addig, amíg annyira egyenletes lesz, hogy fel tudja pipettázni a keveréket! 2. DNS előkészítése „GMO mentes ételből”

2.5 Pipettázzon 25 µl-t az étel keverékből a “-GMO” jelzéssel ellátott tubus folyadékjába! 2.6 Zárja le ismét a tubust, és rázza össze a tubus pöccintgetésével! A „+GMO DNS“-sel való szennyezettség elkerülése érdekében a „-GMO anyagot“ kell kinyerni először! A mozsarat és zúzót tisztítószerrel kell elmosni és desztillált vízzel leöblíteni!

3. DNS előkészítése ételmintából 3.1Mérjen ki 1 g-ot a vizsgálni kívánt étel- mintából (T) és helyezze a mozsárba! 3.2 Adjon hozzá 5 ml H2Odeszt.–t! Használjon kesztyűt!!!

3.3Homogenizála a mintát kb. 5 percig! 3.4Ismételten adjon hozzá 5 ml H2Odeszt.-t és törögesse addig,amíg annyira egyenletes lesz, hogy fel tudja pipettázni a keveréket! 3. DNS előkészítése ételmintából

3.5 Pipettázzon 25 µl-t az étel keverékből a “T” jelzéssel ellátott tubus folyadékjába! 3.6 Zárja le ismét a tubust, és rázza össze a tubus pöccintgetésével!

4. Az enzimek denaturálása 95°C-on 4.1Helyezze 95°C-os víz fürdőbe mindkét mintát 5 percig! 4.2Centrifugálja a mintákat 5 percig rpm-es értéken! 4.3Tegyen 50 µl-t a fölülúszóból két előzőleg megcímkézett tubusba!

Vigyázat: Csak a felső rétegből vegyen az InstaGene gyöngyök nélkül az élelmiszer ellenőrző DNS és élelmiszer teszt DNS eltávolítása során!

II. Előkészítés: PCR and electrophorézis csoportmunkában Kijelölésük alapján, minden csoport előkészíti a PCR és az elektrophorézis egy részét a többi csoport számára.

III. A PCR előkészítése és végrehajtása

1. A PCR tubusok előkészítése 1.1 Számozza meg a tubusait 1-6-ig! 1.2 Pipettázza a PCR-előkészítményeket a következő táblázat alapján! 1.3 Keverje össze a PCR-előkészítményeit fel- és lepipettázva őket! 1.4 Hűtse a PCR-előkészítményeket jégen a PCR kezdetéig!

NrMaster MixDNA 110 µl PMM10 µl -GMO food control DNA 210 µl GMM10 µl -GMO food control DNA 310 µl PMM10 µl Test food DNA (T) 410 µl GMM10 µl Test food DNA (T) 510 µl PMM10 µl +GMO control DNA 610 µl GMM10 µl +GMO control DNA

Végezze el a PCR-t a thermocycler hőmérsékleti programja alapján! Ügyeljen a mintái poziciójára a thermocycler-ben az összekeverés elkerülése végett!! Győződjön meg róla hogy a mintái jól le vannak zárva! 2. A PCR elkészítése Cycler- Program Overview of the tubes in the cycler

IV. A PCR termékek meghatározása electrophorézis alapján (Agaróz/PAGE) 1.Agaróz- vagy Poliacril-amid- gélelektrophorezis segítségével határozd meg a PCR terméket! 2. A jelzések alapján fesse meg a géleit és analizálja őket! Filling the gelslots