PHB szintézise (PolyHydroxyButyrate) Előadás 1 PHB szintézise (PolyHydroxyButyrate)

Először két oldatot vezetünk be a fermentaloba. “A” oldat (1 liter oldathoz) (gramm) Karbamid (1,0), Élesztőkivonat (0,16), KH2PO4 (1,52), Na2HPO4 (4,0), MgS04, 7H2O (0,52), CaCl2 (0,02), Glükóz (40) “B” oldat (1 liter oldathoz) (gramm) ZnSO4 ~ 7H2O (0,13), FeSO4 ~ 7H2O (0,02), (NH4) 6Mo7O24. 4H2O(0,06) H3BO3 (0,06)

Először két oldatot vezetünk be a fermentaloba. B oldat A oldat 2 mL of culture 200 mL 20 µL

Helyezd a fermentalot a vízbe

A víztartaly felszerelése Forgó sebesség (minimáliisra allitva) Felső keverő Keverő Hőmérséklet szabályozó : Alacsony 36 ° C Magas 38 ° C Helyezze be a keverőfejet a fermentaloba

A fermentalot keverjük és 37 ° C-on melegítjük 45 órán át.

45 óra elteltével: Vegye ki a fermentalot a víztartalybol. Hagyjuk 15 percig “decant” A felülúszót óvatosan 150 ml-vel “supernatant” pipettával. A maradékot centrifugáljuk (15 perc 10000 fordulat / perc)

A pelleteket tartsuk a csövekben. Centrifugálás után: A pelleteket tartsuk a csövekben. Adjunk hozzá a pelletekhez 10 ml nátrium-hipokloritot. Inkubáljuk az elegyet 60 ° C-on 45 percig. 10 mL

Az elegyet 5000 fordulat / perc sebességgel 10 percig centrifugáljuk. Centrifugálás után: A pelleteket tartsuk a csövekben (discard the supernatant) 5 ml desztillált vízzel mossuk. Az elegyet 5 percig centrifugáljuk 5 mL

A pelleteket tartsuk a csövekben (a felülúszót el kell dobni????) Centrifugálás után: A pelleteket tartsuk a csövekben (a felülúszót el kell dobni????) 5 ml acetonnal mossuk. Az elegyet 5 percig centrifugáljuk 5 mL

A pelleteket tartsuk a csövekben (a felülúszót el kell dobni????) Centrifugálás után: A pelleteket tartsuk a csövekben (a felülúszót el kell dobni????) 5 ml metanollal mossuk. Az elegyet 5 percig centrifugáljuk 5 mL

A pelleteket tartsuk a csövekben Centrifugálás után: A pelleteket tartsuk a csövekben A pelleteket üveg Petri-csészébe helyezzük át. (Under a filtered fume hood )Füstgázfedél alatt mérjünk 5 ml kloroformot. Toltsuk at Petri-csészébe. 5 mL

Töltsük az üveg Petri-csészét egy felemelt tölcsér alá, ami egy Venturi-vákuumhoz(?) van csatlakoztatva. A keveréket forgó mozgással keverjük.

Ha a kloroform teljesen elpárolog: Eltávolíthatja a műanyag fóliát: