Buccalis kenet a connexin-26 gén 35delG mutációjának non-invazív szűrésére kisgyermekeken Torkos Attila 1,2, Magnus Teschner 2, Peter Erfurt 2, Gerrit Paasche 2, Thomas Lenarz 2, Timo Stöver 2 1 Gyermekgyógyászati Klinika Fül-orr-gége osztály, Szegedi Tudományegyetem 2 Fül-Orr-Gégészeti és Fej-Nyaksebészeti Klinika, Hannoveri Orvostudományi Egyetem

Veleszületett süketség ~ 60 %-ban genetikai oka van. Szűrése a mai napig a vérből (leukocytákból) kivont DNS genetikai vizsgálatán alapult, de…

… milyen érzés ezt látni?

Szájnyálkahártya-kenet Megfelelő alternatíva?

Az eljárás alkalmazhatóságának bemutatása vérből és buccalis kenetből származó DNS kvantitatív és kvalitatív összehasonlításával

Beteganyag és módszerek cochleáris implantáció előtti kivizsgáláson megjelent hallássérült beteg (1-72 év, átlag: 15,8 év) 1. csoport: 3 év alattiak (29 beteg) 2. csoport: 3 év felettiek (31 beteg)

Beteganyag és módszerek 2. vérvétel (EDTÁ-s kémcsőbe) buccalis kenetvétel (éhgyomor!): steril vattás pálcával, melyet utána 400 µl PBS-be (foszfát-só puffer) helyezünk

Beteganyag és módszerek 3. genomiális DNS kivonása a vérmintákból és a nyálkahártya-kenetekből

Beteganyag és módszerek 4. kvantitatív DNS analízis UV fotometriával a vérből származó DNS mennyiségek statisztikai összehasonlítása az 1. és 2. csoport közt a nyálkahártyából származó DNS mennyiségek statisztikai összehasonlítása az 1. és 2. csoport közt

Beteganyag és módszerek 5. kvalitatív DNS analízis – a módszer alkalmazhatóságának bemutatása a connexin-26 gén 35delG mutációjának kimutatása révén: 1.a connexin-26 gén szelektív sokszorosítása polimeráz láncreakcióval végzett hely-specifikus mutagenezis révén 2.a kapott termék emésztése Bsi Y1 restrikciós endonukleázzal 3.agaróz gélelektroforézis 4.a vér- és nyálkahártya-leletek egymással való összevetése minden egyes betegnél

Eredmények 1. Kvantitatív DNS analízis Az 1. és 2. csoport egyazon forrásból izolált DNS koncentrációi közt nincs szignifikáns különbség, amely arra utal, hogy a források DNS tartalma nem korfüggő. A genetikai vizsgálathoz elegendő mennyiségű DNS vonható ki a buccalis kenetekből. 1. csoport2. csoportKétmintás T-próba DNS koncentráció vérből (átlag±s.e.) (µg/ml) 15,9 ± 1,814,6 ± 1,9p = 0,63 DNS koncentráció nyálkahártyából (átlag±s.e.) (µg/ml) 9,5 ± 1,48,6 ± 1,4p = 0,67

Eredmények 2. Kvalitatív DNS analízis Az egyes betegek vérmintájának és a buccalis kenetének a 35delG mutációra vonatkozó lelete minden esetben azonos volt. A genetikai vizsgálathoz megfelelő minőségű DNS vonható ki a buccalis kenetekből.

Következtetés A szájnyálkahártya-kenet megbízható DNS forrás genetikai vizsgálatok számára, mely elkerülhetővé teszi a vérvételt a kisgyermekek hallásgenetikai szűrésénél.