Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis

A szilárd fázisú koncepció Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A szilárd fázisú koncepció Merrifield 1962 (Nobel díj: 1984), Merrifield gyanta: sztirol-divinilbenzol kopolimer A szintetizálandó polimer láncot szilárd hordozón növesztjük A szintézis során a reagensek cseréjét a szilárd hordozó reakciótérből való eltávolításával valósítjuk meg. Klasszikus módszer: álló szilárd hordozó, áramló reagensek (mosás) Tűhegy módszer: a tűhegyekre kötött szilárd hordozó kiemelése A szintézis utolsó lépése a kész lánc eltávolítása a hordozóról

A hordozó tulajdonságai Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A hordozó tulajdonságai legyen oldhatatlan, duzzaszthatatlan és inert minden reagensel és oldószerrrel szemben. legyen nagy szemcseméretű, hogy a reagensek jól átjárhassák. legyen nagy felületű. legyen elégendően merev, hogy ellenálljon a szintézis során alkalmazott nyomásnak. legyenek funkciós csoportjai, melyek reprodukálható módon regálnak

A hordozók fontosabb típusai Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A hordozók fontosabb típusai szilika üveggyöngyök (CPG) műanyag cellulóz papír

A védőcsoport stratégia kialakítása Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A védőcsoport stratégia kialakítása A szintézis során nem kívánt mellékreakciókat adó csoportokat védeni kell. A védelemre szolgáló csoport lehet: Állandó védőcsoport: a szintézis egész folyamata alatt a növekvő lánc monomerjein marad, csak a kész láncról távolítják el Átmeneti védőcsoport: a láncnövekedés alatt minden monomerbeépítési lépésben eltávolítják A szintézis egész menetét meghatározza a védőcsoportok eltávolításának módszere, azaz hogy a védőcsoport savval bázissal távolítható el Értelemszerűen ellentétes jellegű védőcsoport ellentétes stabilitású kell legyen

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A feladat

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Szilárd hordozó

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Kondenzáció

Foszfit csoport aktiválás Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Foszfit csoport aktiválás

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Kapcsolási reakció

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Védendő csoportok

Védendő csoportok 5' helyen levő hidroxil-csoport bázisokon levő primer aminok foszfor atomon levő hidroxil-csoport.

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A. de Oxyribonucleic Sir A. Midite

Átmeneti védőcsoportok Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Átmeneti védőcsoportok

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Tartós védőcsoportok

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Amidit

Átmeneti védőcsoport eltávolítása Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Átmeneti védőcsoport eltávolítása

Foszfit csoport aktiválás Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Foszfit csoport aktiválás

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Kapcsolási reakció

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Capping

Foszfit csoport oxidálása Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Foszfit csoport oxidálása

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Reakcióciklus

Mikronalalitikai kurzus Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Hasítás