Haltoxicitási teszt: prolongált 14 napos OECD No. 204 Készítette: Nagy Renáta A Környezettoxikológia c. tárgyhoz Vegyészmérnöki és Biomérnöki Kar Környezetmérnök Szak 1

A teszt Feladat: vízhez adott vegyianyag toxicitásának vizsgálata. A teszthez édesvízi halfajokat kell alkalmazni. A mérés végpontja a halak pusztulása. NOEC értéket kell meghatározni. A teszt időtartama: 14 nap (meghosszabbítható: 1-2 héttel) 2 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

A vizsgált vegyianyag tulajdonságai Tulajdonságok:   vízben való oldhatóság   gőznyomás   kémia szerkezet   anyag tisztaság   mennyiségi meghatározásra szolgáló elemzés módszer   kémiai stabilitás   oktanol-víz megoszlási hányados Ezek a használt módszer kiválasztásához szükséges információk. Módszer lehet: fél-statikus vagy átfolyásos módszer. Vizsgálat időtartama alatt biztosítani kell a vegyi anyag állandó koncentrációját. 3 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

A teszthez ajánlott fajok ajánlott fajok ajánlott tesztelési hőmérséklet (°C) teszteléshez használt halak ajánlott teljes testhossza (cm) névlatin név zebrahalBrachydanio rerio ,0 + 1,0 amerikai ponty féle Pimephales promelas ,0 + 1,0 közönséges pontyCyprinus carpio ,0 + 1,0 japán rizshalOryzias latipes ,0 + 1,0 szivárványos guppiPoecilia reticulata ,0 + 1,0 kékkopoltyús naphal Lepomis macrochirus ,0 + 1,0 szivárványos pisztráng Oncorhynchus mykiss ,0 + 1,0

A teszthez ajánlott néhány faj (1) Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt5 Pimephales promelasCyprinus carpio

A teszthez ajánlott néhány faj (2) Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt6 Oryzias latipes Poecilia reticulata

Alkalmazott halak Laboratóriumban vagy halgazdaságban tenyésztett halakat kell használni. Fontos a származás ismerete. Betegség- és parazita- mentes körülmények között kell nevelni őket, annak érdekében, hogy a kísérleti állat egészséges legyen. Ezt folyamatosan ellenőrizni kell. A teszthez alkalmazott halaknak a világ minden részén rendelkezésre kell állni. A teszthez egy vagy több faj is használható. 7 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Alkalmazott halak Kiválasztás szempontjai:   egész évben könnyen beszerezhető   könnyen fenntartható   kedvező gazdasági, biológiai, ökológiai tényezők   jó egészségi állapot   rendellenességtől mentes 8 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Állatok előkészítése a tesztre A halakat nappal a vizsgálat megkezdése előtt be kell szerezni. A teszt előtt legalább 7 napig a teszthez használt minőségű vízben kell tartani. Bármilyen zavaró tényezőt, ami megváltoztathatja a halak viselkedését,meg kell szüntetni. Használhatunk ivóvizet ( ha szükséges klórmentes), jó minőségű természetes vizet vagy művizet. A vízkeménységnek CaCO 3 mg/ liter között kell leni, pH esetében 6,0-8,5 közötti érték ajánlott. 9 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Előkészítés körülményei   fény: óra naponta   hőmérséklet: az adott fajnak megfelelő   oxigén koncentráció: legalább a levegő telítettségi értékének a 80%-a   etetés: naponta egyszer   halálozás:   több, mint 10%: a teljes tétel elutasítása   5 és 10% közötti: akklimatizációt folytatni kell még hét napig   kevesebb, mint 5%: tétel elfogadása 10 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Teszt típusok Fél-statikus vizsgálat (semi-static test): az oldat áramlása nélküli vizsgálat. A vizsgálat során a hosszabb időszakok (pl.: 24 óra) után ki kell cserélni az oldatokat. Átfolyásos vizsgálat (flow-through test): A vizsgálat során a vizet folyamatosan cseréljük a vizsgálati kamrákban. 11 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Teszthez használt berendezések Fontosabb eszközök:   hőmérséklet mérő   pH mérő   oxigén-koncentráció mérő   vízkeménység meghatározására szolgáló berendezés   megfelelő készülék a hőmérséklet szabályozásához A berendezések és a használt eszközök kémiailag semleges anyagból készülnek. A teszt során a pH-t, oldott oxigént és a hőmérséklet legalább hetente kétszer kell mérni. 12 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Hígítási sor készítése Megfelelő töménységű törzsoldat készítünk. Ebből hígítással elkészítjük a méréshez szükséges koncentrációkat. Vízben rosszul oldódó vegyi anyag esetén az oldódást segíthetjük mechanikai diszperzióval, szerves oldószerrel, emulgeálószerrel vagy diszpergálószerrel. A segédanyagok koncentrációja a vizsgálati oldatban nem haladhatja meg a 100 mg/l-t. Bármilyen segédanyag használata esetén, a kontroll halakat is ki kell tenni a segédanyag ugyanolyan koncentrációjának, mint amelyet a vizsgálati sorozatokban alkalmaztunk. A vizsgálatok során nem szüksége a pH-érték beállítása. Azonban ha bizonyítani lehet, hogy a pH-nak jelentős hatása van a teszt eredményére, akkor ajánlatos a pH beállítása után megismételni a mérést. 13 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Teszt körülmények   időtartam: 14 nap (növelhető 1-2 héttel)   kapacitás:   fél-statikus vizsgálatok maximális terhelés 1,0 g hal / liter   átfolyásos rendszer esetében magasabb terhelés is elfogadható   állatok száma: legalább 10   etetés:   naponta többször: (a takarmánygabona mennyisége nem haladhatja meg a halak által azonnal elfogyasztott mennyiséget)   naponta: állandó mennyiséggel   tisztítás:   átfolyásos vizsgálatot: tartály belső felületét legalább hetente kétszer   fél-statikus vizsgálat: a vizsgálati tartály cseréje meghatározott időközönként 14 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Teszt körülmények (2)   víz: használhatunk ivóvizet ( ha szükséges klórmentes), jó minőségű természetes vizet vagy kezelt vizet. A vízkeménység CaCO 3 mg/ liter között, pH 6,0-8,5 között ajánlott. A hígításhoz analitikai tisztaságú ionmentes vagy desztillált vizet kell használni, aminek a vezetőképessége maximum 10 μS/cm.   fény: napi óra   hőmérséklet: az adott fajnak megfelelő állandó hőmérséklet ± 2 ° C   oxigén koncentráció: legalább a levegő telítettségi értékének a 60%-a 15 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Vizsgálat érvényességének feltételei: A kontrollcsoportban a halálozás nem haladhatja meg a 10%-t a vizsgálat végéig. Állandó feltételeket kell biztosítani a vizsgálat végéig. Bizonyíték kell, hogy a vegyi anyag koncentrációja kielégítően fenntartható a vizsgálat végéig. A vegyi anyag koncentrációja a kezdeti koncentráció 80%-án belüli értéken kell tartani. Az oldott oxigén koncentrációja nagyobbnak kell lenni, mint a levegőtelítettségi érték 60%-a. Fél-statikus teszt esetében lehet levegőztetést is alkalmazni, ha ez nem befolyásolja a teszt eredményét. 16 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Megfigyelések Megfigyelt adatok:   pusztulás: a hal élettelen, ha érintésre nem reagál (naponta ellenőrizni kell)   egyéb elváltozások:   méretbeli elváltozás (tömeg, méret)   eltérő úszó mozgás   eltérő válaszreakció a külső ingerekre   táplálékfelvétel csökkenése/megszűnése Vizsgálat kezdete előtt fel kell jegyezni a halak méretét és tömegét. A teszt befejezésekor kell mérni a túlélők hosszát és tömegét, a mérés során nem szükséges. 17 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Kiértékelés Vizsgálat során feljegyzésre kerülő adatok: a) a)halált vagy egyéb hatást okozó koncentrációk grafikus ábrázolása az idő függvényében b) b)halak viselkedés változása c) c)vizsgálat során bekövetkezett események, amik befolyásolhatják az eredményt d) d)bármilyen eltérés az vizsgálati útmutatótól Kiértékelés: NOEC (No Observed Effects Concentration): az a legnagyobb vegyianyag koncentráció, amelynek még nincs megfigyelhető hatása egy élőlény (tesztorganizmus) hosszú távú kitettsége esetén 18 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Köszönöm a figyelmet!

Irodalomjegyzék  nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/ x/v1n2/s5/ p1 nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/ x/v1n2/s5/ p1 nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/ x/v1n2/s5/ p1  =19/nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/ x/v1n2 /s4/p1 =19/nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/ x/v1n2 /s4/p1 =19/nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/ x/v1n2 /s4/p1 20 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

Képek hivatkozásai:      cicaknak-_1.jpg cicaknak-_1.jpg cicaknak-_1.jpg   melas_Fathead_minnow_510px.jpg melas_Fathead_minnow_510px.jpg melas_Fathead_minnow_510px.jpg    Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt21