DNS amplifikáció pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat
Advertisements

„az emberek hazudnak, de a bizonyítékok nem”
Az e-tanulás. •Az e-tanulás csírái már a múlt század 40-es éveiben megjelentek. –Amikor Budapesten gyakoriak voltak a légiriadók, „feltalálták” a rádió-iskolát,
Mol. biol. módszerek 1. Dr. Sasvári Mária
KŐVIRÁG 6.
“Valós idejű” polimeráz láncreakció (RT-PCR)
Készítette: Bacher József
Delta Bio 2000 Kft. Ügyvezető: Dr. Haracska Lajos
A hepatitis B elterjedése világszerte
A polimeráz láncreakció Gurbi Bianka március 4. Emelt Biotechnológiai Számítások.
DNS replikáció Szükséges funkciók Iniciáció
DNS replikáció DNS RNS Fehérje
DNS replikáció: tökéletes másolat osztódáskor
A humán genom projekt.
A DNS Szekvenálás 2008 Géntechnikák labor.
Fehérjeszintézis Szakaszai Transzkripció (átírás)
Oligonukleotid szintézis
A NUKLEINSAVAK MANIPULÁCIÓJA SORÁN HASZNÁLATOS ENZIMEK
A membrántranszport molekuláris mechanizmusai
Strukturális genomika Gyakorlati feladatok. SNP-k és vizsgálatuk Mi az SNP?
Egyéb öröklődési típusok és epigenetika Láng Orsolya október 20.
Molekuláris genetika Falus András.
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító.
génszabályozás eukariótákban
Az Örökítőanyag.
Génexpresszió (génkifejeződés)
Polimeráz láncreakció (PCR)
MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI
ELEKTROKÉMIAI ALAPFOGALMAK
Ahhoz, hogy dolgozni tudjunk égy adott génnel, vagy szekvenciával nagy mennyiségű DNS-re van szükségünk, ezért valamilyen módon „klónozni” kell, a gén.
Plazmidok Készítette: Vásárhelyi Miklós. : E. Coli jól használható genetikai kísérletekben: Genomja kicsi(4,2*10 6 bázispár, kb. ezrede az emberének)
Polimeráz láncreakció
2009. november 26. Transzgének expressziós profiljának felvétele Transzgének expressziós profiljának felvétele Kukoricabogár- és herbicid-rezisztens növények.
Készítette: Sólyom Katalin Április 22.
Az esszenciális mikroelemek jelentősége
Egészségügyi mérnököknek 2010
Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése.
A gélelektroforézis Alkalmazása: különböző molekulák (nukleinsavak, fehérjék) -méret szerinti elválasztását, -detektálását -mennyiségének meghatározását.
AZ ELLENANYAG SOKFÉLESÉG GENETIKAI HÁTTERE. AZ ELLENANYAGOK SZERKEZETE KOMPLEMENT AKTIVÁCIÓ SEJTHEZ KÖTŐDÉS LEBOMLÁS TRANSZPORT Könnyű lánc (L) Nehéz.
Génsebészet Cseh Zsófia.
Nukleinsavak kimutatása, szekvenálás
1, GÉNKÖNYVTÁRAK ALKALMAZÁSA
IN VITRO MUTAGENEZIS Buday László.
Készítette: Czigléczki Gábor
Gyakorlati képzés: Genetikai variációk igazolása PCR segítségével.
Replikáció, transzkripció, transzláció
VI/1. dia Az etoricoxib tolerálhatósági profilja.
IV/1. dia Rheumatoid arthritis. IV/2. dia Rheumatoid arthritis Az etoricoxib vizsgálatainak áttekintése Etoricoxib párhuzamos dózisösszehasonlító vizsgálat.
Antisense RNS.
DNS szintézis, replikáció Információ hordozó szerep bizonyítéka Avery-Grifith kísérlet Bakterifágos kísérlet.
Primer tervezés qPCR-hez
Új molekuláris biológiai módszerek
Polimeráz Láncreakció:PCR, DNS ujjlenyomat
Géntechnikák labor kiselőadás Készítette: Nagy Zsuzsanna
KÓRHÁZI ACINETOBACTER BAUMANNII TÖRZSEK JELLEMZÉSE
Molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Proteomika, avagy a fehérjék „játéka”
Molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Molekuláris biológiai módszerek
A DNS replikációja Makó Katalin.
Új molekuláris biológiai módszerek
Készítette:Tóth Karolina
Új molekuláris biológiai módszerek
ASPERGILLUS FLAVUS ÉS FUSARIUM SPP. ELŐFORDULÁSA HAZAI KERESKEDELMI FORGALOMBAN KAPHATÓ FŰSZERPAPRIKA MINTÁKBAN Készítette: Lehotkai Péter
Biotechnológia, génmanipulációk, transzgenikus élőlények
Az elektronhéjak kiépülése
Az elektronhéjak kiépülése
Előadás másolata:

DNS amplifikáció pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van (egy DNS szakasz sokszorosítása - amplification) pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van sejten belül (in vivo) pl. E. coliban sejten kívül (in vitro) Készítette:N.P.

Sejten kívüli DNS sokszorosítás használták az E.coli DNS polimerázát is az áttörést azonban a hőstabil DNS polimeráz (Taq) hozta, ami a Thermus aquaticus -ból származik

PCR (polimeráz láncreakció) A PCR egy automatizált DNS sokszorosító, amit az amerikai kutató Kary Mullis fejlesztett ki a 80-as években Ennek kifejlesztését a Taq polimeráz tette lehetővé, mivel megnövelte a PCR hatékonyságát

A PCR-hez szükségesek hőstabil DNS polimeráz (Taq) templát DNS a cél szekvenciával dATP, dCTP, dGTP,dTTP reverse és forward oligonukleotid primerek Mg2+ ion a polimeráz enzim aktivitásához pH stabilizáló puffer (Tris-Cl) és KCl

A PCR ciklikusan működik Elődenaturáció 2 perc 95 °C A denaturáció során a dupla DNS szál ketté válik ez 95°C-on 30-60 s-ig tart A primerek kötődnek a DNS szálakhoz 3’ irányba, ez kb. 55-60°C-on 30-60 s-ig tart A szintézis során a polimeráz enzim 3’-5’ irányba kb. 2000 nukleotid/perc sebességgel dolgozik, 60-120 s 72-78°C-on Ezt a ciklust pl. 30-szor megismétli az automatizált termosztát és millió számra felszaporítja a cél szekvenciánkat 72°C-on 10 perc lánchosszabbításért