Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Antitrombin III, heparin kofaktor II Muszbek László Debreceni Egyetem, Orvos és Egészségtudományi Centrum, Klinikai Kutató Központ.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Antitrombin III, heparin kofaktor II Muszbek László Debreceni Egyetem, Orvos és Egészségtudományi Centrum, Klinikai Kutató Központ."— Előadás másolata:

1 Antitrombin III, heparin kofaktor II Muszbek László Debreceni Egyetem, Orvos és Egészségtudományi Centrum, Klinikai Kutató Központ

2 Mi utal thrombophiliára? 1/ Mélyvénás thrombosis relatíve fiatal korban (<55 év) 2/ Recurrens thrombosis 3/ Thrombosis szokatlan helyen (nem alsó végtagon) 4/ Familiáris elôfordulás (öröklött thrombophilia)

3 Thrombophiliák felosztása 1/ Öröklött 2/ Szerzett 3/ Öröklött + szerzett

4 Öröklött thrombophiliák okai Az inhibitor rendszer deficienciája Antitrombin III deficiencia Az inaktivátor rendszer deficienciája Protein C, Protein S deficiencia Fokozott faktor szint vagy abnormális faktorok Aktivált protein C resisztencia (FV Leiden) Protrombin 20210A allél Dysfibrinogenaemia thrombosissal Magas FVIII, FIX, FXI szint ? Csökkent fibrinolítikus aktivitás Plazminogen deficiencia, FXII hiány? Egyéb Homocystinuria

5 APC rezisztencia - FV Leiden Ismert, ritka thrombophiliák Ismeretlen A vénás thrombosisokra való fokozott hajlam genetikai okainak relatív gyakorisága AT III, protein C, protein S def. Protrombin A allél 40% 35% 10% 5%

6 Az AT III sémás szerkezete  -AT III (90%) (15% szénhidrát),  -AT III (10%)  -AT III szorosabban kötődik a heparinhoz és a heparan szulfát proteoglikánhoz (HSPG), mint az -AT III, gyorsabbal eliminálódik a keringésből, de több van az érfalhoz kötve. Asn96, 135, 155, 192 SZH N--C Heparin-kötö helyek Trombin gátlás Ms.: D

7 Antitrombin III gén 1q22-25, 7 exon és 6 intron, bp. 700 bp gén promoter, májspecifikus transzkripciós faktorok (HNF3, HNF4) kötôdése 32 aminósav vezető szekvencia, 432 aminósav érett fehérje

8 Az antitrombin III funkciója Serpin, de progresszív inhibitor, a gátló hatása heparin vagy HSPG jelenlétében 1000x-re gyorsul Fő fiziológiás hatása: a trombin és FXa gátlása (de gátolja a FIXa-t, a FXIa-t a FXIIa-t és a FVIIa-SzF komplexet is) Az aktivációs komplexben a thrombocyták felszínén lévő FXa-t vagy a fibrinhez kötött trombint az AT III még heparin jelenlétében sem gátolja, az alvadékból kikerülő szabad trombint/FXa-t viszont hatékonyan gátolja (“scavanger funkció”). AT III-trombin (TAT) és AT III-FXa komplex gxorsan eliminálódik a keringésből (döntően a máj veszi fel, LDL receptor-related protein)

9 Heparin-AT III kölcsönhatás Heparin: szulfatált glükózaminoglikán Nem frakcionált heparin: D Az AT III-mal való kölcsönhatásban döntő a szulfatált pentasaccharid egység (HPSPG-ben is ez van) Magas és alacsony ms-ú frakciók. Alacsony ms.-ú heparin a nem frakcionált heparin kémiai vagy enzimatikus hasítással (1, D) Trombin gátláshoz legalább 18 saccharidból álló molekula. Anti-FXa:anti-trombin hatás aránya nem frakcionált: 1:1 alacsony ms.ú 2:1-4:1 pentasaccharid (fondaparinux): trombinra nem hat

10 Heparin hatása az AT III-ra antitrombin antitrombin + pentaszacharid  1 -antitripszin

11 Heparin nélkül FXa TR AT Alacsony ms.-ú heparin TR AT H FXa AT H Konvencionális heparinAT TR H FXa AT H Az antitrombin III hatásmechanizmusa

12 AT III meghatározás I. Funkcionális tesztek Heparin kofaktor meghatározás Progresszív antitrombin meghatározás 1. Alvadási tesztek 2. Kromogén tesztek Antitrombin aktivitás meghatározás Anti-faktor Xa teszt II. Antigén meghatározás Turbidimetria, Nefelometria III. Heparin kötôdés kémiai vizsgálata

13 Heparin kofaktor aktivitás meghatározás kromogén szubsztráttal Heparin + AT III  Heparin - AT III komplex trombin (feleslegben)  Heparin - AT III + ————————— FXa (feleslegben)   Heparin - AT III - trombin + trombin (maradék) —————————————————————  Heparin - AT III - FXa + FXa (maradék) trombin R-pNA ———— R-COOH + pNA FXa R tr CBZ-Gly-Pro-ArgR xa : B z -IIe-Glu-Gly-Arg

14 AT III meghatározás problémái Szűrőteszt: funkcionális kromogén teszt Az anti-trombin alapú teszt hátránya: nem specifikus, heparin kofaktor II-t is beleméri ha bovin trombin akkor jobb Anti-FXa alapú tesztet a heparin kofaktor II nem befolyásolja Szűk referencia tartomány (80-120%), a döntés a 65-80%-os tartományban nagyon nehéz és súlyos következményekkel jár. Többszöri mérés, genetikai teszt

15 Öröklött antitrombin III hiány laboratóriumi típusai TípusAntigénHeparin kofaktorProgresszív Heparin aktivitás aktivitás affinitás* Ia  Normál Ib  Csökkent IIaNormál  Csökkent IIbNormál  Normál v. emelkedett IIc#Normál  Normál Csökkent *Heparin kötô teszttel meghatározva #IIc típusú heterozigóták: nincs fokozott thrombosis rizikó, öröklôdésmenet AR

16 Öröklésmenet: AD (II/HBS: AR) Gyakoriság:1: A thrombophila oka: 3-5% Thrombosis rizikó (OR)21 , 5  Plazma szint heterozig.:30%-70% A heterozigóták tünetei: DVT, PE, MVT, CVT I. típus és II/RS, II/PE típus esetén nincsenek homozigóták : letális mutáció II/HBS esetén csak a homozigóták betegek  Spanish multicenter (family) study on thrombophilia  Leiden thrombophilia study (general population) Antitrombin III hiány

17 Öröklött antitrombin III hiány típusai I. Típus: Alacsony antitrombin aktivitás és antigén II. Típus:Abnormális antitrombin variáns RS, az aktív centrumra gyakorolt hatás ( ; Arg393-Ser394: trombin hasítási hely) HBS, a heparin kötô helyre gyakorolt hatás PE, pleiotróp (multiplex) hatás ( )

18 Antitrombin gén mutációk altípusonként FajtaÖsszesen I. Típus: II. Típus: RS HBS PE 11 18

19 P41L L99F G392D R47H V295V Q305Q Asn96, 135, 155, 192 SZH N--C Heparin-kötö helyek Trombin gátlás P41L: AT III Basel (BA) R47H: ATIII Padua I, ATIII Rouen I, ATIII Bligny(KM) L99F: AT III Budapest 3 (FK, HM, SJ, BJ, RK, GE, KSGY) G392D: AT III Stockholm (KMP) Debrecenben talált AT III mutációk

20 Beteg AT III aktivitás (%) AT III antigén (g/L) MutációReferencia KMP520.27Gly392Asp heterozigóta 1 AT III Stockholm FK580.26Leu99Phe heterozigóta 2 AT III Budapest 3 HM520.24Leu99Phe heterozigóta 2 AT III Budapest 3 SJ560.22Leu99Phe heterozigóta 2 AT III Budapest 3 BJ240.19Leu99Phe homozigóta 2 AT III Budapest 3 RK570.28Leu99Phe heterozigóta 2 AT III Budapest 3 GE610.27Leu99Phe heterozigóta 2 AT III Budapest 3 KSG270.20Leu99Phe homozigóta 2 AT III Budapest 3 BA670.31Pro41Leu heterozigóta 3 AT III Basel KM750.29Arg47His heterozigóta 4 AT III Padua I SzI460.21Nem detektálható Referencia tartomány: Antitrombin III aktivitás: %,Antitrombin III antigén: g/L 1 Blajchman et al. Blood, 1992; 79: Olds et al.FEBS Lett, 1992; 300: Chang and Tran, JBC, 1986; 261: Owen et al. Blood, 1987 ; 69: , Caso et al. Thromb Res, 1990;58: Wolf et al. Thromb Haemost, 1990;63:215-9.

21 Antithrombin III-Stockholm: A codon 392 (Gly-Asp) mutation with normal heparin binding and impaired serine protease reactivity Blajchman et al. Blood, 1992, 79: éves nőbeteg OAC+MVT 1. Beteg plazma és kontroll plazma Heparin-sepharose oszlopon azonos elúciós profil, SDS-PAGE-n azonos mobilitás 2. Beteg és kontroll plazmából izolált AT III humán trombinnal inkubálva a beteg AT III nem alkot TAT komplexet 3. Site-directed mutagenesis- sejt mentes fehérjeszintézis: normál AT III 15 sec alatt, beteg AT III csak 5 perc után alkot TAT komplexet 4. Heparin hozzáadása fokozta a TAT képződést  Az AT III RS variáns oka a trombin AT III aktiv centrumának fel nem ismerése

22 BetegTünetek AT III aktivitás (%) AT III antigén (g/L) Mutáció SN Tricuspidalis billentyű thrombosis Leu99Phe homozigóta SKtünetmentes Leu99Phe heterozigóta SGY VCI thrombosis Leu99Phe homozigóta SGY (apa) tünetmentes Leu99Phe heterozigóta RA (anya) tünetmentes Leu99Phe heterozigóta AT III Budapest 3- családvizsgálat

23 Szerzett AT III deficienciák Csökkent szintézis Consumptio Leukocyta proteázok elhasítják az reaktív hurkot Máj elégtelenség Súlyos sepsis Trauma, égés Malignus megbetegedések kemoterápia) Extracorporális keringés Nephrosis syndroma Acut DIC

24 Heparin kofaktor II Szintén serpin ( D), 33% homológia az AT III-mal Csak a trombint gátolja, egyéb aktív alvadási faktorokat nem. Szintén progresszív inhibitor, a heparin és a dermatán szulfát fokozza a hatását Más a hatásmechanizmus mint az AT III esetében Az aktív centrumban leucin van, amely mellett a trombin nem hasít (katepszin G-t, kimotripszint gátol a serpin mechanizmussal) Nem a trombin aktív centrumához, hanem az exosite 1-hez kötődik Hetrozigóta deficienciája nem okoz thrombophiliát

25


Letölteni ppt "Antitrombin III, heparin kofaktor II Muszbek László Debreceni Egyetem, Orvos és Egészségtudományi Centrum, Klinikai Kutató Központ."

Hasonló előadás


Google Hirdetések