Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

ENZIMKINETIKA Egy egység az az enzim mennyiség, amely 1  mol szubsztrátot alakít át vagy 1  mol terméket képez 1 perc alatt adott reakció körülmények.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "ENZIMKINETIKA Egy egység az az enzim mennyiség, amely 1  mol szubsztrátot alakít át vagy 1  mol terméket képez 1 perc alatt adott reakció körülmények."— Előadás másolata:

1

2 ENZIMKINETIKA Egy egység az az enzim mennyiség, amely 1  mol szubsztrátot alakít át vagy 1  mol terméket képez 1 perc alatt adott reakció körülmények között. E + S P + E mol/dm 3 !!!! E/tf E/mg fajlagos aktivitás MIÉRT NEM MÉRHETŐ? Michaelis és Menten SI rendszerben: 1 Katal: 1 mol szubsztrátot alakít át 1 s alatt. hatalmas enzim mennyiség nKat = Kat 1 Kat = 6*10 7 U, 1U =1.6*10 -8 Kat, 1U= 1/60  Kat

3 Michaelis-Menten kinetika E + S ES E + P k 1 k k 2 k -2 feltételezések: *k -2 =0 *első lépés gyorsan egyensúlyra jut= RAPID EKVILIBRIUM *stabil ES komplex, EP komplex elhanyagolható *egy aktiv centrum, egy szubsztrát aktivitás helyett cc használható S   E 0 vagyis E 0 / S < <1 k 1 SE = k -1 (ES) az (ES) disszociációs állandója a „minket érdeklő” reakciósebesség: anyagmérleg osszuk el ezt a kettőt egymással

4 Michaelis-Menten kinetika Rendezzük át!

5 Michaelis-Menten kinetika

6 M és M Michaelis, L.,and Menten, M. (1913) Die kinetik der invertinwirkung, Biochemistry Zeitung 49,

7 BRIGGS-HALDANE KINETIKA S   Eo vagy Eo / S  1 és (k 1 ES  k -1 (ES) ill. k 1 ES  k 2 (ES)) d(ES)/dt =0 steady state. Briggs, G. E., and Haldane, J. B. (1925) A Note on the Kinetics of Enzyme Action, Biochem J 19,

8 BRIGGS-HALDANE KINETIKA K m =(k -1 + k 2 ) / k 1 Michaelis állandó

9 DISZKUSSZIÓ Michaelis -MentenBriggs-Haldane ha num(k 1 )> >num(k 2 ) a két konst. azonos!

10 V=(V max /K S )*S 1.rendû tartomány 0. rendű tartomány V max = k 2 E O V S K m ; K S DISZKUSSZIÓ S  Ks Ha S  Ks derékszögű hiperbola látszólagos elsőrendű sebességi állandó katalitikus effektivitás= specfi(ci)tás állandó

11 L-B, L-H, E-H ábrázolások 1/S -1/K m tg  =K m /V max 1/V  V max tg  =1/V max S/V S K m /V max KmKm V V/S V max tg  =-K m V max /K m

12 V 0 értelmezése V 0 = ( dS/dt ) t=0 S t P t V 0 = ( dP/dt ) t=0 A M-M és B-H egyenletekben V kezdeti reakciósebességet jelent!!!

13 A k 2 meghatározása és V max E 0 -függése V max3 =k 2 E O3 V max2 =k 2 E O2 V max1 =k 2 E O1 KmKm E O1 E O2 E O3 EOEO S V tg  = k 2

14 A kinetikai paraméterek értelmezése 1 V max IUBMB:nem max, hanem limit!!! HATÁRSEBESSÉG k cat : [ s -1 ] Egy enzimmolekula átalakítási frekvenciája S-telítés esetén NEM ENZIMTULAJDONSÁG V max = k 2. E 0 = AKTIVITÁS k 2 [s -1 ] ENZIMTULAJDONSÁG = turnover number, váltásszám V max = k cat. E 0 Kiterjesztés minden enzimre és minden kinetikára K m, K S -Közelítőleg az S az élő sejtben - az enzim affinitása - A = B ??? -Változott a K S Inhibitor?Aktivátor? -Enzimanalitika S>>KS Túl érzékeny érzéketlen

15 A kinetikai paraméterek értelmezése 2 k dm 3 mol -1 min -1  max. érték(10 11 ) kis molekulák diffúzió-sebessége  k min -1 k min -1 K m mol/dm 3

16 k cat alsó határa metabolikus enzimeknél Legtöbb enzim e két szélső eset között Természetes enzimeknél: >10 5 Mesterséges e-nél (DNA-zyme, abzyme:<10 3

17 REVERZIBILIS REAKCIÓK 1 Sok enzim katalizálta reakció - főként a biopolimer hidrolízisek - nagymértékben a jobboldali irányba eltolt egyensúllyal rendelkeznek, → gyakorlatilag k -2 valóban elhanyagolható. De például a glükóz fruktóz (glükóz izomeráz)gyakorlatban is egyensúlyi reakcióként viselkedik E + S ES E + P k1k1 k -1 k2k2 k -2 1/K S KPKP

18 REVERZIBILIS REAKCIÓK 2 Végezzük el a következő osztásokat: HALDANE összefüggés

19 REVERZIBILIS REAKCIÓK 3 E MI TÖRTÉNIK? S → P vagy P → S ? S P V netto = V előre - V vissza = k 2 (ES) - k -2 (EP) MITŐL FÜGG? K eq, S, P értéke Reverzibilis M-M egyenlet


Letölteni ppt "ENZIMKINETIKA Egy egység az az enzim mennyiség, amely 1  mol szubsztrátot alakít át vagy 1  mol terméket képez 1 perc alatt adott reakció körülmények."

Hasonló előadás


Google Hirdetések