Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

1 IMMUNSZEROLÓGIA, AGGLUTINÁCIÓ, PRECIPITÁCIÓ. 2 Agglutináció és precipitáció agglutináció precipitáció, immunkomplex képződés.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "1 IMMUNSZEROLÓGIA, AGGLUTINÁCIÓ, PRECIPITÁCIÓ. 2 Agglutináció és precipitáció agglutináció precipitáció, immunkomplex képződés."— Előadás másolata:

1 1 IMMUNSZEROLÓGIA, AGGLUTINÁCIÓ, PRECIPITÁCIÓ

2 2 Agglutináció és precipitáció agglutináció precipitáció, immunkomplex képződés

3 3 Immunkomplex és precipitátum Az antigénnek az ellenanyaggal alkotott (oldható) komplexei. A komplexképződés pillanatszerűen is lejátszódhat, egyensúlyra vezető folyamat. Nem azonos a precipitátummal! A precipitátum az immunkomplexekből fizikai-kémiai folyamatok során keletkező oldhatatlan csapadékot jelenti. Időigényes folyamat. antitest antigén

4 4 Központi idegrendszer Szív Pleura, pericardium Vese komplikációk terhesség során Ízületek Erek, FVS, VVT, PLT Bőr Szervet veszélyeztetheti Általában enyhébb Wallace in Arthritis and Allied Conditions, 13 th Ed V2, p1319, Koopman, ed Szisztemás lupus erythematosus számos szervet megbetegíthet immunkomplexek szerepe

5 5 FcγRIIIa 176aa valin/fenilalanin IgG1, IgG3 – IC clearance lupus nephritis Csökkent immunkomplex clearance szerepe SLE-ben immunkomplex komplement klasszikus út aktiváció FcγRIIa 131aa hisztidin/arginin IgG2 kötés gyengébb – IC clearance lupus nephritis

6 6 antigéntúlsúly ellenanyagtúlsúly sok csapadék kevés csapadék növekvő ellenanyag mennyiség EKVIVALENCIA ellenanyagtúlsúly antigéntúlsúly növekvő antigén mennyiség sok csapadék kevés csapadék Precipitációs görbe

7 7 MÓDSZEREK Immundiffúzió: (agargélben, antigén, antitest precipitációs reakcióján alapul) - radiális egyszerű (ellenanyagot vagy antigént keverik a gélbe) - radiális kettős (mindkét komponens diffundál a gélben) Elektroforézis: - immunoelektroforézis (többkomponensű antigént elektroforetizálják, majd polivalens ellenszérummal reagáltatják.) - rakéta elektroforézis (ellenanyagot gélbe keverik, antigént elektroforetizálják) - két-dimenziós elektroforézis (elektroforetikus tulajdonságok alapján szétválasztott antigén frakciókat ellenanyag tartalmú gélen újra elektroforetizálják) Turbidimetria (a fényszórással arányos fényintenzitás csökkenését méri) Nefelometria (a szórt fény intenzitását méri)

8 8 Immundiffúziós módszerek poliklonális ellenanyag agaróz gélbe keverve Meghatározandó antigén az agarba vájt lyukakban pl. immunglobulin meghatározásra használható A kör területe arányos az mért fehérje koncentrációjával. az antigén és az ellenenanyag találkozása precipitációs ív kialakulását eredményezi

9 99 Radiális kettős immundiffúzió Immundiffúziós módszerek Antigének közös determinánsainak vizsgálata Az antigént tartalmazó lyuktól egyenlő távolságra elhelyezett ellenanyagok különböző koncentrációban. Az antigén és az ellenananyag találkozása precipitációs ív kialakulását eredményezi, ebből az ellenanyag koncentrációra következtethetünk. Fordítva, az antigén koncentráció meghatározására is alkalmas a módszer.

10 10 Szérum elektroforézis

11 11 Szérum elektroforézis

12 12 Szérum elektroforézis Napi rutinban alkalmazzuk, különösen fontos magas szérum összfehérje szint esetén. Eset: 80 éves nő, fő panasza igen heves derékfájdalom. Laborok: We:130 (normál<20); CRP:4 (normál <5), osteoporosis nincs. LS gerinc RTG felvételen kompresszió látható. Hematológiai vizsgálat, (további labor és csontvelő vizsgálatok) diagnosis: myeloma multiplex. A beteg kezelést megelőző és 9 hónapos kezelést követő görbéje M komponens redukció jól látható. kezelés előttkezelés után

13 13 Immunelektroforézis Agargélben végzett elektroforézis és kettős immundiffúzió kombinációja.

14 14 Immunelektroforézis polivalens immunszérum antiszérum szérumfehérjék + - Immunprecipitáció Az antigén-ellenanyag kapcsolódást követően képződő oldott immunkomplexeket szilárd fázishoz kötött anti- immunglobulin vagy protein A/G bakteriális fehérjék segítségével oldhatatlan formában izolálják. A szilárd fázishoz kötött immunkomplexek további elúciós lépések eredményeként, oldott állapotban visszanyerhetők.

15 15 Immunelektroforézis

16 16 Rakétaelektroforézis a precipitációs csúcsok magassága arányos az AG koncentrációjával

17 17 Szerológiai módszerek alkalmazása Immundiffúzió: pl: bakteriális, virális és gomba antigének jellemzésére - radiális egyszerű (Mancini-módszer): antigének mennyiségének összehasonlító vizsgálata, szérum fehérjék ( immunoglobulin izotípusok [IgM, IgG, IgA], akut fázis fehérjék, transzferrin, komplement komponensek) mennyiségi meghatározása különböző testfolyadékokban, ellenanyagok mennyiségi meghatározása - radiális kettős (Ouchterlony módszer): precipitációs ekvivalencia zóna becslése, precipitáló ellenanyagok relatív szintjének (titerének) meghatározása, állandó ellenanyag koncentráció mellett az antigén mennyisége is megbecsülhető Elektroforézis: - immunoelektroforézis: szérum fehérjék frakciókra való elválasztása, plazmasejt rendellenesség (myeloma multiplex, elsődleges amiloidózis) során képződő, monoklonális eredetű immunoglobulinok kimutatása - rakéta elektroforézis: antigén/ellenanyag koncentráció meghatározása - két-dimenziós elektroforézis: elektroforetikus mobilitás alapján szétválasztott frakciók (pl: szérum fehérjék) koncentrációjának meghatározása, szérum, vizelet, cerebrospinális folyadék fehérje összetételének kvantitatív és kvalitatív vizsgálata.

18 Immunfixáció koncentrált vizeletminták Az eljárás menete: elektroforézis - fixálás ill. inkubálás antiszérummal- szárítás – festés. A napi rutin részét képezi az immunlaborokban.

19 19 Immunfixáció denzitometriával egészséges monoklonális gammopathia

20 20 Turbidimetria és nefelometria Turbidimetria: (érzékenység: 50 µg/ml) szérumban, liquorban nagy mennyiségben jelen lévő fehérjék vizsgálata. Fényintenzitás csökkenést mérjük. Nefelometria: (érzékenység: 1 µg/ml) kis koncentrációjú szérum és liquor fehérjék, gyógyszer szintek mérése. A szórt fény intenzitását méri. Mindkét módszer szolubilis fehérjék vizsgálatára alkalmas, napi rutinban elterjedt. Vizsgálandó antigénre specifikus antitest és az antigén által létrehozott immunkomplex fényszórásán alapul mindkét módszer. Napi rutinban is alkalmazott vizsgálatok.

21 21 Agglutináció típusai, gyakorlati alkalmazás A vörös- és fehérvérsejtek valamint baktériumok sejtfelszíni antigénjeivel (legalább mikroszkópikus méretű antigének) reagáló ellenanyagok a sejtek összeállását, agglutinációját idézhetik elő. Fajtái: direkt: Ellenanyagok kötődését az antigénhez a sejtek összecsapódása kíséri (pl. AB0 vércsoport antigének) - főleg IgM indirekt : Az antigén determinánsok elrendeződése nem teszi lehetővé az direkt összecsapódást. DE! A sejtek összecsapódása a kötött ellenanyagok Fc részéhez kötődő második ellenanyaggal kiváltható (pl. D vércsoport antigén(Rh)) (IgG) passzív: Megfelelően kezelt vörösvértestekhez vagy latex részecskékhez haptének vagy antigének kapcsolhatók, és ezekre specifikus ellenanyaggal agglutinálhatók (rheumatiod arthritis). A szérumban a saját IgG-vel reagáló IgM és IgG autoellenanyagok (RF) jelennek meg.

22 22 - reakció gyors ülepedés - reakció gyors ülepedés + reakció lassú ülepedés Az antigén-ellenanyag arány hatása a hemagglutinációra

23 23 Direkt agglutináció pl. AB0 vércsoport meghatározás ellenanyag (antitest) vörös- vértest

24 24 Vörösvértestek hemagglutinációja 1-9- anti birka VVT antitest hígitási sor; kontroll

25 25 Donorválasztás az ABO-vércsoport antigének alapján Ma már csak elvi lehetőség, rutinban kizárólag csoportazonos (AB0 és Rh) vér transzfundálható!

26 26 Indirekt agglutináció pl. Rh vércsoport meghatározás

27 27 Vércsoport meghatározás Hagyományos csempés meghatározásMicroplate-s meghatározás Mikrooszlopos technika Ágy melletti gyorsteszt

28 28

29 29 Az agglutináció in vivo következményei ABO inkompatibilitásintravascularis haemolysis ( komplement mediálta hemolízis) Rh inkompatibilitáserythroblastosis fetalis ( vvt-ek opszonizálása, majd MF –ok, granulociták általi fagocitózis) Rh profilaxis Ha az első Rh+ magzat születését követően 72 órán belül az anyai szervezetbe anti-D Ea-t juttatnak, megelőzhető az anyai ellenanyagok képződése.

30 30 iwannabeadr.com/.../mod/resource/view.php?id=116 Direkt Coombs teszt "pozitív" eredmény: a vvt-hez kapcsolódott antitestek jelenlétét jelzi. (DAT) betegből

31 31 Direkt antiglobulin teszt Mikro-oszlop teszt

32 32 Mikro-oszlop agglutin á ci ó s teszt

33 33 iwannabeadr.com/.../mod/resource/view.php?id=116 Várandós anyának/ recipiensnek indirekt antiglobulin teszttel lehet az vvt antigén elleni antitestjeit mérni Anyai szérum Rh+ sejtek

34 34 Passzív agglutináció CRP latex gyorsteszt Rheumatoid faktor latex teszt HCG latex teszt

35 35 Passzív agglutináció (diagnosztikai/indikátor módszer) Rheumatoid arthiritis: a szérumban a saját IgG-vel reagáló IgM autoellenanyagok (RF) jelennek meg. RF: reumatoid faktor

36 36 Hemagglutináció ellenanyagok jelenléte nélkül? Igen, virális fehérjékkel pl.: influenza, mumpsz pl. vírus ellenes ellenanyagok kimutatása Az agglutinációt gátló ellenanyagok a receptor kötést (sziálsav) is gátolják, tehát vírusneutralizáló sajátságúak (Nem immunológiai reakció!!!)

37 37 Gyakorlati alkalmazás direkt agglutináció:pl. ABO vércsoport meghatározás tiphoid láz kimutatása Widal teszt (baktériumokat agglutinál a páciens széruma) indirekt agglutináció:pl. anti-D Ea jelenlétének kimutatása Coombs teszt passzív agglutináció:pl. rheumatoid faktor kimutatása


Letölteni ppt "1 IMMUNSZEROLÓGIA, AGGLUTINÁCIÓ, PRECIPITÁCIÓ. 2 Agglutináció és precipitáció agglutináció precipitáció, immunkomplex képződés."

Hasonló előadás


Google Hirdetések