DNS amplifikáció pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van (egy DNS szakasz sokszorosítása - amplification) pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van sejten belül (in vivo) pl. E. coliban sejten kívül (in vitro) Készítette:N.P.
Sejten kívüli DNS sokszorosítás használták az E.coli DNS polimerázát is az áttörést azonban a hőstabil DNS polimeráz (Taq) hozta, ami a Thermus aquaticus -ból származik
PCR (polimeráz láncreakció) A PCR egy automatizált DNS sokszorosító, amit az amerikai kutató Kary Mullis fejlesztett ki a 80-as években Ennek kifejlesztését a Taq polimeráz tette lehetővé, mivel megnövelte a PCR hatékonyságát
A PCR-hez szükségesek hőstabil DNS polimeráz (Taq) templát DNS a cél szekvenciával dATP, dCTP, dGTP,dTTP reverse és forward oligonukleotid primerek Mg2+ ion a polimeráz enzim aktivitásához pH stabilizáló puffer (Tris-Cl) és KCl
A PCR ciklikusan működik Elődenaturáció 2 perc 95 °C A denaturáció során a dupla DNS szál ketté válik ez 95°C-on 30-60 s-ig tart A primerek kötődnek a DNS szálakhoz 3’ irányba, ez kb. 55-60°C-on 30-60 s-ig tart A szintézis során a polimeráz enzim 3’-5’ irányba kb. 2000 nukleotid/perc sebességgel dolgozik, 60-120 s 72-78°C-on Ezt a ciklust pl. 30-szor megismétli az automatizált termosztát és millió számra felszaporítja a cél szekvenciánkat 72°C-on 10 perc lánchosszabbításért