Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis

Az előadások a következő témára: "Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis"— Előadás másolata:

1 Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Szilárd fázisú oligonukleotid szintézis

2 A szilárd fázisú koncepció
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A szilárd fázisú koncepció Merrifield 1962 (Nobel díj: 1984), Merrifield gyanta: sztirol-divinilbenzol kopolimer A szintetizálandó polimer láncot szilárd hordozón növesztjük A szintézis során a reagensek cseréjét a szilárd hordozó reakciótérből való eltávolításával valósítjuk meg. Klasszikus módszer: álló szilárd hordozó, áramló reagensek (mosás) Tűhegy módszer: a tűhegyekre kötött szilárd hordozó kiemelése A szintézis utolsó lépése a kész lánc eltávolítása a hordozóról

3 A hordozó tulajdonságai
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A hordozó tulajdonságai legyen oldhatatlan, duzzaszthatatlan és inert minden reagensel és oldószerrrel szemben. legyen nagy szemcseméretű, hogy a reagensek jól átjárhassák. legyen nagy felületű. legyen elégendően merev, hogy ellenálljon a szintézis során alkalmazott nyomásnak. legyenek funkciós csoportjai, melyek reprodukálható módon regálnak

4 A hordozók fontosabb típusai
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A hordozók fontosabb típusai szilika üveggyöngyök (CPG) műanyag cellulóz papír

5 A védőcsoport stratégia kialakítása
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A védőcsoport stratégia kialakítása A szintézis során nem kívánt mellékreakciókat adó csoportokat védeni kell. A védelemre szolgáló csoport lehet: Állandó védőcsoport: a szintézis egész folyamata alatt a növekvő lánc monomerjein marad, csak a kész láncról távolítják el Átmeneti védőcsoport: a láncnövekedés alatt minden monomerbeépítési lépésben eltávolítják A szintézis egész menetét meghatározza a védőcsoportok eltávolításának módszere, azaz hogy a védőcsoport savval bázissal távolítható el Értelemszerűen ellentétes jellegű védőcsoport ellentétes stabilitású kell legyen

6 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A feladat

7 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Szilárd hordozó

8 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Kondenzáció

9 Foszfit csoport aktiválás
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Foszfit csoport aktiválás

10 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Kapcsolási reakció

11 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Védendő csoportok

12 Védendő csoportok 5' helyen levő hidroxil-csoport
bázisokon levő primer aminok foszfor atomon levő hidroxil-csoport.

13 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis A. de Oxyribonucleic Sir A. Midite

14 Átmeneti védőcsoportok
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Átmeneti védőcsoportok

15 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Tartós védőcsoportok

16 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Amidit

17 Átmeneti védőcsoport eltávolítása
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Átmeneti védőcsoport eltávolítása

18 Foszfit csoport aktiválás
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Foszfit csoport aktiválás

19 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Kapcsolási reakció

20 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Capping

21 Foszfit csoport oxidálása
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Foszfit csoport oxidálása

22 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Reakcióciklus

23 Mikronalalitikai kurzus
Mikronalalitikai kurzus szilárd fázisú szintézisek-oligonukleotidszintészis Hasítás