Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

1 A komplement rendszer gyakorlati vonatkozásai (ÁOK 2012) Buzás Edit Fülöp A. K. (Szerk.): Immunológiai szemináriumok, 4. fejezet.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "1 A komplement rendszer gyakorlati vonatkozásai (ÁOK 2012) Buzás Edit Fülöp A. K. (Szerk.): Immunológiai szemináriumok, 4. fejezet."— Előadás másolata:

1 1 A komplement rendszer gyakorlati vonatkozásai (ÁOK 2012) Buzás Edit Fülöp A. K. (Szerk.): Immunológiai szemináriumok, 4. fejezet.

2 2 Rövid tartalom Bevezetés Az aktivációs utak mérése –Aktivitás –Komponensek A komplement aktivitás mint eszköz (mérés komplement aktiválás segítségével) A komplement aktiváció szabályozásának betegségei –Egy példa

3 3 A komplement rendszer A veleszületett immunitás szolubilis molekuláris rendszere. A komplement rendszer fehérjéi limitált proteolízissel kaszkádszerűen aktiválják egymást A komplement rendszer fő effektor funkciói: a pathogének lízise opszonizáció a pathogén eliminációja immunkomplexek, apoptotikus testek és nekrotikus sejttörmelék eltávolítása gyulladáskeltő hatás

4 4 C4bC2b C2b C2a Klasszikus útvonal Lektin útvonal Alternatív útvonal Membrane attack complex (MAC)

5 5 A szövettenyésztésben alkalmazott magzati borjúsavót miért célszerű 56 o C-on 30 ‘-ig inkubálni? A szérum komplement tartalmának inaktivációja a cél (mely révén pl. komplement mediálta sejtlízis és/vagy opszonizáció következhetne be in vitro)

6 6 Mire utalhat az alábbi kísérlet eredménye? birka vvt + anti birka vvt antitest birka vvt + anti birka vvt antitest + humán szérum birka vvt + anti birka vvt antitest + 56 o C 30’-ig előinkubált humán szérum A szérum komplement tartalmának hatására az antitestek által kötött vörösvértestek lízise következik be (Hgb szabadul ki). Hő hatására a komplement inaktiválódik.

7 7 Értéke annak a szérumhígításnak a reciproka, mely az antitesttel fedett birka vvt-k 50% -át lizálja. A CH50 mérés a klasszikus komplement aktiváció mérésére alkalmas. Azt tükrözi, mely mértékben képes a szérum komplement tartalma birka vvt-ket lizálni. Értéke csökken, ha az egyes komplement fehérjék hiányoznak (komplement deficiencia) vagy felhasználódnak (pl. bizonyos vasculitisekben). Össz-komplement aktivitás mérés (CH50 teszt)

8 8 Össz-komplementtitrálási módszerek alapelvei Hemolitikus teszt CH50 ekvivalens ELISA Liposzóma- immunassay ábra A CH50/ml érték kiszámítása

9 9 Normál komplement értékek Szérum CH50: CH50 egység Testnedvekben: az előző 1/3-a, ¼-e C1 szint:16-33 mg/dL C3 szint: férfi: mg/dL nő: mg/dL C4 szint: férfi: mg/dL nő: mg/dL

10 10 Az emelkedett vagy csökkent CH50 érték lehet a gyakoribb? A leggyakrabban emelkedett érték mérhető, hiszen a legtöbb komplement fehérje akutfázis fehérje is egyben. A komplement fehérjék hiánya vagy szignifikánsan csökkent szintje rekurrens sinopulmonaris bakteriális fertőzésekre, Neisseria által okozott meningitisre vagy sepsisre hajlamosít.

11 11 Mire utalhat a csökkent CH50 érték? Primér hiány: genetikai Szekunder hiány: elégtelen termelődés vagy fokozott felhasználás (A CH50 értéke gyakran csökken immunkomplex megbetegedésekben, pl. SLE.)

12 12 Mit mondhatunk ki teljes biztonsággal, ha az összkomplement (CH50) érték normál tartományba esik? A normál CH50 érték arra utal, hogy valamennyi komplement komponens (C1 -C9,) jelen van. Ugyanakkor egyes komplement faktorok szintje akár % -kal is csökkenhet a nélkül, hogy a CH50 aktivitás változna. Minthogy gyulladásos betegségekben a szintézis fokozódik, ezért a normál értékek nem jelentik, hogy nincs komplement által közvetített szövetkárosodás.

13 13 Melyik komplement fehérje van jelen a legnagyobb koncentrációban? C3 C4bC 2b C2b C2a

14 14 Mire utal a C3 és C4 együttes csökkenése? Klasszikus komplement aktivációra utal. C4bC2b C2b C2a

15 15 Mire utal, ha a C3 szint csökken a C4 érték viszont normál tartományba esik? Az alternatív út aktiválódását jelzi C4bC2 b C2b C2a

16 16 A betegek szérumszintje normál tartományba esik vagy emelkedett. Miért? Csökkent CH50 titer és komplement fehérje szint jellemzi pl. a rheumatoid arthritises vagy gonococcus arthritises synoviális folyadékmintákat. Milyen lehet a betegek szérumszintje?

17 17 A komplement rendszert vizsgáló további módszerek I. Alternatív komplement aktiváció vizsgálható, ha a elvonjuk a klasszikus és MBL úthoz szükséges Ca 2+ ionokat a Ca- kelátor EGTA-val, és feleslegben biztosítjuk az alternatív aktivációhoz szükséges Mg 2+ ionokat

18 18 A komplement rendszert vizsgáló további módszerek II. Az MBL útvonal vizsgálható, ha a C1q-t blokkoljuk antitesttel (Mab 2204), és kizárjuk az alternatív út lehetőségét (mely >1% savó mellett működik), s így 0,1%- 1% savókoncentráció között az MBL út mérhető

19 19 További vizsgálómódszerek a komplement komponensek mérésére ELISA: Pl. C3 mennyisége Komplementaktivációs ELISA Komplement fehérjék expressziója: RT- PCR Komplement receptor expresszió kimutatása: RT-PCR, FACS

20 20 Komplement kötésen/ felhasználódásán alapuló vizsgálati módszerek

21 21 Immunkomplexek kimutatása/mérése komplement-fixációs (-konzumpciós) teszttel IC

22 22 Immunkomplex ( IC) kimutatása ELISA-val IC

23 23 A megfelelő HLA-specifitású ellenanyag hozzákötődik a sejtekhez, aktiválja a komplementet: lízis. A tipizáló savók többször terhes nőkből vagy többszörös vérátömlesztésen átesett személyektől származhatnak HLA-tipizálás komplement függő mikrolimfocitotoxicitási teszttel Terasaki plate

24 24 A komplement rendszer aktiválódási útvonalai és szabályozásuk

25 25 A komplementrendszer betegségei a kaszkád molekulák primer (genetikai eredetű) deficienciái Nem feltétlenül a sejtek lízise a leglényegesebb fukciója a komplement rendszernek!?

26 26 A komplementrendszer betegségei – szabályozó molekulák, receptorok

27 27 Örökletes angioneurotikus ödéma (HANO) (örökletes C1INH hiány) Ugyanaz a személy krizis alatt és után

28 28 17 éves lány súlyos hasi fájdalmakkal (gyakori, éles görcsök, hányás) appendectomia – appendix normális volt a családban már korábban is előfordult a betegség Dg: HANO ? a C1INH szintje a normál érték 16%-a (ELISA) Naponta szedhető steroid hatására a tünetek gyakorisága és súlyossága csökkent Tisztított C1INH – időnként i.v. Fő tünetek: bőr, belek, légutak duzzanata súlyos akut hasi fájdalom, hányás ödéma különféle helyeken (gégeduzzanat – fulladást okozhat)

29 29 C4bC2b C2b C2a A komplement rendszer aktivációja gyakran hisztamin és kemokinek felszabadulását eredményezi ( fájdalmat, hőemelkedést és viszketést okozva). A HANO-s betegek ödémája miért nem tartalmaz celluláris komponenseket és miért nem okoz viszketést? HANO-ban az aktív C1 miatt a C4b és a C2b szabadon termelődik a plazmában. A C4b gyorsan inaktiválódik, ha nem tud azonnal sejtfelszínhez kötődni. A C4b és C2b így folyamatosan elhasználódik, de nem keletkezik C3/C5 konvertáz, ezért a C3 és C5 hasítása elmarad, nem jön létre C3a és C5a sem. A komplement aktiválást követő hisztamin felszabadulást (hízósejt degranuláció) a C3a okozza, a fő kemotaktikus hatású komplement komponens pedig a C5a. Stop

30 30 A C1-INH gátolja a kinin kaszkádot is! Mivel C5a és C3a nem termelődik, nem azok gyulladáskeltő hatása felelős az ödémáért.

31 31 Mely komplement komponensek szintjének csökkenése várható? Miért? C2 és C4, mert ezeket az állandóan aktív C1 hasítja (diagnosztikai marker) C4bC2b C2b C2a

32 32 Mi történik az alternatív úttal? Ez az út nem érintett, mert itt a C1 nem játszik szerepet. C4bC2b C2b C2a

33 33 Milyen a terminális komponensek szintje? A terminális komponensek szintje normális. C4bC2b C2b C2a

34 34 Miért nem fogékonyabbak a fertőzésekkel szemben? Az alternatív útvonal érintetlen, így ez kompenzál. C4bC2b C2b C2a

35 35 Ha anafilaxia okozza (hisztamin felszabadulás), akkor azonnal reagálni fog adrenalinra/epinefrinre, és csalánkiütés is megfigyelhető. HANO-ban az adrenalin nem hat, intravénás C1INH kell. Hogyan lehet eldönteni, hogy anafilaxiás reakció vagy örökletes angioödéma okozza-e a felső légutak elzáródását (gégeödémát)?

36 36 1) A természetes immunválasz melyik komponensével (komponenseivel) találkozik először az extracelluláris kórokozó legnagyobb valószínűséggel? 2) A komplement rendszer milyen effektor mechanizmussal járul hozzá a pathogén eliminációjához? 3) Hogy nevezik a célsejt lízisét okozó makromolekuláris komplexet? 4) Mi az opszonizáció? 5) Mi szükséges az fagocitózishoz még az opszoninen kívül? Ellenőrző kérdések 6 ) Milyen receptorok vehetnek részt a patogén fagocitózisában? 7) Mi a szerepe a kis komplement komponenseknek?


Letölteni ppt "1 A komplement rendszer gyakorlati vonatkozásai (ÁOK 2012) Buzás Edit Fülöp A. K. (Szerk.): Immunológiai szemináriumok, 4. fejezet."

Hasonló előadás


Google Hirdetések