Monoklonális antitestek gyártása

MAB-üzem elrendezési képe

Bioreaktorok Emlős sejtek félfolytonos, vagy folytonos, sejtvisszatartásos fermentációja. Hígítási sebesség: 0,5-1,0 /nap Lassú, többhetes folyamat.

MAB-előállítás folytonos fermentációval

Sejtek elválasztása Az állati sejteket 0,65 μm pó-rusméretű mikroszűrővel vá-lasztják el. A szűrőlepény le-rakódásának megakadályo-zására a levet diaszűrőben cirkuláltatják (keresztáramú szűrés). Az oldott fehérjéket a sejtek közül sóoldattal (PBS = phosphate buffered saline, foszfáttal pufferolt só-oldat) mossák ki.

Mikroszűrő membránok Üregesszál (= „hollow fiber”) modulok.

Affinkromatográfia Az antitesteket olyan affinkro-matográfiás tölteten kötik meg, amelynek liganduma a Sta-phylococcus Protein A fehérjé-je. Ez az antitestek közös, Fc régiójához kapcsolódik, azaz minden antitestet megköt, más fehérjéket viszont nem.

A MAB fehérjeszerkezete

Protein A-affinkromatográfia Előnyei: Szelektíven köti az antitesteket Nagy a kapacitása (15–30 g/liter töltet) Hátrányai: Drága: 8000–10 000 USD/liter (300 l-es oszlop esetén 10 000 USD/l-rel számolva egy töltet ára 3 millió $, amivel csak 15-20 tisztítási művelet végezhető el.) Toxikus Továbbjuthat, szennyezhet az elválasztás során Az oszlop tisztítása nehézkes

Ipari méretű kromatográfiás oszlop, d » h

Ioncsere kromatográfia 1 Erős kationcserélő gyantán. Cél: a főtermék megkötése, a szennyező anyagok kimosá-sa, azután a MAB elúciója. Kiegyenlítő puffer: pH = 4,5 Mosás: pH = 5,0 pH-gradiens: pH 5,4→8,0 A kolonna regenerálása: cc sóoldattal

MAB kromatogramja kationcserélőn

Ioncsere kromatográfia 2. Tisztítás anioncserélő gyantán. Cél: a szennyező anyagok meg-kötése, a főtermék kötődés nél-kül átmegy az oszlopon. Kiegyenlítő puffer: pH = 7,0 Elúció: pH= 7,0 (75 mM foszfát) A kolonna regenerálása: sóol-dattal (0,5 M foszfát)

Vírusok eltávolítása/inaktiválása

A MAB-oldat koncentrálása ultraszűréssel A fermentlé MAB-koncentráci-ója 100–150 mg/l. A végter-mékben 10-20 g/l-re van szük-ség, a koncentrálás legkímé-letesebb módja az ultraszűrés. A MAB móltömege 180-190 kDa, ez alatti vágású memb-rán szükséges.

Formulázás, szűrés Hozzáadják a végső formu-lázáshoz szükséges anya-gokat: Puffer: nem illékony, pl. PO4 ionerősség beállítása: NaCl Fagyvédő anyagok: pl. sza-haróz, mannit, glicerin Töltőanyag: pl. glicin

Egy kiszerelt MAB-készítmény összetétele

A monoklonális antitestek piaca Robbanásszerűen bővül. Jelenleg ~100 MAB-készítmény van forgalomban, de ~500 van engedélyezés alatt az FDA-nál. Előrejelzések szerint 2012-re az összes biológiai gyártású gyógyszer piacának felét a MAB-ok fogják kitenni (árbevé-telben kifejezve).