Szabadgyökös reakciók tanulmányozása antioxidáns készítményekkel kezelt patkányok heréjében in vitro 60 Co γ sugárzás hatására Sárdy Márta 1, Váli László 2, Drahos Ágnes 1, Dám Annamária 1, Fébel Hedvig 3, Székely Edit 2, Blázovics Anna 2 1 Fodor József OKK-OSSKI, Budapest, 2 Semmelweis Egyetem, Budapest, 3 Állattenyésztési és Takarmányozási Kutatóintézet, Herceghalom

Bizonyos élethelyzetekben az ischaemia/reperfúziós károsodásokat követően sugárterhelés is éri a szervezetet. Keveset tudunk arról, hogy ilyen esetekben alkalmazott antioxidáns vegyületek hogyan hatnak távoli szervek funkcióira.

T. Gerwig, 2002

Célkitűzés Kutatásaink során arra voltunk kíváncsiak, hogy a máj-ischaemia/reperfúziós károsodások kivédésére alkalmazott antioxidáns vegyületek hogyan befolyásolják a here redox-homeosztázisát. Van-e különbség a szintetikus Metadoxin és a természetes eredetű Flavonax 100 készítmény hatása között, ha a hereszövetet in vitro Co 60 gamma sugárral kezeljük?

Ismert például, hogy az androgén-független prosztatatumor, amely rezisztens a jelenleg alkalmazott terápiákra, gátolható A-vitamin, illetve szintetikus retinoid-kezelésekkel, melyek apoptózist indukálnak in vitro a rákos sejtekben. Néhány retinoid-származék hatásos apoptózis-induktor (retinoid-receptor független úton) mind a hormon-, mind a hormontól független prosztatatumor esetén. A TR3 orphan receptor azonban fontos szerepet játszik a drog-indukált prosztata-apoptózis szabályozásában (Zhang XK 2002). Az A-vitamin fontos szerepet játszik a szerin/treonin kinázok aktiválásában Az A-vitamin a RAF proto-onkogén proteinkináz „Zn-finger”doménjére hat, ezáltal befolyásolja a redox-homeosztázist (Hoyos 2005).

Flavonax 100 (Fitokup Kft.) polifenolok, flavonoidok, antociánok, proantocianidinek, karotinoidok A-vitamin C-vitamin E-vitamin

Az utóbbi évek kutatási igazolták, hogy az A-,C- és E-vitaminok, illetve a polifenolos vegyületek hatnak a jelátviteli utakra, ezáltal befolyásolják a sejtek életműködését, proliferációját és az apoptózist ( Azzi 2004, Lunec 2001, Griffiths 2001),

Metadoxin (piridoxin L-2-pirrolidon-5-karboxilát) -a piridoxin és a pirrolidon-karboxilát, a glutaminsav ciklikus laktámjának, a glutation szintéziséért és lebontásáért felelős gamma-glutamil ciklus intermedierjének a kombinációja- Antioxidáns tulajdonságának magyarázata lehet, hogy a szövetekben az ionpárból álló molekula feltételezhetően disszociál, és N-oxid típusú molekulák keletkeznek belőle, melyek szerkezetüket tekintve spincsapdaként működhetnek, így szinglet oxigén, hidroxilgyök, illetve szuperoxid anion scavengelésére képesek. Metadoxin (Kéri Pharma)

A molekula két alegysége önmagában is előfordul a természetben, ezért terápiás koncentrációban toxicitásukkal nem kell számolnunk. A gyógyszer B6 vitamin komponense a szervezetben fontos szerpet tölt be: például az aminosavak, szénhidrátok, szfingolipidek és a hem metabolizmusában. A taurin szintézisén keresztül az epesavak neutralizációjában és detoxikálásában is szerepet játszik.

Műtéti protokoll Hím Wistar patkányokat ( g) Nembutal narkózisban (35 mg /ttkg) operáltuk. A bal laterális és a mediális lebenyeket lekötöttük, ezzel 45 percig ischaemiás állapotot idéztünk elő. Ezután az eredeti állapot visszaállítottuk. A kísérletet 24 órával később az állatok elaltatásával termináltuk.

Kísérleti protokoll (I.) Antioxidáns kezelések Flavonax 100: 1 g/ttkg per os 10 napig Metadoxin: 200 mg/ttkg/nap ip. 5 napig

Kísérleti protokoll (II.) Besugárzás: 6 Gy (0,2586 Gy/min) Gammatron-3 készülékben ( 60 Co γ sugárzás) in vitro testis homogenátum

Kísérleti protokoll (III.) Csoportok (N=10): kontroll, áloperált, ischemia-reperfúzió, Flavonax-kezelt csoportok, Metadoxin-kezelt csoportok, Minden csoportban besugárzás

Here homogenizátum készítése izotóniás KCl oldattal Centrifugálás 4 °C-on rpm, 20 min. Felülúszóból fehérje meghatározása Lowry módszerével SOD-meghatározás RANSOD kittel (NP-40 lízis pufferben) Szabadgyökfogó-kapacitás meghatározása lumineszcencia méréssel Mintaelőkészítés, mérés

Következtetések Az antioxidáns kezelések máj ischaemia- reperfusio során csak jelentéktelen mértékű eltérést okoztak a herében, viszont sugárterhelés hatására a Metadoxinnal kezelt állatok heréjében szignifikánsan felerősödtek a szabadgyökös reakciók. A Flavononax 100 készítmény mellett nem tapasztaltunk gyökgenerálást.

Ezek az eredmények felhívják a figyelmet arra, hogy májműtétek előtt prevenciós céllal alkalmazott antioxidánsok különböző mértékben interferálhatnak a szükséges sugárkezelés kapcsán fellépő károsodásokkal távoli szövetekben is.

Köszönetnyilvánítás Bárkovits Sarolta Pintér Edina Szabó Katalin A kutatásokat a NKFP 1B/047 támogatta.

Köszönöm figyelmüket!