Immunoprecipitation Gyakorlati munka I. rész. Kísérleti protokoll Protokoll.

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
Szitakötő Totó.
Advertisements

A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat
OXIDOK TESZT.
10. Kísérletek acetilénnel 1. Az acetilén előállítása
Gázok előállítása és reakciójuk Lugol-oldattal
AZ ANYAGOK CSOPORTOSÍTÁSA
Szükséges Eszközök: • kémcsőtartó, 3db kémcső, vegyszeres kanál, cseppentő Anyagok: • tojásfehérje, szilárd konyhasó, tömény sósav, tömény salétromsav,
14.Aceton, víz és benzin azonosítása
Kattinthatásokkal tovább! N.1 Fájdalom mentesen eltávolítja a kötést, mert oldja a sebtapasz ragasztóját.
MON-TEK GENERÁTOR használati útmutató A Mon-Tek Generátor átvétele 1. A Mon-Tek Mo99/Tc99 Generátor szállítása Type A konténerben történik, magassága 41.
Mikronalalitikai kurzus elválasztástechnika
Elektródok.
Volumenpótlás.
Windows alapok Fájlkezelés.
Gyakran előforduló táblák és jelzések vízen és vízparton
Webdesign I - Oldaltervezés alapelvek. I. Tartalom-elhelyezés az oldalon ALAPELVEK 1.Mindig értékes és érdekes tartalom jelenjen meg az oldalon! 2.A tartalom.
IMMUNSZEROLÓGIA, AGGLUTINÁCIÓ, PRECIPITÁCIÓ
GTPáz aktivitás mérése gyakorlat Lévay Magdolna
Készítette : Tuska Borbála 8.b április
STRONCIUM-ION MEGKÖTŐDÉSÉNEK KINETIKÁJA TERMÉSZETES AGYAGMINTÁKON
Vénás vérvétel.
1. Kísérletek kén-hidrogénnel
49. kísérlet Az ecetsav reakciói
Magnézium-szulfát- és alumínium-szulfát reakciói
Szilárd AgNO 3, ZnSO 4, kihevített CuSO 4 azonosítása.
Citromsav, Nátrium-acetát és szőlőcukor azonosítása
19. AgNO3-, Na2CO3- és NaOH- oldat azonosítása
Szükséges Eszközök: gázfejlesztő főzőpoharak fecskendők Anyagok:
Acetilén előállítása, égetése, reakciója brómos és kálium-permanganátos vízzel Acetilén előállítása, égetése, reakciója brómos és kálium-permanganátos.
Második rész III. kationosztály elemzése 2011
Arginin ammonifikáció Készítette: Vas Nóra. Arginin ammonifikáció Ammonifikáció mérésére szolgáló labor kisérlet Ammonifikáció fontossága:  Ökoszisztémák.
Nitrifikáció vizsgálata talajban
Lipáz enzimaktivtás mérése
Talajvizsgálat kataláz aktivitás méréssel
Cianobaktériumok izolálása és megszámlálása Készítette: Horváth Attila.
OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Soil Microorganisms: Carbon Transformation Test OECD ÚTMUTATÓ VEGYI ANYAGOK TESZTELÉSÉRE Talaj Mikroorganizmusok:
Fogszín meghatározás 2008.
Gyakorlati képzés: Genetikai variációk igazolása PCR segítségével.
DNA-Fingerprint1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel.
Dürer kísérletbemutató
Tagozat, 10. évfolyam, kémia, 16/1
(REFLEXIONES) Auto. show Caño Cristales – Kolumbia.
Bakteriális azonosítási folyamat
1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel.
SDS-PAGE Kísérleti protokoll Címkézzen meg 1,5 ml-es zárható tetejű mikrocsöveket a halminták neveivel. 1. Minta előkészítés.
PAINT.NET INGYENES PROGRAM. Informatika 5. osztály Cs.L. PAINT.NET A PAINT.NET egy kisméretű képszerkesztő ingyenes program. Használhatjuk a Paint helyett.
ELISA gyakorlati menete Gyakorlat, amivel bizonyíthatjuk a HIV fertőzést anti-HIV antitestek bizonyítéka a vérben.
1 Hogyan szerezz affiliate partnereket, akik többszörözni tudják a bizniszed?
Molekuláris biológiai módszerek
Polyacrylamid-Gél Elektroforézis (PAGE)
132. óra Néhány nemlineáris függvény és függvény transzformációk
A GFP in vitro génexpressziója
óra Néhány nemlineáris függvény és függvény transzformációk
Proteomika, avagy a fehérjék „játéka”
Molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Tisztítási próba poliakrilamid gélelektroforézissel
Tejsav előállítása Lactobazillus Delbrueckii által
A PLA előállítása és lebomlása
Gyakorlati feladat példák
Összeállította: J. Balázs Katalin
Ki tudja, hogy a vodka mi mindenre jó!?
Méréstechnika 1/15. ML osztály részére 2017.
Biotechnológia.
GYAKORLATI ÚTMUTATÓ A TESZTELÉS FOLYAMATA
téma közlemény SmartArt-ábra piros hátterű képekkel (Haladó)
Biohidrogén előállítása
Hol találkoztatok már a sóval? Készítsetek s(z)ófelhőt!
Mikrobiológiai üzemanyag cella összeszerelése
PHB szintézise (PolyHydroxyButyrate)
Előadás másolata:

Immunoprecipitation Gyakorlati munka I. rész

Kísérleti protokoll Protokoll

1.1 Az antitest-oldat előállítása Az AB törzs oldat 7,5 mg IgG/mL-t tartalmaz (Teljes térfogat: 1mL) Pipettázz 100 µL Antitest törzs-oldatot a sárga csőből (AK) a pirosba (AK). Most pipettázz 900 µL NaCl oldatot a piros csőbe (AB) Keverd össze az AB-oldatot úgy, hogy többször fel-le pipettázod az oldatot. Figyelj oda, hogy amikor kevered, csak az első megállásig pipettázz, különben levegőbuborékok keletkezhetnek! 1. A kísérlet előkészítése

1.2 Az antigén-oldat hígítása Pipettázz 40 µl-t a lila csőből (AG) a kék csőbe (AG) Most pipettázz 960 µL NaCl oldatot a kék csőbe (AG) Keverd össze az AG-oldatot úgy, hogy többször fel-le pipettázod. 1. A kísérlet előkészítése

2.1 Pipettázz minden üregbe (1 – 7) 100 µl NaCl-oldatot. 2.2 Pipettázz 200 µL AG-oldatot a kék csőből a 8-as üregbe µL AG 2. A hígítási sorozat előkészítése

2.3 Pipettázz100 µL AG-t a 8-as üregből a 7-esbe. 2.4 Keverd össze a 7-es üreg tartalmát úgy, hogy többször fel-le pipettázod. Figyelj oda, hogy amikor kevered, csak az első megállásig pipettázz, különben levegőbuborékok keletkezhetnek! µL AG 2. A hígítási sorozat előkészítése

2.5 A 7-es üregből pipettázz 100 µL-t a 6-os üregbe. 2.6 A kút tartalmát keverd össze úgy, hogy többször fel- le pipettázod. Vidd véghez úgyan úgy -mint korábban– az 1-es üregig 2.7 Most mérj ki100 µL-t az 1-es üregből. 100 µL µL kimérése 2. A hígítási sorozat előkészítése

2.8 Pipettázz minden üregbe 100 µL AB-t a piros csőből. 2.9Tartsd a tartalmát 5 percig szobahőmérsékleten. 2. A higítási sorozat előkészítése Melyik AG koncentráció jelenik most meg a különböző üregekben?

Antitest analitika Gyarkotlati munka II. rész

Készítsd elő a csöveket az alábbi pipettázási táblázat alapján. 1. A csövek előkészítése a PAGE-hez

1.1 Pipettázz a zöld csőből (LÄ) 25 µL Lämmli-puffert minden üregbe (1-9). 1.2 Pipettázz 15 µL H 2 O-t az 1, 2, 4, 5, 7 and 8-as csőbe, and 5 µL H 2 O-t a 3, 6 és 9-es csőbe. 1.3 Keverd össze a 4-es üreg tartalmát úgy, hogy többször fel-le pipettázod. Pipettázz a 4-es üregből 10 µL csapadékot az 1, 2 és 3-as csövekbe. 1.4 Pipettázz a piros csőből (AB) 10 µL antitestet a 4, 5 és 6-os csőbe. 1. A vizsgálatok előkészítése a PAGE-hez

1.4Pipettázz a kék csőből (AG) 10 µL antigént a 7, 8 és 9-es csövekbe. 1.5Pipettázz a sárga csőből (DTT) 10 µL Dithiotreitol-t a 3, 6 és 9-es csövekbe. 1. A csövek előkészítése a PAGE-hez

1.6 Tedd a 2, 3, 5, 6, 8 és 9-es csöveket 5 percre 95° C termosztátba. CsőHőDTT AB/AG AB AG A csövek előkészítése a PAGE-hez

2. A gél kazetták előkészítése 2.1Nyisd ki a PAGE gél csomagot úgy, hogy elvágod a fekete vonal mentén, és vedd ki a gél kazettát.

2.2 Vágd el egy szikével a gél kazetta szalagját a megjelölt vonal mentén, és húzd ki az alsó csíkot. 2. A kísérlet előkészítése

3.1 Tedd a gél kazettákat a rövidebb kábellel összekötött tányérral az elektróda állásba. A másik oldalhoz adj egy másik gélt vagy vak kazettát. 3.2 Helyezd az elektróda állást a szorítókeretbe és rögzítsd a szorítókat. 3.3Tedd a szorítókeretet az elektróda állással a puffer tartályba. 3. Az elektroforézis kamra előkészítése

4.1 Töltsd meg az elektróda állást TGS-puffer-rel a határig 4.2 Töltsd meg a puffer tartályt 800 ml TGS-puffer-rel. 4.3 Húzd ki a fésűt. 4. A kamra puffer-ral való feltöltése

Töltsd meg a gél slot-ot az alábbiakkal: - 20 µL az 1-es csőből - 20 µL a 2-es csőből - 20 µL a 3-as csőből - 5 µL Kaleidoscope protein standard (KS) - 20 µL a 4-es csőből - 20 µL from the tube (5) - 20 µL from the tube (6) - 20 µL from the tube (7) - 20 µL from the tube (8) - 20 µL from the tube (9) ABAGAB/AGKS 5. A gél „slot”-ok megtöltése

6.1 Zárd be a gél kamrát és indítsd el az elektroforézist 150V-on. 6.2 Hagyd abba az elektroforézist, amikor a festék eléri a gél alsó végét. 6. Az elektroforézis vizsgálata

7.1 Távolítsd el a szorítókeretet és öntsd a puffer-t a puffer tartályba. (A puffer újra használható!) 7.2 Távolítsd el a gél kazettákat. 7. A gél eltávolítása

8.1 Nyisd ki az üveg gél tányérokat és tedd a gélt egy festékes edénybe. 8.2 Mielőtt megfested a gélt, vizezd be két percre, majd távolítsd el a vizet. 8.3 Színezd be a gélt úgy, hogy hozzáadsz 100 ml Coomassie-oldatot maximum 30 percre. 8.4 Öntsd a Coomassie-oldatot a tároló üvegbe és adj hozzá 100 ml langyos vizet. 8.5 Tedd a gélt a centrifugába. 8. Fehérje festés

Táblázat: Fehérjék moláris tömege a standard Kaleidoszkóp- ban 9.1 Csinálj egy bemért vonalat a standard Kaleidoszkóp segítségével. ProteinColorM MyosinKék Da ß-galactosidaseBíbor Da Bovine albumin Zöld Da Carbon anhydraseLila Da Soybeans trypsin inhibitorNarancs Da LysozymePiros Da AprotininKék 7081 Da 9. Analízis

9.2 Határozd meg minden vonal csoportjának molekuláris tömegét. Melyik csoport melyik fehérjéhez tartozik? 9. Analízis