Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Portoktenyésztés = in vitro androgenezis. In vitro technikák •Mikroszaporítás: szomatikus sejteket tartalmazó szövetekb ő l indul ki •Diploid technika:

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Portoktenyésztés = in vitro androgenezis. In vitro technikák •Mikroszaporítás: szomatikus sejteket tartalmazó szövetekb ő l indul ki •Diploid technika:"— Előadás másolata:

1 Portoktenyésztés = in vitro androgenezis

2 In vitro technikák •Mikroszaporítás: szomatikus sejteket tartalmazó szövetekb ő l indul ki •Diploid technika: embrió kultúra •Haploid technika: androgenezis mikrospóra tenyésztés ginogenezis: ovárium (magház kultúra) ovolum (magkezdemény kultúra)

3 Haploid szövettenyésztési technika. Lényege: A fejl ő dés megfelel ő stádiumában lév ő pollent tartalmazó portokok kipreparálása és a benne fejl ő d ő mikrospórából androgenezis indukciója steril, mesterséges körülmények között. Az egyedfejl ő dés gametofitonról sporofitonra lehet átállítani megtermékenyítés nélkül, mesterségesen.

4 Cél Haploid egyedek el ő állítása, amelyek kromoszómaszerelvénye spontán duplikációval, vagy mesterséges indukcióval megduplázódhat, így homozigóta dihaploid egyedek jönnek létre. In vivo fejl ő dési útról teljesen új sporofita útra történ ő átirányítás

5 * Irányított keresztezésekhez szükséges tiszta vonalak kialakítása, fenntartása *Recesszív tulajdonságok fenotípusos megjelenítése * Gametoklonális változás nyomonkövetése ill. felhasználása nemesítésre * Idegentermékenyül ő növények beltenyésztési ideje csökken * GM növényeknél a génre nézve homozigóták létrehozása * A különböz ő faj- és nemzetségkeresztezésekben a haploidia lehet ő vé teszi hibridek el ő állítását (pl. Triticale ) * Az öntermékenyül ő fajok F1 és F2 növényei, vagy F6, F7 nemzedékben még hasadó vonalai, törzsei egy generáció alatt rögzíthet ő k * Genetikaliag tiszta vonalak molekuláris markerezéshez, géntérképezéshez Jelent ő sége

6 Története •1930-as években els ő portoktenyésztéssel kapcsolatos kutatások: mikrosporogenezis és gametogenezis vizsgálata •1952: La Rue nyitvaterm ő pollenjének szövetszervez ő désének bemutatása • : Guha és Maheshwari: Datura innoxia pollenjéb ő l nagy számú pollenhaploidot nevelt portokkultúrában. •60-as végét ő l Nitsch, Niizeki és Oono pollen haploid el ő állítása Nicotiana, Oryza fajokból •Napjainkban 80 nemzetség kb. 300 fajánál sikerült pollen haploidot el ő állítani

7 Mikrogametogenezis Sporofita életszakasz vége Ideális állapot, elvileg totipotensek!!! Pollendimorfizmus elmélete: az izolált portokban kétféle pollen van Androgén (P) pollen •Kevés citoplazma •Kevés keményít ő

8 Sikeres androgenezis feltétele •Nem determinált, androgén mikrospóra •Ontogenezis indukálása valamilyen stresszel (h ő, éheztetés, 2,4D) •Sejtciklus megfelel ő fázisában lév ő mikrospóra (G2)

9 Androgenezis útja Soksejtes pollen kialakulása: *A típus: aszimmetrikus mitózis: nagy vegetatív sejt, ez tovább osztódik, a kicsi generatív degenerálódik *B típus: szimmetrikus mitózis: 2 hasonló diffúz sejtmag: bel ő le haploid sporofiták fejl ő dése C típus: szimmetrikus mitózis után a két sejtmag fúzionál: dihaploid (DH) növény fejl ő dése Ontogen ezis indukálá sa stressz hatására mikrospó rákból Sporofi ta osztód ások Soksejt es pollen Közvetlen embriogenezis, vagy kalluszon át embriogenezis/ organogenezis Pollen H/DH

10 Androgenezis módszere 1.Donor növények nevelése Tenyésztési feltételek: •Reszponzív vonalak szelektálása •Virágzás eleji androgénebb pollen •N hiány •Alacsony h ő mérséklet

11 2. Portok preparálás

12 3. Androgenezis indukció *1/2 MS táptalaj *Vas fontos, ezért Fe-EDTA kiegészítés * Stressz indukció: magas 2,4D vagy magas NaCl

13 4. Inkubáció Inkubáció el ő tt a steril táptalajra rakott portokok hideg kezelése rövidebb- hosszabb ideig Kallusz vagy embrió megjelenésig sötét, 25-30C o Regeneráció: lux

14 5. A regenerálódott növények ploid szintjének vizsgálata flow cytométerrel történt.

15 6. Doubled haploid (DH) növények el ő állítása * Spontán rediploidizáció * Kolhicin kezelés táptalajba vagy a regenerálódott növény kolhicin oldatos kezelése

16 Izolált mikrospóra tenyésztés El ő nyei: •Portoktenyészeteknél regenerált növények eredete kérdéses •Mikrospórák közvetlenül érintkeznek a táptalajjal, biológiai sz ű r ő kiesik.

17 Mikrospóra izoláció módszere •Egysejtmagvas és korai kétsejtmagvas pollenek izolálása virágok feldarabolásával •Homogenizálni robotgéppel spec. oldatban (pl. 0,3M mannitol) •Sz ű rés nylon sz ű r ő n •Táptalajok azonosak a portoktenyésztéssel


Letölteni ppt "Portoktenyésztés = in vitro androgenezis. In vitro technikák •Mikroszaporítás: szomatikus sejteket tartalmazó szövetekb ő l indul ki •Diploid technika:"

Hasonló előadás


Google Hirdetések