Méh akut kontakt toxicitási teszt 214-es számú OECD teszt

Az előadások a következő témára: "Méh akut kontakt toxicitási teszt 214-es számú OECD teszt"— Előadás másolata:

1 Méh akut kontakt toxicitási teszt 214-es számú OECD teszt
Készítette:Veres Rita

2 Tartalom A méh jellemzése Teszt jellemzése Méhek begyűjtése
Vizsgálati dobozok követelményei Méhek etetése Teszt előkészítése A teszt folyamata A teszt kiértékelése Vizsgálati jelentés tartalma

3 A méh jellemzése A méhek a hártyásszárnyúak rendjébe tartoznak, közeli rokonságban állnak a darazsakkal és a hangyákkal. Megközelítőleg fajt ismerünk. Az Antarktiszt kivéve valamennyi kontinensen megtalálhatóak. A legkisebb méh 2,1mm hosszú, míg a legnagyobb 39mm. A méhek nektár és pollen fogyasztására adaptálódtak, ebből nyerik az energiát és a fehérjéket, a pollenek többségével lárváikat táplálják.

4 Teszt jellemzése Az akut toxicitási teszt peszticidek, növényvédő szerek és egyéb vegyi anyagok hatását vizsgálja felnőtt dolgozó méhek esetében. A mérés végpontja a méhek letalitása, illetve túlélése. Akkor nyilvánítható halottnak egy méh, ha teljesen mozdulatlan. A teszt időtartama 48 óra. Ha a teszt során a halálozási ráta nagyobb, mint 10%, akkor a teszt meghosszabbítható, maximum 96 órásra.

5 Méhek begyűjtése 1 Ugyanahhoz a fajhoz tartozó fiatal, kifejlett dolgozó méheket kell gyűjteni. Hasonló korú, megfelelően táplált, egészséges, betegségtől menetes, ismert előéletű és fiziológiai állapotú méheket kell begyűjteni. A méheket a felhasználás reggelén kell begyűjteni, illetve előző este, ebben az esetben a következő napig vizsgálati körülményeknek megfelelően kell tartani őket.

6 Méhek begyűjtése 2 Kora tavasszal, ill. késő ősszel kerülni kell a begyűjtést, mert ez idő alatt a méhek fiziológiája változik. Ebben az időszakban végzett vizsgálatokhoz a a méheket inkubátorban kell nevelni, „méh kenyérrel” és cukoroldattal kell etetni. A méh kenyér porcukorból és mézből gyúrt cukorlepény. Vegyi anyagokkal (pl. antibiotikummal) kezelt méhek esetében a kezelés végétől számított 4 hétig nem használhatóak fel toxikológiai vizsgálatokra.

7 Vizsgálati dobozok követelményei
A teszt során a méheket vizsgálati dobozokban tartják. A vizsgálati doboz legyen könnyen tisztítható, jól szellőző. A doboz készülhet rozsdamentes acélból, dróthálóból, műanyagból, és fából is. A teszt során egy dobozban 10 méh tartható. A doboz méretét úgy kell meghatározni, hogy a méheknek elegendő hely legyen.

8 Méhek etetése A méheket a vizsgálat alatt 500 g/l koncentrációjú cukoroldattal lehet etetni. Az etetés egy „etetővel” végezhető. Az etető egy üvegcső, mely kb. 50mm hosszú, 10mm széles, az egyik vége leszűkített, kb. 2 mm átmérőjű.

9 A teszt előkészítése A vegyi anyag különböző dózisait el kell készíteni. A vizsgálat során minden egyes dózis esetében teszt és kontrollcsoportot kell alkalmazni, 3-3 párhuzamost kell mérni. Oldószer, ill. nedvesítőszer alkalmazása esetén további kontroll méréseket kell végezni, vizsgálni kell, hogy ezen szerek milyen hatással vannak a méhekre. A vegyi anyag alkalmazása előtt a befogott méheket szén-dioxiddal, vagy nitrogénnel el kell kábítani

10 A teszt folyamata 1 Dózisok felvitele: 1μl előre meghatározott koncentrációjú oldatot applikátorral kell felvinni a méh potrohának háti oldalára. Vizsgálati körülmények: 25 ± 2°C-os sötét helyen kell tartani a méheket, fontos a relatív páratartalom (50-70%), melyet a vizsgálat során fel kell jegyezi.

11 A teszt folyamata 2 Időtartam: 48 óra, illetve hosszabbított vizsgálat esetében 96 óra. A mortalitást fel kell jegyezni a vizsgálat kezdetétől számítva 4., 24.,48. órában, illetve hosszabbított mérés esetén 72.,96. órában. Észrevételek feljegyzése: normálistól eltérő viselkedés.

12 A teszt kiértékelése 1 A mortalitási adatokból dózis-hatás görbék készítésével meg lehet határozni a 24 és 48 órás LD50 értékeket, illetve meghosszabbított mérés esetében a 72 és 96 órás LD50 értéket. A mérési időpontokban következő képlettel kiszámítható a halálozási ráta: H=100*(Nk-Nminta)/Nk, ahol:Nk: a kontrollban életben maradt méhek száma (db), Nminta: a mérendő mintában életben maradt méhek száma (db) A halálozási rátát a koncentráció logaritmusának függvényében ábrázoljuk, majd a grafikonról leolvasható az adott időponthoz tartozó LD50 érték.

13 log vegyi anyag koncentráció
A teszt kiértékelése 2 A dózis-válasz görbéről leolvasható az LD50 érték, melynek mértékegysége μg vizsgált anyag/méh. ED20 ED50 μg/méh Halálozási ráta % log vegyi anyag koncentráció

14 Vizsgálati jelentés tartalma
Vizsgált anyag jellemzői (fizikai-kémiai tulajdonságok) Méhek jellemzői (tudományos név, származás, életkor, befogás módszere, időpontja) Vizsgálati körülmények (hőmérséklet, relatív páratartalom, elhelyezési körülmények, ketrec jellemzői, vizsgálat időpontja, eredmények, dózis-válasz görbék, LD50 értékek, megfigyelések)

15 Források: Wikipédia http://hu.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9hek
OECD Guideline for Testing of Chemichals 214 Honeybees, Acute Contact Toxicity Test

16 Képek forrása: