Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Tömegspektrométer mint folyadékkromatográfiás detektor Bodai Zsolt 2012.12.04.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Tömegspektrométer mint folyadékkromatográfiás detektor Bodai Zsolt 2012.12.04."— Előadás másolata:

1 Tömegspektrométer mint folyadékkromatográfiás detektor Bodai Zsolt

2 Tömegspektrometria (ism.) Elve: Molekulák, atomok ionizációja, szétválasztása tömeg/töltésük alapján (vákuumban) majd ezen ionok detektálása Jelentősége: Analitika Érzékeny Specifikus (SIM) vagy univerzális (SCAN) Gyors Kevés minta mennyiség Jól kombinálható elválasztástechnikai módszerekkel Szerkezet vizsgálat Fragmentáció Izotóp arány Pontos tömeg 2

3 LC-MS előnye és hátrányai GC-MS-sel szemben Nem illékony Hőérzékeny molekulák is vizsgálhatóak Széles tömegtartományban Egyéb folyadékkromatográfiás detektorokkal szemben(pl. DAD,ELSD,RID) Tömeg specifikus válaszjel, szerkezetvizsgálat, azonosítás (csaknem) Univerzális (SCAN) vagy specifikus (SIM vagy MRM) Sokszor érzékenyebb DE!!! Roncsolja a mintát Költséges beszerezni és fenntartani Ionelnyomás és ionerősítés(ESI) 3

4 Tömegspektrométerek sematikus felépítése Mintabevitel Folyadék porlasztása Bemenet Szilárd Folyadék Gőz Analizátor Tömeg szerinti szétválasztás Ion detektálás Detektálás Adatelemzés Ionizáció/ deszorpció Ionforrás + Ionok képződése (töltéssel rendelkező molekulák) 4

5 Ionforrások Manapság a három legelterjedtebb Elektroporlasztásos (ESI) Atmoszférikus nyomáson történő kémiai ionizáció (APCI) Atmoszférikus nyomáson történő foto ionizáció (APPI) Mind légköri nyomáson történő ionizációInterface Lágy ionizációs technikák 5

6 Elektroporlasztásos ionizáció (ESI) 6 Ionos és könnyen ionizálható vegyületekre pH jelentős szerepe! Illékony pufferek (Pl.: Ammónium-acetát v. –formiát/ecetsav v. hangyasav) Alacsony áramlási sebesség -> kis belső átmérőjű oszlopok Pozitív módban látható ionok (bázikus vegyületek) [M+H] +, [M+NH 4 ] +, [M+Na] +, [M+K] + Negatív módban látható ionok (savas vegyületek) [M-H] - Oxprenolol

7 ESI kV

8 AB Sciex régi ESI ionforrás 8

9 Kémiai ionizáció (APCI) 9 Nem ionos vegyületekre Pseudo molekulaionok Nagyobb áramlási sebességekkel is Korona kisülés (5-10kV)

10 APCI 10

11 Régi AB Sciex APCI ionforrás 11

12 Fotoionizáció (APPI) APCI-hoz hasonlóan elporlasztjuk az eluenst fűthető ionforrásban. Az ionforrásba a vivőgáz segítségével bejuttatunk ún. doppáns vegyületet. UV sugárzás hatására ionizálódnak a doppáns molekulák és ún. „fotoionok” jönnek létre. A fotoionok ion-molekula láncreakciókat iniciálnak, amely során létrejönnek az ionizált molekulák [MH]+ formában (proton transzfer) vagy [M]+ (töltés transzfer). 12

13 APPI 13

14 Ionforrások alkalmazhatósága API-Electrospray GC/MS Particle Beam APCI ,000 10,000 ApolárisNagyon poláris FAB Thermospray Molekulatömeg 14

15 Interface 15

16 Analizátorok  Minden tömegspektrométer az ionokat vákuumban a tömeg/töltés (m/z) arányuk szerint választja szét.  Gyakran használt analizátorok: -Kvadrupólus Egy kvadrupólus (single-Q) Hármas kvadrupólus (triple –Q 3 ) -Repülési idő (Time of flight-TOF) -Ioncsapdás (Ion trap) -Mágneses és vagy elektromos szektor (Magnetic and electric sector) -Fourier transzformációs ion ciklotron (Fourier transform ion cyclotron) -Orbitrap 16

17 Kvadrupól analizátor (V = +V ~ cos(  t)) és -(V = +V ~ cos(  t) Ahol: V = az DC feszültség ;V ~ cos(  t) AC feszültség. Spektrum felvételkor:  változik és az V = és a V ~ konstans; 17

18 Repülési idő analizátor (TOF) E k : kinetikus energia m: tömeg v: sebesség z: töltés U: gyorsító feszültség d: távolság t: idő 18

19 Felbontás és tömegpontosság Pl: valós tömeg: 1000 Mért tömeg: Tömegpontosság 100 ppm Alacsony felbontású MS nem tud pontos tömeget mérni 19

20 Kvadrupól ioncsapda analizátor (QIT) Egy gyűrű elektródból és két darab hiperbolikusan kiképzett elektródból áll; Milliszekundumtól órás tartózkodási időt tesz lehetővé He atmoszférában kb torr nyomáson; A QIT kis mérete, érzékenysége, gyorsasága teszi a második leggyakrabban alkalmazott ion analizátorrá -Könnyen csatlakoztatható más analizátorhoz és alkalmas pozitív és negatív ionok szimultán tárolására; 20

21 Tandem tömegspektrometria Lágy ionizációs technikák – kevés fragmens MS n Szerkezeti információk Javuló érzékenység, szelektivitás Jobb kimutatási határok, kevesebb interfrencia Tandem tömegspektrometira Térben (kvad, TOF, szektor) Időben (IT, FT-ICR) 21

22 Tandem tömegspektrometria Aktiválás Ütköztetés gázzal (CID - collison induced decomposition) Ütköztetés felülettel (SID – surface) Ütköztetés fotonokkal 22

23 MS/MS Scan módok 23

24 Kiválasztott ionfolyamat követése (SRM) Mindkét (Q1 és Q3) kvadrupól SIM üzemmódban Egy átmenet követése SRM Több átmenet követéseMRM (multiple reaction monitoring) 24

25 MRM kromatogram OxprenololM= 265 g/mol 1.Átmenet 266 ->72 2.Átmenet 266->116 25

26 SCAN, SIM és MRM kromatogrammok összehasonlítása Oxprenolollal 100 ng/ml-re adalékolt Duna víz SCAN, SIM, és MRM módban megmérve 26

27 Kérdések? 27


Letölteni ppt "Tömegspektrométer mint folyadékkromatográfiás detektor Bodai Zsolt 2012.12.04."

Hasonló előadás


Google Hirdetések