Proteomika, avagy a fehérjék „játéka” 2011. november 23. Borsodi Vegyipari Napok Készítette: Lukács Fanni, Nagy Viktória
Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás
Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás
Comenius Projekt „The game of the proteins” Hamburg Pforzheim
Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet Előkészületek, Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás
Proteomika Mivel foglalkozik? Mivel foglalkoztunk mi? Minőségi, mennyiségi analízis Fehérjeszintézis Eredet meghatározás Rendszertani besorolás Mivel foglalkoztunk mi? Izomfehérje komplexek tömeg szerinti szétválasztása
szarkomer = aktív izom egység Izomfehérjék izom izomfonalak egy izomfonál szarkomerek szarkomer = aktív izom egység
Csúszó filamentum elmélet szarkomer miozin aktin miozin fej miozin molekula
Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás
makromolekulák keveréke az elektroforézis futási iránya Elektroforézis fehérjék irányított vándorlása Kisebb fehérjék gyorsabbak makromolekulák keveréke elektroforézis az elektroforézis futási iránya porózus gél
Vándorlást biztosító közegek Nátrium-dodecil-szulfát Töltés-tömeg arány azonos Vándorlási sebesség csak M-től függ Hátrány = denaturálja a fehérjét
Vándorlást biztosító közegek 2. Poliakrilamid Elválasztandó anyagokkal nem reagál Gélképző Pórus átmérője szabályozható Ellenálló
Kaleidoszkóp standard Segédanyagok Lammli-puffer Másodlagos kötések felbontása pH megtartása Commassie-kék Megfestés látható fehérje oldat Kaleidoszkóp standard Meghatározhatóvá teszi a fehérje M-ét Kaleidoszkóp standard
Gélelektroforézis folyamata I. Fehérjék denaturálása Elektrolizáló cella előkészítése Puffer oldat beletöltése Gél-rések feltöltése fehérje oldatokkal 200V-ra kapcsoljuk a cellát (kb. 2 óra) puffer-tartály szorító-keret elektród állvány vakkazetta
Gélelektroforézis folyamata II. Gél színezése Comassie-oldattal Kaleidoszkóppal kalibrálási görbe készítése Fehérje tömegének meghatározása Vándorlási távolság (mm) Kalibrációs görbe Molekula tömeg (KDa)
Eredményeink és a mi gélünk Miozin( 204 KDa) Aktin (42 KDa) Kaleidoszkóp standard
Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet Előkészületek, Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás
Fehérjeszintézis DNS transzkipció mRNS transzláció fehérje
Mesterséges fehérjeszintézis Felhasznált anyagok Aminosavak (például: metionin) Reakció mix RNS polimeráz enzim, faktorok, ATP, koenzimek Puffer oldat GFP kontrol vektor E. coli baktérium Fehérje előállítása után gélelektroforézist végeztünk Megmértük a fehérje vándorlási távolságát, tömegét
Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet Előkészületek, Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás
Felhasználás Sokoldalú felhasználás Fém felületek bevonása Anyagok elválasztása Festés Betegségek diagnosztizálása
Köszönjük a figyelmet!