A PMP22 gén mutációs analízise Szerzők: Reško Péter, Radvánszky János, Pálffy Roland, Témavezető: Doc. RNDr. Kádaši Lajos, PhD.

Öröklődő perifériás neuropátiák Motorikus és szenzorikus zavarok Morfológiai elváltozások Előfordulásuk együttes gyakorisága 1:2500 Charcot-Marie-Tooth betegség 1A altípusa (CMT1A) nyomásos bénulásokra hajlamosító örökletes neuropátia (HNPP)

A betegségek tünetei CMT1A a végtagok lassan előrehaladó elgyengülése és atrófiája Érzékelési zavarok a végtagokban csökkent inreflexek és lábfej deformitások (pes cavus, kalapácsujj) idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenése axonok demyelinációja és remyelinációja során keletkező hipertrófiás Schwann sejtek, ún. „onion bulbs“

A betegségek tünetei HNPP visszatérő, fájdalommentes idegi bénulások, melyek érzékelési károsodást, elgyengülést és atrófiát okoznak idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenése axonok demyelinációja és remyelinációja során keletkező hurkaszerű képződmények, ún. „tomaculae“ esetenként pes cavus, csökkent inreflexek és a boka reflexeinek hiánya

Genetikai háttér perifériás myelin protein 22 (PMP22) CMT1A HNPP PMP22 duplikációja (~70%) és különböző pontmutációk HNPP PMP22 deléciója (~85%) és olyan pontmutációk, melyek következtében a protein teljesen elveszíti a működőképességét

Genetikai háttér A 17-es kromoszómán található két repetíció (CMT1A-REP) közötti egyenlőtlen meiotikus crossing-over Végeredménye egy reciprok 1,5 Mb nagyságú duplikáció és deléció amely tartalmazza a PMP22 gént

Genetikai háttér

Genetikai háttér

Diagnosztika PMP22 génkópiáinak pontos kvantifikációja Southern hibridizáció, kvantitatív PSL, FISH, PCR-en alapuló módszerek, MLPA rekombináció-specifikus DNS fragmensek azonosítása PFGE, PCR-en alapuló módszerek

Diagnostika Real-time PCR Relatív kvantifikáció → komparatív CT módszer referens gén (humán szérum albumin – HSA) cél gén és referens gén azonos amplifikációs hatékonysága kalibrátor

Eredmények

a ∆∆Ct metódus átlagértéke az egyes csoportoknál Eredmények deléciót hordozó páciensek egészséges egyedek duplikációt hordozó páciensek a ∆∆Ct metódus átlagértéke az egyes csoportoknál

Eredmények Az egyes diagnosztikai csoportok részére meghatározott ∆∆Ct eredmény intervallumok: deléció – 0,65 alatt; egészséges egyed – 0,75-1,25; duplikáció – 1,35 fölött Megbízható diagnózis az esetek 87,2%-ában Duplikáció azonosítása a CMT1A gyanús páciensek 38,5%-ánál

Köszönöm a figyelmet!